紫外可见分光光度法培训1

含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比较法，
对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2 份。平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。 作鉴别或检查可取样品1份。
注意事项
供试品溶液的浓度要求
除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的 吸光度以在0.3～0.7之间为宜，吸光度读数在此 范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范 围，配制合适的读数浓度。
光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，它 可用于紫外、可见及红外光域，而且在整个波长 区具有良好的、几乎均匀一致的分辨能力。它具 有色散波长范围宽、分辨本领高、成本低、便于 保存和易于制备等优点。缺点是各级光谱会重叠 而产生干扰。 入射、出射狭缝，透镜及准光镜等光学元件 中狭缝在决定单色器性能上起重要作用。狭缝的 大小直接影响单色光纯度，但过小的狭缝又会减 弱光强。
紫外-可见分光光度计的结构
（五）数据系统 它的作用是放大信号并以适当方式指示或 记录下来。现在一般的紫外可见分光光度计有计 算机控制和主机单片机控制两种类型，功能基本 类似。
紫外-可见分光光度计的类型
三种类型：单光束分光光度计、双光束分光光 度计和比例双光束分光光度计。 双光束分光光度计 经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两 束光一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能 自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比， 经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记 录下来。 双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱 曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品池， 还能自动消除光源强度变化所引起的误差。
吸收系数（
235（最小）
） 124.5 123.0～126.0
257（最大）
144.0 142.8～146.2
313（最小）
48.6 47.0～50.3
350（最大）
106.6 105.5～108.5
E
1% 1cm
允许范围
• 杂散光的检查
试剂 碘化钠 亚硝酸钠 浓度（g/ml） 1.00 5.00 测定用波长（nm） 220 340 透光率（%） <0.8 <0.8
然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。
注意事项
吸收池要求
使用的石英吸收池或玻璃吸收池必须洁净。当吸收池 中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的吸光度，如
吸光度相差在0.005范围内可配对使用，否则需清洗。
取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装样品溶液的 体积以池体积的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透 光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，
注意事项
狭缝谱带宽度要求
选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带半高宽 的10%，否则测得的吸光度值会偏低，或以减小狭缝宽度
时供试品溶液的吸光度不再增加为准，对于中国药典紫外
测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但当吸收带的半 高宽小于20nm时，则应使用较窄的狭缝，例如青霉素钾及 钠的吸光度检查需用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸光 度会偏低。
T: e: l: C:
透射率 摩尔吸收系数 光程长 浓度
紫外-可见分光光度计的结构
紫外-可见分光光度计的基本结构是由七个部分组成：
•光源 •单色器 •样品室（吸收池） •检测器 •记录仪 •显示系统 •数据处理系统。
紫外-可见分光光度计的结构
（一）光源 对光源的基本要求是应在仪器操作所需的光 谱区域内能够发射连续辐射，有足够的辐射强度 和良好的稳定性，而且辐射能量随波长的变化应 尽可能小。 热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和卤钨 灯，钨灯和碘钨灯可使用的范围在340－2500nm ； 气体放电光源用于紫外光区，如氘灯，它可在 160－375nm范围内产生连续光源。氘灯的灯管内 充有氢的同位素氘，它是紫外光区应用最广泛的 一种光源。
样品测定操作方法
吸收系数测定
按各品种项下规定的方法配制供试品溶 液，在规定的波长测定其吸光度，并计算吸 收系数，应符合规定范围。
E E
1% 1cm
1% 1cm
样品测定操作方法
鉴别及检查 按各品种项下的规定，测定供试 品溶液的最大及最小吸收波长，有的 并须测定其在最大吸收波长与最小吸 收波长处的吸光度比值，均应符合规 定。
注意事项
pH值一致性置要求
用于制剂含量测定时，应注意供试液与对照液的pH值 是否一致，如pH值对吸收有影响，则应调溶液的pH值一致
后再测定吸光度。
（四）检测器 检测器的功能是检测信号、测量单色光透过 溶液后光强度变化的一种装置。 常用的检测器有光电池和光电倍增管等。 硅光电池对光的敏感范围为190-1100nm。但 由于容易出现疲劳效应而只能用于中低档的分光 光度计中。 光电倍增管是检测微弱光最常用的光电元件， 它的灵敏度比一般的光电池要高200倍，因此可 使用较窄的单色器狭缝，从而对光谱的精细结构 有较好的分辨能力。
注意事项
对溶剂的要求
含有杂质的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。 因此，当作溶剂使用时，它们和使用范围均不能小于截止
使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。另
外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。 每次测定时应采用同一厂牌批号，混合均匀的同批溶 剂。
注意事项
称量要求
称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次 数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于5ml。
UV-2450

UV-2450的光学系统
附件的分类
• 比色皿（吸收池） • 池架 • 软件
比色皿
• • • • 材料：石英，玻璃 样品量：常量，微量，超微量 尺寸：长光程，短光程 流通池
注意： 石英池用于可见光区及紫外光区(200-400nm) 玻璃池只能用于可见光区(400-800nm)
紫外-可见分光光度计的结构
（二）单色器 单色器是能从光源辐射的复合光中分出单色 光的光学装置，其主要功能：产生光谱纯度高的 波长且波长在紫外可见区域内任意可调。 单色器一般由入射狭缝、准光器（透镜或凹 面反射镜使入射光成平行光）、色散元件、聚焦 元件和出射狭缝等几部分组成。其核心部分是色 散元件，起分光的作用。单色器的性能直接影响 入射光的单色性，从而也影响到测定的灵敏度度、 选择性及校准曲线的线性关系等。
比色法
供试品本身在紫外-可见光区没有强吸收，或在紫外光区
虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，加入适当的显色剂， 使反应产物的最大吸收移到可见光区。 用比色测定法时，由于显色时影响显色深浅的因素较多， 应取供试品与对照品或标准品同时操作。除另有规定外，比
色法所用的空白系用同体积的溶剂供替对照品或供度品溶液，
为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮 有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸 收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用 溶剂及水冲洗干净，晾干，防尘保存。吸收池如污染不
易洗净时可用用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清
洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏 吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸 附于吸收池表面。
紫外-可见分光光度法培训
2015-08-14
紫外-可见分光光度法是在
一定波长范围内测定物质的吸光
度，用于鉴别、杂质检查和定量 测定的方法。
电磁波的区分
UV光照射到物质上
透射光 I1
入射光 I0
自光源
检测器
光路长度 透射率 T = I0 I1
LAMBERT-BEER定律
吸收 A = log 1 T = eCl
紫外-可见分光光度计的结构
（三）吸收池 吸收池用于盛放分析试样，一般有石英和玻 璃材料两种。为减少光的损失，吸收池的光学面 必须完全垂直于光束方向。在高精度的分析测定 中（紫外区尤其重要），吸收池要挑选配对。因 为吸收池材料的本身吸光特征以及吸收池的光程 长度的精度等对分析结果都有影响。
紫外-可见分光光度计的结构
UVProbe四大模块
• • • • 光度模块－用的最多的模块，用来定量 光谱模块－定性 动力学模块－做化学动力学研究 报告生成器－所见即所得地编辑报告
紫外—可见分光光度计的校正和检定
• 波长准确度（氘灯）
紫外光区±1nm，500nm附近±2nm
• 吸光度准确度（重铬酸钾的硫酸溶液）
波长（nm）
样品测定操作方法
含量测定
对照品比较法
按各品种项下规定的方法，分别配制供试
品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测
成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的
100%±10%以内，用同一溶剂，在规定的波长
处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度。
c样品=A样品×c对照/A对照
样品测定操作方法
含量测定
注意事项
吸收峰位置要求
测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处， 再测几点的吸光度，或者进行一定波长范围内扫描，以核
对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长
作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种 项下规定的波长±2nm以内，否则应考虑试样的同一性、 纯度以及仪器波长的准确度。