总抗氧化能力测定FRAP法
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小麦叶片总抗氧化能力测定( F R A P 法)
一、实验原理
FRAP 法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原
Ferric-tri-pyridyl-tria-zine(Fe 3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ,随后在593nm测定蓝
色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。
由于反应在酸性条件下进行,可以抑制内源性的一些干扰因素。
并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10 yM,因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显着干扰FRAP法的检测反应。
由于
反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的,样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显着影响检测反应。
Antioxidant
Fe3+-TPTZ (橘黄色) ------------- > Fe2+-TPTZ (蓝色)
二、实验步骤
1.FRAP工作液配制:
0.3 MpH3.6醋酸缓冲液:0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL用1MHCI 调节pH至
3.6 ;
10mmol/L TPTZ溶液25mL 0.078g TPTZ 用40mM盐酸溶液定容至25mL
20mmol/L FeCh溶液50mL 2.78g 用RO水定容至50mL
上述溶液以10:1:1 的比例混合(现配现用)。
2.取叶片0.1g,加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取1.5mL 12000g离心10min (4o C),取上清液。
3.在反应管中加入100uL上清液,再加入2.4mL工作液,37°C条件下水浴10min,于593nm 处测定
吸光度,
4.标准曲线绘制:以0.1-1.6mmol/L的FeSO的标准液替代样品绘制标准曲线。
三、结果计算
以1.0mmol/L的FeSQ为标准,样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个FRAP fi,
计算结果
Z82 Ferric Reducmg/Antioxidant Power (FRAP) assay Briefly, the FRAP reagent contained 2.5 mL 10 mM L1 TPTZ solution in 40 mlVI L1 HGI plus 2,5 mL 20 mM L1 FeCI3 and 25 mL 0.3 M L1acetate buffer, pH 3.6 was prepared freshly and warmed at 37c C. After addition of root ethanol extracts (prepared as in section 2.7) and incub^tion at 37°C for
5 absorbanee of the reaction
mixture was measured at 593 nm. The final result was expressed as the concentration of antioxidants having a ferric reducing ability equivalent to that of 1 mM L_1 FeSO4 based on the standard curve for FeSO4 x 7H2O at a concentration range between 100 and 1000 uM L_1
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