一种富马酸二甲酯中硫酸二甲酯含量的测定分析方法[发明专利]

(10)申请公布号
(43)申请公布日 (21)申请号 201510872446.8
(22)申请日 2015.12.02
G01N 30/02(2006.01)
(71)申请人上海科胜药物研发有限公司
地址201203 上海市浦东新区张江高科技园
区蔡伦路538号503室
(72)发明人邱学艳 顾虹 安建国 胡素招
(54)发明名称
一种富马酸二甲酯中硫酸二甲酯含量的测定
分析方法
(57)摘要
本发明公开了一种富马酸二甲酯中硫酸二甲
酯含量的测定分析方法，该方法用仲胺作为衍生
试剂与富马酸二甲酯中硫酸二甲酯形成衍生物，
然后用高效液相色谱-质谱联用仪测定衍生物的
含量，从而得出富马酸二甲酯中硫酸二甲酯的含
量。

该分析方法与现有技术相比具有专一性好,
重现性好，灵敏度极高，适合做痕量分析等特点。

(51)Int.Cl.
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书4页 附图2页CN 106814144 A 2017.06.09
C N 106814144
A
1.一种富马酸二甲酯中硫酸二甲酯含量的测定分析方法，其特征在于用仲胺作为衍生试剂与富马酸二甲酯中硫酸二甲酯形成衍生物，然后用高效液相色谱-质谱联用仪测定衍生物的含量，从而得出富马酸二甲酯中硫酸二甲酯的含量。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于硫酸二甲酯衍生的反应中用二甲胺或二乙胺的乙腈溶液作为衍生剂。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于采用高效液相色谱-质谱联用仪，离子模式选择负离子。

4.根据权利要求1所述，其特征在于该方法包括以下几个步骤：
(1)取富马酸二甲酯原料或制剂粉末，以含有仲胺的乙腈溶液作为衍生剂制备得到样品衍生溶液；
(2)采用离子色谱柱的色谱柱，流动相为5mM-80mM甲酸铵或乙酸铵的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液和乙腈，进行等度洗脱。

(3)设置流动相流速为0.3-0.6mL/mL，柱温控制在25℃-40℃之间。

(4)取步骤(1)的样品衍生溶液5uL，进样，记录质谱总离子流图。

(5)采用质谱检测器，离子模式选择负离子，取(1)的样品衍生溶液进样，记录质谱离子流图。

5.根据权利要求2所述的测定分析方法，其特征在于仲胺与乙腈作为衍生剂的体积比比例范围为0.1％-0.3％。

一种富马酸二甲酯中硫酸二甲酯含量的测定分析方法
技术领域
[0001] 本发明涉及用仲胺衍生硫酸二甲酯，用高效液相色谱-质谱联用仪测定衍生物的含量，从而计算出富马酸二甲酯中硫酸二甲酯的含量。

此方法能较好的控制原料药中痕量硫酸二甲酯含量，为患者的健康安全用药提供保障，属于医药技术领域。

技术背景
[0002] 富马酸二甲酯，化学名Dimethyl fumarate。

[0003] 为一种治疗多发性硬化症的药物。

结构如下：
[0004]
[0005] 富马酸二甲酯中含有反应残留的硫酸二甲酯，结构如下：
[0006]
[0007] 准确定量地测定富马酸二甲酯中的硫酸二甲酯含量极具挑战性。

硫酸二甲酯极性很大,不具备敏感的紫外吸收基团,并且易水解。

[0008] 因此,很难采用气相、液相色谱和其他分析手段对其进行痕量直接测定。

[0009] 目前，只有测定富马酸二甲酯中常量硫酸二甲酯含量的方法采用经典的色谱法,其专一性、灵敏度、方法精密度和重复性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析结果。

为了克服原方法的缺陷，本发明采用仲胺作为衍生试剂与硫酸二甲酯形成稳定的衍生物。

形成的衍生物具备优异的液相色谱分离和质谱检测等特征。

该分析方法具有专一性好、灵敏高、重现性好等特点。

发明内容
[0010] 如上所述，直接定量测定痕量硫酸二甲酯存在各种缺陷。

然而,利用硫酸二甲酯带有甲氧基基团这一特征，可改造其特性使之转化为适合定量分析的分子结构。

利用仲胺能快速定量地同甲氧基基团发生化学反应的性质，而衍生试剂与硫酸二甲酯形成的衍生物具有稳定性强和非常适合反相液相色谱分离的特征。

除此之外,该衍生物在质谱检测器有灵敏的吸收这一特征使本方法的灵敏度和专一性大大提高。

衍生化学反应式如下：[0011]
[0012] 衍生物结构
[0013] 通过试验发现富马酸二甲酯在乙腈中有非常好的溶解性。

本发明将用乙腈作为稀释剂。

该分析方法的关键点是对稀释剂中水份进行严格控制。

由于稀释剂中含有不确定量的水，这些水将使硫酸二甲酯水解产生不确定量的硫酸，从而使测定结果偏低、重现性较差。

为了确保系统中水份含量恒定，并低于可接受的实验误差，本发明使用色谱级的乙腈。

[0014] 在色谱级的乙腈溶剂中进行衍生反应能准确的定量富马酸二甲酯中的硫酸二甲酯。

[0015] 本发明涉及一种富马酸二甲酯中硫酸二甲酯含量的测定分析方法，该方法为用仲胺作为衍生试剂与富马酸二甲酯中硫酸二甲酯形成衍生物，然后用高效液相色谱-质谱联用仪测定衍生物的含量，从而得出富马酸二甲酯中硫酸二甲酯的含量。

[0016] 上述硫酸二甲酯衍生的反应中用仲胺与乙腈作为衍生试剂。

[0017] 上述采用高效液相色谱-质谱联用仪，负离子选择离子模式。

[0018] 该方法包括以下几个步骤：
[0019] (1)取富马酸二甲酯原料或制剂粉末，以含有仲胺的乙腈溶液作为衍生剂制备得到样品衍生溶液；
[0020] (2)采用离子色谱柱的色谱柱，流动相为5mM-80mM甲酸铵或乙酸铵的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液和乙腈，进行等度洗脱。

[0021] (3)设置流动相流速为0.3-0.6mL/mL，柱温控制在25℃-40℃之间。

[0022] (4)取步骤(1)的样品衍生溶液5uL，进样，记录质谱总离子流图。

[0023] (5)采用质谱检测器，离子模式选择负离子，取(1)的样品衍生溶液进样，记录质谱图。

[0024] 本发明采用的技术方案如下：
[0025] 样品前处理：
[0026] 稀释液：采用色谱级的乙腈。

[0027] 衍生液：用稀释液配制成约0.2％的仲胺溶液。

[0028] 标准硫酸二甲酯溶液：用稀释液精密配制约60ug/ml的标准硫酸二甲酯溶液。

[0029] 标准品衍生溶液：精密加入500ul的标准硫酸二甲酯溶液于2ml的HPLC进样瓶中，然后精密加入500ul衍生液，放入恒温烘箱中，50℃放置60min，进样。

[0030] 样品衍生溶液：精密称取20mg样品于2ml的HPLC进样瓶中，然后精密加入500ul 稀释液，再精密加入500ul衍生液，放入恒温烘箱中，50℃放置60min，进样。

[0031] 本发明使用色谱柱为：离子色谱柱。

流速0.3-0.6mL/min。

柱温25℃-40℃。

流动相A：5mM-80mM甲酸铵或乙酸铵的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液，流动相B：乙腈，梯度如下：
[0032]
A B
0min10％90％
10min10％90％
[0033] 质谱检测器：负离子模式，[M-H]-:111
附图说明：
[0034] 附图1：根据本发明实施例1得到的仲胺衍生物质谱棒图；
[0035] 附图2：根据本发明实施例1得到的硫酸二甲酯标准品衍生物质谱总离子流图；[0036] 附图3：根据本发明实施例2得到的富马酸二甲酯样品衍生物质谱总离子流图；[0037] 附图4：根据本发明实施例3得到的富马酸二甲酯样品加样回收率质谱总离子流图。

具体实施方式
[0038] 为了更好的理解本发明的技术方案，下面结合本发明的具体实施例作进一步说明，但其不限制于本发明。

[0039] 实施例一
[0040] 仪器与条件：
[0041] 高效液相色谱质谱联用仪：Agilent 1260 infinity，MS检测器。

[0042] 色谱柱：离子色谱柱
[0043] 流动相：A：5mM-80mM甲酸铵或乙酸铵的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液B:乙腈。

[0044] 等度如下：0～15min，有机相比例保持90％。

[0045] 柱温：35℃。

[0046] 流速：0.5mL/min
[0047] 选择负离子：111
[0048] 进样体积：5ul。

[0049] 实验步骤：
[0050] 1)流动相A配制：准确称取50mM乙酸胺溶于1000mL含有0.1％乙酸水中，混匀。

[0051] 2)稀释液A：乙腈
[0052] 3)衍生液B配制：2mL二乙胺于1000ml容量瓶中，加入A定容。

[0053] 4)标准溶液C：精密称取约60mg硫酸二甲酯于10ml容量瓶中，加A定容，摇匀，精密吸取100ul于另一10ml容量瓶中，加A定容，即得C(标准溶液浓度约60ug/ml)。

[0054] 5)标准品溶液：分别精密取500ul C和500ul B于2mlHPLC进样瓶中，盖好盖子，50℃烘箱中放置60min，进样。

记录衍生物质谱棒图，见典型图1。

记录衍生物质谱总离子流图，见典型图2。

[0055] 实施例二
[0056] 仪器与条件：
[0057] 高效液相色谱仪：Agilent 1260 infinity，MS检测器。

[0058] 色谱柱：离子色谱柱
[0059] 流动相：A：5mM-80mM甲酸铵或乙酸铵的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液B:乙腈。

[0060] 等度如下：0～15min，有机相比例保持90％。

[0061] 柱温：35℃。

[0062] 流速：0.5mL/min
[0063] 选择负离子：111
[0064] 进样体积：5ul。

[0065] 实验步骤：
[0066] 1)流动相A配制：准确称取50mM乙酸胺溶于1000mL含有0.1％乙酸水中，混匀。

[0067] 2)稀释液A：乙腈
[0068] 3)衍生液B配制：2mL二乙胺于1000ml容量瓶中，加入A定容。

[0069] 4)样品溶液D:精密称取约20.0mg富马酸二甲酯样品，分别精密取500ul A和500ul B于2mlHPLC进样瓶中，盖好盖子，50℃烘箱中放置60min，进样。

记录衍生物质谱总离子流图，见典型图3。

[0070] 实施例三
[0071] 仪器与条件：
[0072] 高效液相色谱仪：Agilent 1260 infinity，MS检测器。

[0073] 色谱柱：离子色谱柱
[0074] 流动相：A：5mM-80mM甲酸铵或乙酸铵的0.03％-0.15％甲酸或乙酸水溶液B:乙腈。

[0075] 等度如下：0～15min，有机相比例保持90％。

[0076] 柱温：35℃。

[0077] 流速：0.5mL/min
[0078] 选择负离子：111
[0079] 进样体积：5ul。

[0080] 实验步骤：
[0081] 1)流动相A配制：准确称取50mM乙酸胺溶于1000mL含有0.1％乙酸水中，混匀。

[0082] 2)稀释液A：乙腈
[0083] 3)衍生液B配制：2mL二乙胺于1000ml容量瓶中，加入A定容。

[0084] 4)标准溶液C：精密称取约60mg硫酸二甲酯于10ml容量瓶中，加A定容，摇匀，精密吸取100ul于另一10ml容量瓶中，加A定容，即得C(标准溶液浓度约60ug/ml)。

[0085] 5)样品溶液E:精密称取约20.0mg富马酸二甲酯样品，分别精密取500ul C和500ul B于2mlHPLC进样瓶中，盖好盖子，50℃烘箱中放置60min，进样。

记录衍生物质谱总离子流图，见典型图4。

图1
图2
图3
图4。