【doc】横经席抗炎镇痛作用及急性毒性的实验研究

横经席抗炎镇痛作用及急性毒性的实验研
究
LISHIZHENMEDICINEANDMA TERIAMEDICARESEARCH2012VOL.23NO.3时珍国医国药2012年第23卷第3期
横经席抗炎镇痛作用及急性毒性的实验研究
韦健全,罗莹,黄健,薛强,潘勇,郑子敏
(右江民族医学院,广西百色533000)
摘要:目的研究横经席的抗炎镇痛作用,并进行它的急性毒性实验.方法小鼠,大鼠ig40,20,10g?kg(生药)横经
席,1次/d,连续3d,抗炎实验采用二甲苯致鼠耳肿胀法,角叉菜胶致大鼠足趾肿胀法和腹腔毛细血管通透性法;小鼠ig
4O,20,10g?kg(生药)横经席1次,采用醋酸致扭体反应,热板法测定痛阈,观察横经席的镇痛作用;采用最大耐受量
(Maximaltolerancedose,MTD)测定其急性毒性.结果横经席(40,20,10g?kg,qd×3)能抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿
胀,角叉菜胶引起的大鼠足趾肿胀和醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加;其提取液(40,20g?kg～,qd×1)能减少醋
酸所致小鼠扭体次数,明显提高小鼠的痛阈;其最大耐受量为640g?kg..(生药).结论横经席对实验动物模型具有显
着的抗炎镇痛作用,且其急性毒性小.
关键词:横经席;镇痛;抗炎;急性毒性
DOI标识:doi:10.3969/.iSSI1.1008-0805.2012.03.056
中图分类号:R285.5文献标识码:B文章编号:1008-0805(2012)03-0639-01
横经席,又名薄叶胡桐,梳篦木,篮子王,薄叶红厚壳;跌
打将军,碎骨莲,皮子黄(广州部队《常用中草药手册》),独角风
(《广西中草药》),为藤黄科胡桐属植物薄叶胡桐Calophyllum membranaceumGardn.etChamp.,以根,叶入药,性味微苦,平,具
有祛风湿,壮筋骨,活血止痛功能,主治风湿关节痛,腰腿痛,跌打
损伤,黄疸型肝炎,月经不调,痛经,外用治外伤出血.其叶,
茎,根,皮,种子等部位含有咕吨酮类(Xanthones),香豆素类(Coumarins),黄酮类(Flavonoids),萜类(Terpenoids)等多种类型
化合物.其叶的乙醇提取物的乙酸乙酯部分分离得木栓酮,木栓醇,B一谷甾醇,一香树脂醇和3一表白桦脂酸.目前有关横
经席药效学研究目前尚未有报道,为此我们用现代药理学方法对其提取物的抗炎作镇痛用及急性毒性进行了实验研究,为临床应用提供依据.
1材料与仪器
1.1药物横经席,2007—05购自靖西县药市,经我院附属医院
中药房刘春荣副主任药师鉴定.药材切细在室温(25～30℃)下
晾干,备用.
1.2药物制备横经席的提取:取经切细干燥横经席800g,用10
倍水浸泡1h,煮沸1h,提取2次,过滤,合并滤液,浓缩至100ml (每毫升提取液相当于8g生药),用时再配成相应的浓度(大,小
鼠给药容积为10m1.kg).吲哚美辛肠溶片,江苏亚邦爱普森
药业有限公司,生产批号0710022.醋酸地塞米松片,浙江仙居
制药厂,批号070340.二甲苯(汕头市光华化学厂),批号20061209.角叉菜胶(Sigma公司).
1.3动物小鼠,昆明种,体质量18～20g,清洁级动物;健康
Wistar大鼠,体重18O～250g,清洁级动物.均由广西医科大学
实验动物中心提供,许可证号SCXK(桂)2003—0003.饲养环境
的实验动物许可证号SEXK(桂)2003—0001.
1.4仪器电子分析天平(AR1140/C),奥豪斯(上海)公司生
产;YLS一6B智能热板仪,YLS一7B足趾容积测量仪,YLS—Q4 耳肿打耳器,山东省医学科学院设备站生产;722可见分光光度计,上海精密科学仪器公司生产.
收稿日期:2011-02-16;修订日期:2011-10-07
基金项目:广西壮族自治区教育厅立项课题(No.2007IOLX108)
作者简介:韦健全(1966一),男(壮族),广西河池人,现任右江民族医学院讲师,硕士研究生,学士学位,主要从事中草药药理学,药学教育与研究工作.
2方法
2.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响将健康昆明种小鼠随
机分为5组,每组10只,分别为:①空白对照组(生理盐水,等容
积);②阳性对照组(醋酸地塞米松0.005g?kg);③横经席
高,中,低剂量组(40,20,10g?kg..横经席生药).ig给药,1次/
d,连续3d,最后一次给药1h后,各鼠左耳涂0.05ml二甲苯致
炎(在药学通风橱内进行).致炎30min后颈椎脱臼处死小鼠,
剪下左右两耳,用直径耳肿打耳器(8mm)在同一部位冲下耳片,
用电子天平称重,以左右耳片重量(mg)差值表示炎性肿胀度并
计算肿胀抑制率.肿胀抑制率(%)=(生理盐水组平均肿胀度
一
给药组平均肿胀度)/生理盐水组平均肿胀度×100%.
2.2对角叉菜胶所致足肿胀的影响大鼠50只,随机分5
组,分组及剂量同"2.1"项,实验前禁食12h(不禁水),测定每鼠
致炎前的右后足趾容积.ig给药,1次/d,连续3d.末次给药60
min后,各大鼠右后足趾皮下注射1%角叉菜胶0.1ml,于注射后
0.5,1,2,4,6h分别测定各鼠右后足趾容积,比较各组大鼠致炎
后不同时间右后足趾肿胀率.肿胀率(%)=(致炎后足趾容积
一
致炎前足趾容积)/致炎前足趾容积×100%.
2.3对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响取健康雄性小鼠50
只,分组及给药方法"2.1"项.末次给药后1h,小鼠尾静脉注射
2%伊文思蓝溶液0.1ml?10g～,随即ip0.6%醋酸溶液0.2ml
只～,20min后颈椎脱臼处死,剪开腹部肌肉,用6ml生理盐
水分3次冲洗小鼠腹腔,收集冲洗液,4000r/min离心10min,取
上清液于590nm处比色,以吸收度A值判断小鼠腹腔毛细血管
的通透性.抑制率(%)=(对照组平均A一给药组平均A)/对
照组平均A×100%.
2.4对醋酸致小鼠扭体反应的影响将健康昆明种小鼠随机
分为5组,每组10只,分别为:①空白对照组(生理盐水,等容
积);②阳性对照组(吲哚美辛0.01g?kg);③横经席高,中,
低剂量组(40,20,10g-kg横经席生药).ig给药1次0.1ml
10g一,给药60min后,ip0.6%醋酸溶液0.2ml?10g,记录
15rain内小鼠扭体反应(腹部内凹,伸展后肢,臀部抬高,蠕行)
次数,求药物对扭体反应的抑制率.抑制率(%)=(生理盐水组
平均扭体次数一试药组平均扭体次数)/生理盐水组平均扭体次
数×1o0%.
2.5对小鼠热板痛反应的影响将雌性小鼠置于(55±
0.5)℃的智能热板仪上,记录小鼠足底接触热板至出现舔后足
反应的潜伏期(S)为痛阈指标,剔除反应潜伏期<5s或>30S的
或跳跃的小鼠.选取反应潜伏期在10—30S内的合格小鼠50
639?
时珍国医国药2012年第23卷第3期LISHIZHENMEDICINEANDMA TERIAMEDICARESEARCH2012VOL.23NO.3 只,根据药前痛阈和体重随机分成5组,分组及剂量同"2.4"项,
每组10只.各鼠测2次痛阈,取平均值作为基础痛阈.然后ig
横经席或吲哚美辛1次,于药后30,60,120rain分别测定各鼠的
痛阈1次,痛阈值超过60S者以60s计算.比较各组药后不同
时间痛阈值组间差异,判断是否有镇痛作用.
2.6急性毒性试验预试验,不能找出0%动物死亡的最小剂
量(Dn)和100%动物死亡的最大剂量(Dm)致死剂量,无法测出
半数致死量(LD),故本实验测定其对小鼠的最大耐受量(MTD).取小鼠20只,雌雄各半,随机分为2组,每组10只.禁
食12h,期间正常饮水,24h内以最大浓度(8g?ml),最大体
积(0.4ml?10g)灌胃给药2次,连续观察7d,记录动物的毒
性反应及死亡情况.解剖死亡小鼠及试验终止后存活的小鼠,肉眼观察心,肝,肾,肺,脾等重要器官的变化.
2.7数据处理实验数据均以±s表示,组间比较用t检验.使
用SPSS11.0统计软件进行.P<0.05有统计学意义.
3结果
3.1横经席对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响实验结果显示, 40,20,10g?kg横经席对二甲苯所致的鼠耳肿胀的抑制作用
非常显着(见表1).其中,0.005g?kg地塞米松组作用最强,
而且该组的小鼠较其他组的明显活跃,可能与其兴奋中枢有关. 表1横经席与对照组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(±s)
与生理盐水组比较,P<0.05,P<0.01;n=10
3.2横经席对角叉菜胶所致足肿胀的影响结果显示,横经席3
个剂量均能显着抑制角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀,而且效果持续时间较长,但抑制程度较地塞米松稍弱.结果见表2.
表2横经席对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
与生理盐水组比较,P<0.05,P<0.01;n=10
3.3横经席对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响实验结果表明, 40,20,10g?kg横经席对醋酸引起的腹腔毛细血管通透性有非
常显着的抑制作用,各组的抑制率有明显的剂量依赖性.结果见表3.
表3横经席对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(±s)
与生理盐水组比较,P<0.05,P<O.01;n=10
3.4横经席对醋酸致小鼠扭体反应的影响实验结果(见表4)
横经席高,中剂量组均能显着减少醋酸所致的小鼠扭体次数,与生理盐水组比较有显着性差异,镇痛率与剂量相关.吲哚美辛组
对扭体反应的抑制率更高,但使用0.01g?kg吲哚美辛小鼠活
动与生理盐水组比较明显减少.
表4横经席对注射醋酸15min内致小鼠扭体反应的影响(±)
与生理盐水组比较,P<0.05,P<0.O1;n=10
3.5横经席对小鼠热板痛反应的影响结果表明,横经席高,中
剂量组能够能显着提高小鼠热刺激体表的痛阈,与生理盐水组进
行组间t检验,差异具有统计学意义.结果见表5.
表5横经席对小鼠热板痛反应时间的影响(±)
与生理盐水组比较,'P<0.05,P<0.01;n=10
3.6急性毒性实验结果表明,横经席的最大日剂量640g?
(8g?ml×0.4ml?10g×2次X1000g),小鼠ig横经
席后,大部分动物出现活动减少,多在24h后活动恢复正常.经
观察7d,动物的活动正常;呼吸,姿势,皮肤,毛发等未见异常.7
d后,颈椎脱位处死动物,解剖肉眼观察未发现心,肝,肺,肾,脾
等重要器官出血,坏死等异常表现.
4讨论
本研究采用两种镇痛实验模型和3种实验性炎症模型,即醋
640?
酸所致扭体和热板法以及二甲苯致小鼠耳廓肿胀,角叉菜胶致小
鼠足跖肿胀,小鼠腹腔毛细血管通透性炎症模型来检测药物的抗
炎镇痛活性.镇痛实验结果证明,横经席能抑制醋酸刺激腹腔粘
膜引起的痛反应,减少各鼠的扭体次数,提高小鼠热刺激体表的
痛阈,延长热板痛反应时间.说明横经席具有镇痛作用.另外,
横经席对二甲苯所致小鼠耳片肿胀,角叉菜胶所致小鼠足肿胀以
及小鼠腹腔毛细血管通透性均有显着的抑制作用,而且其抑制效
果随剂量呈现一定的量效关系.说明横经席能够有效缓解炎症LISHIZHENMEDICINEANDMA TERIAMEDICARESEARCH2012VOL.23NO.3时珍国医国药2012年第23卷第3期
发生过程中的早期症状.急性毒性实验的结果小鼠ig最大Ft剂
量640g?kg～.如按横经席生药,药理实验中动物间和动物与
人体问的等效剂量换算,以及成人60kg体重计算(8g?ml
×0.4ml?10g×2次×1000g×0.081×60kg),即得相当于
3110.4g生药,根据化学物质的急性毒性分级标准,它属于微毒,
而本品推荐最高用量为50g,相当于成人用量的62.2倍.因此,
其在一定剂量范围内应用是安全的.
参考文献:
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丹皮酚衍生物的合成及其生物活性研究
李芳耀,杨新平,林家逊
(桂林医学院?药学院,广西桂林541004)
摘要:目的研究3种新型丹皮酚衍生物的合成及其生物活性.方法利用水蒸气蒸馏法从中药丹皮中提取活性成分丹
皮酚,将有机硝酸酯通过不同长度的碳链与丹皮酚偶联,合成3个具有NO释放作用的新型丹皮酚衍生物,通过H—
NMR,元素分析及MS对产物进行表征,采用Greiss法检测产物体外NO的释放情况,大鼠胸主动脉环收缩性实验检测产
物对血管紧张性的影响.结果目标产物体外释放NO约在4h时接近最大释放值且均具有较好的体外舒血管活性,其
Ic分别为156nmo~L,205nmo~L和178nmo~L.结论目标化合物均具有较强的血管舒张作用,值得深入研究.
关键词:丹皮酚;NO供体;合成;血管舒张作用
DOI标识:doi:10.3969/i.issn.1008_()805.2012.03.057
中图分类号:R284.2文献标识码:B文章编号:100843805(2012)03-0641432
丹皮酚(paeono1)又称为牡丹酚,是传统中药材牡丹皮,徐长
卿和芍药中的主要活性成分,研究表明丹皮酚有舒张冠状动脉作
用,能保护缺血再灌注损伤,具有抗血栓,抗心率失常,抗脑出血
和降血压等药理作用0J.近年来,心血管疾病的发病率在全世
界范围内呈明显上升趋势,其中动脉粥样硬化是临床最常见的心
血管疾病之一,其形成的最初环节是由内皮细胞功能障碍,直接
表现为一氧化氮(NO)合成和释放不足,从而破坏内皮细胞合成
和释放的多种血管活性物质和细胞因子之间的平衡.NO是
体内重要信使物质和效应分子,涉及很多病理,生理过程.NO
可通过多途径发挥抗动脉粥样硬化作用,具有扩张血管,抑制心
肌收缩,抗血细胞黏附,抗血栓形成和抗血管平滑肌细胞的增殖
等心血管活性.外源性NO供体药物能明显改善动脉粥样硬化
病变中降低的血管效应,因此将各类NO供体与先导药物偶联获
得NO供体型药物是目前药物领域研究的一个热点,已经成为创
新药物研究的重要策略之一,该类药物能够通过释放NO拮抗药
物对胃肠道和心血管不良反应,其药效和安全性较之母药有明确
改善,并且在治疗心血管疾病中获得良好效果,因此,本文以
传统中药活性成分丹皮酚为先导物,在丹皮酚分子中引入NO释
放基团,设计合成具有NO释放作用的新型丹皮酚衍生物,以期
通过NO与丹皮酚的协同作用,增强目标产物心血管活性,其合
成路线见图1.
收稿日期:20112_08;修订日期:2011-10-28
基金项目:广西壮族自治区教育厅科研立项项目(No.201010LX343); 桂林医学院青年教师科研启动基金
作者简介:李芳耀(1979一),男(汉族),广西容县人,现任桂林医学院讲师,硕士学位,主要从事有机合成,药物合成研究工作.
一o2
12
2an=2
2bn=3
2cn=4
图1目标化合物的合成路线
1仪器与试剂
R一201旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司),WRS一1A
数字熔点仪(上海精密科学仪器有限公司),DF一101S集热式恒
温磁力搅拌仪(巩义市英裕予华仪器厂),AV400超导核磁共振
仪(瑞士Bruck公司),AXIMA—QIT质谱分析仪(FI本Shimadzu
公司),U一1901型双光路紫外可见分光光度计(北京谱析通用
仪器有限责任公司T).
市售丹皮(购于桂北药房),其它试剂均为市售分析纯或化
学纯.
2方法与结果
2.1丹皮酚(1)的提取将粉碎后的牡丹皮100g加入到1000
ml蒸馏水中,加入10g硫酸钠浸泡3h,用水蒸气蒸馏,蒸至馏出
液无白色浑浊,收集蒸馏液冷藏过夜,过滤得到白色针状结晶.
滤液再加入适量硫酸钠,继续水蒸气蒸馏,收集蒸馏液,冷藏过
夜,过滤合并晶体,用以95%乙醇为溶剂进行重结晶,得到白色
针状晶体1.98g,ITI.P.49～5I℃.
2.24一甲氧基一2一(3一溴乙氧基)苯乙酮(2a)的合成将
1.6g丹皮酚和0.05g四丁基溴化铵溶于20ml5%的NaOH水溶液中,加入20.0ml1,2一二溴乙烷,加热回流反应1.5h(TLC跟踪反应进程).反应结束,减压蒸除1,2一二溴乙烷.用醋酸乙
641?。