云南大理地区汉族和白族VDR基因Fok Ⅰ、Dde Ⅰ位点多态性分布

云南大理地区汉族和白族VDR基因Fok Ⅰ、Dde Ⅰ位点多
态性分布
刘正理;张朋;孟祥科;张爱建;邹久林;郑宝寿;赵佳祥;肖芝松
【摘要】目的分析云南大理地区白族和汉族维生素D受体(VDR)基因Fok Ⅰ、Dde Ⅰ位点多态性分布,并探讨其与其他地区的分布差异.方法应用PCR-RFLP技术,检测云南大理地区81例汉族健康居民和81例白族健康居民的VDR基因Fok Ⅰ、Dde Ⅰ位点多态性,计算其基因型及基因频率分布并进行探讨.结果汉族VDR
基因Fok Ⅰ位点CC、CT、TT基因型的分布频率分别为33.33％、55.56％、
11.11％,C、T等位基因频率分别为61.11％和38.89％,VDR基因Dde Ⅰ位点CC、CG、GG基因型的分布频率分别为67.9％、27.16％和4.94％,C、G等位基因频
率分别为81.48％和18.52％;白族VDR基因Fok Ⅰ位点CC、CT、TT基因型的分布频率分别为22.22％、51.85％和25.93％,C、T等位基因频率分别为48.15％和51.85％,VDR基因Dde Ⅰ位点CC、CG、GG基因型的分布频率分别为75.31％、20.98％和3.7％,C、G等位基因频率分别为85.8％和14.2％.大理地区汉族、白族Fok Ⅰ基因型分布差异有统计学意义(P＜0.05).大理地区汉族、白族Dde Ⅰ基因
型分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论不同地区居民VDR基因Fok Ⅰ、Dde Ⅰ位点多态性分布可能具有自身特点.
【期刊名称】《广东医学》
【年(卷),期】2019(040)010
【总页数】4页(P1424-1427)
【关键词】VDR基因;基因多态性;汉族;白族
【作者】刘正理;张朋;孟祥科;张爱建;邹久林;郑宝寿;赵佳祥;肖芝松
【作者单位】大理大学第一附属医院泌尿外科云南大理671000;大理大学第一附属医院泌尿外科云南大理671000;大理大学第一附属医院泌尿外科云南大理671000;大理大学第一附属医院泌尿外科云南大理671000;大理大学第一附属医院泌尿外科云南大理671000;大理大学第一附属医院泌尿外科云南大理671000;大理大学第一附属医院泌尿外科云南大理671000;大理大学第一附属医院泌尿外科云南大理671000
【正文语种】中文
【中图分类】Q343.1+2;Q344+.13
维生素D受体(VDR)作为一种亲核蛋白，属超家族成员，其基因组DNA全长45 kD，可结合1，25(OH)，D发挥生物学功能的核内生物大分子。

VDR广泛存在于人体组织细胞内，普遍表达于人体30个不同组织和细胞中，参与调节细胞增殖、分化及肠道中钙的吸收，甚至与雄、雌激素的活性相关联。

VDR缺陷可通过影响钙的吸收导致某些疾病的发生，如草酸钙结石、骨质疏松、糖尿病、前列腺癌等[1]。

不同基因型可通过调控蛋白转录和翻译从而引起VDR差异，进而改变受体空间结构。

目前多认为VDR基因的多态性与VDR基因表达和(或)VDR蛋白的功能相关，进而影响维生素D生物学效应[2]。

目前已经发现25个VDR基因多态性基因位点(Apa Ⅰ、Fok Ⅰ、Bsm Ⅰ、Dde Ⅰ、Taq Ⅰ、Tru9 Ⅰ等)，FokⅠ、BsmⅠ、Apa Ⅰ和Taq Ⅰ是目前研究较多的VDR基因单核苷酸多态性位点。

本研究旨在了解大理地区汉族、白族VDR基因FokⅠ、DdeⅠ位点多态性的分布特点，为进一步研究VDR基因多态性与疾病、如与原发性肾结石的关系提供群体遗
传学数据。

1 资料与方法
1.1 一般资料随机抽选2017年9月至2018年7月大理大学第一附属医院泌尿外科住院的大理地区白族、汉族健康居民162名，其中汉族81例，男54例，女
27例，年龄(45.63±15.61)岁；白族81例，男51例，女30例，年龄
(45.65±15.62)岁。

入选研究对象个体间无血缘关系及异族通婚史。

入选人群一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

本研究经大理大学第一附属医院伦理委员会审
查并批准，并征得家属同意。

1.2 方法
1.2.1 DNA提取均于次日晨起用EDTA-K2抗凝管采集受试者肘静脉血3～5 mL，冻存在-80 ℃冰箱中以备下一步提取DNA使用，保存期间避免反复冻融。

采用
DP348-03提取分离外周血DNA。

1.2.2 VDR基因多态性的检测通过GenBank检索到FokⅠ(即rs2228570)、
DdeⅠ(即rs3782905)位点序列，委托北京六合华大基因科技有限公司合成PCR
引物。

分别使用使用Prime STAR® Max DNA Polymerase(R045A, Takara, Beijing)、2× PCR Taq Plus Master Mix with dye(G014-dye, Applied Biological Materials,Vancouver, Canada)进行PCR 扩增反应。

分离、纯化和鉴定PCR目的产物。

确认PCR扩增产物大小和扩增效率后随即将162份扩增产物
送至华大基因，分别使用测序引物 rs2228570_seq F、rs3782905_seq F进行测序，最后根据测序结果峰图使用Chromas version2.4分析每个样本rs2228570、rs3782905的基因型。

1.3 统计学方法采用SPSS 17.0统计软件,通过直接计算法计算出rs2228570、
rs3782905位点基因型和等位基因的频率，判断是否符合哈-温平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)，若P>0.05则研究资料具有人群代表性，表示各
位点的基因型分布符合哈-温平衡。

计数资料选用2检验，分析rs2228570、
rs3782905位点基因型及等位基因分布频率(若理论频数<5则采用Fisher′s精确检验)。

2 结果
2.1 哈-温平衡分析结果显示81名汉族居民VDR基因rs2228570、rs3782905位点进行哈-温平衡分析，2:1.169、0.374，P>0.05；81名白族居民VDR基因rs2228570、rs3782905位点进行哈-温平衡分析，2:0.0619、0.636，P>0.05。

在白族、汉族人群中rs2228570、rs3782905位点均符合HWE检验，本研究具有较好的人群代表性，是一个随机婚配的群体，处于遗传平衡状态。

2.2 大理地区汉、白族居民VDR基因型与等位基因频率分布大理地区白族、汉族健康居民VDR基因FokⅠ位点基因型频率(2=6.703，P<0.05)和等位基因频率(2=5.49，P<0.05)分布差异均有统计学意义。

大理地区白族、汉族健康居民VDR 基因DdeⅠ位点基因型频率(2=1.094，P>0.05)和等位基因频率(2=1.105，P>0.05)分布差异均无统计学意义。

见表1、2。

表1 VDR基因FokⅠ基因位点多态性在白族、汉族健康居民分布特点项目基因型[例(%)]等位基因[频数(%)]CCCTTTCT白族
18(22.22)42(51.85)21(25.93)78(48.15)84(51.85)汉族
27(33.33)45(55.56)9(11.11)99(61.11)63(38.89)2值6.7035.490P值
<0.05<0.05
表2 VDR基因DdeⅠ基因位点多态性在白族、汉族健康居民分布特点项目基因型[例(%)]等位基因[频数(%)]CCCGGGCG白族61(75.31)17(20.98)3(3.7)139(85.8) 23(14.2)汉族55(67.9)22(27.16)4(4.94)132(81.48) 30(18.52)2值1.0941.105P 值<0.05<0.05
3 讨论
维生素D作为维生素家族成员，通过介导VDR调节靶基因转录形成激素-受体复
合物，该复合物通过介导靶基因上的特定序列,调控靶基因的转录表达，可参与机
体内炎症反应、免疫反应、细胞増殖和分化等生物学反应，从而发挥一系列生物学功能。

VDR的遗传变异可以通过调节其RNA稳定性和翻译效率来参与靶基因转
录的调控[3]。

近年来，大量相关研究表明，VDR多态性可以通过影响受体中维生素D的数量或功能，参与影响骨代谢、钙磷代谢，调节细胞增殖、分化，从而参
与疾病发生和发展的过程[4]，引起不同种疾病的临床表现。

我国地域辽阔，跨越
纬度广，不同地区人群VDR基因多态性分布可能与不同种族、生活环境具有一定关系，可产生不同的基因结构和遗传表型。

近年来国内外的研究学者通对VDR等位基因的分布频率做了大量相关研究，认为不同地区和不同人群的等位基因分布频率可能因地域差异及由此导致的血缘关系的相对孤立所致的差异[5]。

因此，在不
同地区开展VDR基因位点多态性的研究对进一步明确疾病的发生、发展及易感性具有重要的意义。

我国云南大理是以白族居民为主体的少数民族聚居地，全市人口约61万人，其中白族人口所占比例约65%，其VDR基因位点多态性分布可能呈现出明显区域、种族分布特点。

本课题选取对大理地区白族、汉族共计162名健
康居民的VDR基因FokⅠ、DdeⅠ位点多态性分布，通过本次研究首次获得了云南大理地区汉族和白族健康居民VDR基因FokⅠ、DdeⅠ位点的分布情况。

由于同一省份不同地域基因型分布很接近，故将大理地区汉族、白族例数合并后与其他地区作比较。

本研究显示大理地区白族、汉族VDR基因FokⅠ位点基因型频率和等位基因频率分布差异均有统计学意义(P<0.05)。

此外，不同地区、省份居民VDR基因FokⅠ、DdeⅠ位点多态性分布可能具有自身特点。

大理(白族、汉族)居民体人群FokⅠ位点基因型CC、TC、TT频率分布分别为27.78%、53.7%、18.52%。

与已知研究
昆明[6](32.3%、46.9%、20.8%)、浙江[7](27.8%、50.2%、22.0%)、广州
[8](34%、56%、10%)、新疆[9](30%、60%、10%)、北京[10](38%、52%、10%)相似，与山东[11](11.66%、41.67%、46.67%)已知数据具有一定差异。

朝
鲜[12]为28.97%、53.83%、17.2%，印度[13]为46%、50.67%、3.33%。

本研
究显示，大理地区白族、汉族VDR基因DdeⅠ位点基因型频率和等位基因频率分布差异均无统计学意义(P>0.05)。

大理(白族、汉族)地区健康居民DdeⅠ位点基因型CC、CG、GG频率分布分别为71.6%、24.1%、4.3%，与所报道的广西[14](69.4%、28.3%、2.2%)、北京[14](66.7%、28.9%、4.4%)、日本
[14](80.0%、20.0%、0)，北、西欧裔美国犹他州居民[14](53.3%、36.7%、
10.0%)，尼日利亚约鲁巴人[14](63.3%、30.0%、6.7%)等地区研究结果相似。

VDR基因序列上具有多个内切酶酶切位点，FokⅠ位点位于VDR基因Ⅱ外显子，其多态性直接改变VDR分子的结构；DdeⅠ位于VDR基因的内含子，其多态性
影响 VDR基因转录产物的剪切。

根据单核苷酸多态性的生物学特点，在肾结石等疾病发病方面，SNP极可能通过影响蛋白质的表达量、结构变化以及各种修饰等
而调控其功能，从而影响疾病的发生、发展过程。

有报道认为维生素D水平下降
可参与调控VDR的mRNA的相关表达与稳定性，引起VDR基因的翻译效率及蛋白的表达发生改变。

由于VDR基因多态性与多种疾病密切相关，比较不同地区VDR基因多态性的数据可使人们对不同地区VDR基因多态性分布有了进一步认识。

本研究丰富了不同民族人群的VDR基因的遗传学资源库，为大理居民保健和临床治疗提供基础遗传学数据，为政府制定个体化预防疾病的发生提供重要依据，对该地居民相关疾病的早防早治具有重要的意义。

综上所述，本研究首次获得了云南大理地区白族、汉族居民VDR基因FokⅠ、DdeⅠ多态性位点的分布情况，发现大理地区居民VDR基因FokⅠ、DdeⅠ位点
均具有SNP，并与相关地区、省份VDR基因型位点进行简要比较，说明FokⅠ位点多态性在不同种族及地区存在差异，并可能与不同区域和地理环境等关系密切。

但本研究也存在着一定的局限性，我国地域辽阔，各民族以“大散居、小聚居、交错杂居分布”的特点分布，各民族可能存在基因混杂的特点，根据种族的定义要
求3 代各自遗传的个体。

而本研究所收集标本仅是根据“患者的身份证上民族及
向患者问询”进行确认，由此可产生一定的研究对象选择偏倚，然而基于本试验所选去样本量具有一定的检验效能，本试验结果具有可信性。

今后尚需选取不同民族的更大样本及更多人群中研究得以验证。

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