DNA提取试剂盒和PCR条件
DNA提取方法范文
DNA提取方法范文
材料和仪器：
1.细胞样品（例如细菌、动植物组织）
2. lysis缓冲液（含有蛋白酶、盐、缓冲液等成分）
3.蛋白酶K
4.乙酸混合酚
5.氯仿-异戊醇
6. 同济 Pharmacia GenePure Kit
7.离心管及离心机
8.PCR反应管
9.热水浴
步骤：
1. 取细胞样品加入适量的l 管内，混匀后用200L蛋白酶K
（10mg/Lysis）进行蛋白酶作用，37℃恒温2小时，期间翻转混匀。
2. 加入200L 10mg/ml 乙醚/酚搅匀，室温6分钟。
4.在热水浴中加入异戊醇至70°，10分钟，室温离心后去异戊醇。
5.加入75%乙醇冷冻纯化。
6.给乙醇沫体V100V1/50V离心处理梦泪水，禾端。
7. 加入便直完成cent and Over night 28°。
本方法主要通过蛋白酶作用和有机溶剂的使用来破坏细胞膜和蛋白质，最终得到DNA。
蛋白酶K能够将蛋白质降解，使得DNA得以释放出来。
乙
醚/酚和氯仿-异戊醇的使用则有助于分离DNA、RNA和蛋白质，最终得到
高纯度的DNA。
在DNA提取的过程中，要注意避免DNA受到外界污染，可以在操作台
上使用紫外灯杀菌消毒，同时使用无菌技术进行操作。
此外，选用高质量
的试剂和耗材也是保证实验成功的重要因素。
通用基因组DNA提取试剂盒使用说明书
北京索莱宝科技有限公司通用基因组DNA提取试剂盒使用说明书货号：D2100规格：50T/100T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
开封后请将RNase A，蛋白酶K于-20℃保存。
试剂盒内容：D2100-50T D2100-100TRNase A1ml1ml×2蛋白酶K1ml1ml×2溶液A25ml50ml溶液B25ml50ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品简介:本试剂盒为通用型，适合于从土壤，粪便，昆虫，以及其他样本中提取基因组DNA。
对细菌，真菌，昆虫等样本都具有很好的裂解效果，最大限度的保留了生物DNA的多态性。
使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、样品的处理：1）土壤：称取0.1-0.3g(根据干湿)土壤，放入研钵中，倒入适量的液氮，立即研磨，重复3次，第1页共3页使土壤颗粒研成粉末，加500ul溶液A，振荡至彻底悬浮。
2）粪便：称取0.1-0.3g(根据干湿)粪便，加500ul溶液A，振荡至彻底悬浮。
3）昆虫：称取0.1-0.3g昆虫，倒入适量的液氮，立即研磨，重复3次，使昆虫研成粉末，加500ul 溶液A，振荡至彻底悬浮。
4）未知样品，如为细未状，可直接称取0.1-0.3g(根据干湿)加500ul溶液A，如为块状，可0.1-0.3g 用液氮研磨成粉未，再加500ul溶液A，振荡至彻底悬浮。
2、向悬浮液中加入20ul的RNase A（10mg/ml），55℃放置10min。
3、加入20ul的蛋白酶K（10mg/ml），充分混匀，55℃水浴消化，30min。
细菌基因组DNA提取试剂说明书
细菌基因组DNA提取试剂盒使用说明本试剂盒可用于革兰氏阴性和阳性菌的基因组DNA提取，由细菌重悬液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液组成。
可从1-5ml菌液中提取基因组DNA。
整个提取过程不超过45分钟。
提取过程包括：1菌液离心，重悬。
2裂解菌体，释放基因组DNA。
3盐析沉淀蛋白，分离DNA。
4异丙醇沉淀脱盐并浓缩。
5 70%乙醇清洗，晾干并用DNA溶解液溶解。
本试剂盒采用复合裂解液，其中含有抑制DNA酶的成分，在加热（65°C）状态下，可保证完整的细菌基因组DNA的充分裂解释放，本试剂盒即可提取异丙醇沉淀时，罕见浑浊的蛋白质杂质的共沉淀。
提取的基因组可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。
一、试剂盒组成（本试剂盒提供的组份, 至少可提取100份1-5ml菌液基因组DNA的纯化，每种组份均有足够的富余量）1．复合裂解液：30ml×1瓶。
2．蛋白沉淀液：300ml×1瓶。
3．DNA溶解液：20ml×1瓶。
4．操作说明书一份。
二、本试剂盒未提供，须用户自备的试剂为：异丙醇，70%乙醇（国产分析纯）。
三、提取操作：1．菌液离心：取革兰氏阴性菌菌液1-2ml；或者革兰氏阳性菌菌液2-5ml，1000rpm离心1分钟。
2．加入细菌重悬液100ul，震荡使菌体重悬。
3．将复合裂解液置65°C水浴加热，使结晶成分溶解，每个细菌重悬液中分别加入300ul的复合裂解液。
4．混璇器震荡混匀10秒，置65°C水浴中反应10分钟（革兰氏阴性菌），20分钟（革兰氏阳性菌）。
5．各管中加入300ul蛋白沉淀液。
上下颠倒5-6次使两者混匀。
6．13000-16000×g, 离心3-5分钟。
7．将上清液转移至新的离心管中（注意：由于有些细菌含有多糖或者脂蛋白成分，离心后会出现细胞成分上浮的情况，此时取漂浮层下的均一透明液体），加入等体积异丙醇，此时可见透明的絮状物，混匀后离心，同步骤5，吸去上清。
病毒基因组DNA提取试剂盒使用说明书
病毒基因组DNA 提取试剂盒Virus Genomic DNA Kit(目录号：HS0307)产品包装自备试剂无水乙醇储存条件蛋白酶K 于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃）产品简介本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒DNA 。
无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，独特的缓冲液/蛋白酶K 体系能迅速裂解病毒，使病毒蛋白与DNA 分离，在蛋白酶K 的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将病毒DNA 选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的病毒DNA 从吸附柱膜上洗脱下来。
本试剂盒操作简单、快速，所得病毒DNA 不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于PCR 、RT-PCR 、Real-Time PCR 、印迹等分子生物学实验。
产品特点1.简便快速，1小时内可获得高纯度的病毒基因组DNA 。
2.无需有机溶剂抽提，使用安全。
3.重复性好，产量高。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.4.所得病毒DNA纯度高，无污染物和抑制剂，方便下游应用。
注意事项1.血清或血浆避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的DNA片段小，提取量下降。
2.如缓冲液Buffer GB、Buffer GD结晶或产生沉淀，可在56℃水浴溶解。
3.所有离心步骤均为室温下操作。
操作步骤1. 取1.5 ml离心管（自备），加入20 ul的Proteinase K溶液。
2. 向离心管中加入200 ul血清或血浆，然后再加入200 ul Buffer GB，涡旋震荡15 sec。
（注意：1、样本体积不足200 ul可以加入0.9% NaCl（自备）补足。
2、为确保样本有效裂解，加入Buffer GB后，需将样本与Buffer GB充分混匀。
）3．56℃孵育15 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
DNA提取及PCR
（7）12000转/分离心10分钟后，弃上清，保留DNA沉淀。
（8）加入800-1000 uL70%乙醇洗涤DNA沉淀，12000转/分离心10分钟后， 弃上清。（9）将DNA样品置于真空干燥器干燥3分钟左右或56℃温箱烘 干3-4小时，加入适量TE缓冲液（10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.0） 溶解，置4℃备用或保存于－20℃。
61 ttcctcacag cttgaggcag ccctaggtga ggccaagaag caacttcagg
atgagatgct
PCR引物设计
引物设计一般所需遵循的基本原则:*
1 引物长度：18－25个核苷酸。上下游引物的长 度差不能大于3nt。
2 碱基组成： 四种碱基尽可能随机分布， 避免碱 基的多聚现象; G＋C含量在引物碱基中含量尽可 能在45％～55％；配对的两条引物，它们的Tm 应尽可能相近。（相差<5℃)
source 1..6110
mRNA
join(L12399:417..772,L12400:45..201,71..196,472..642,
exon
71..196 /number=3
exon
472..642 /number=4
exon
854..979 /number=5
ORIGIN
1 acctctcagc ttccttcaag ttcttgtgtt ctgtgacccc ttttcctcat ctctgcctgc
1.5/1.5 2～3U 1～2
1. PCR反应缓冲液，提供适当的酸碱度和 某些离子。
DNA提取步骤中文版
一DNA的抽提QIAGEN试剂盒。
1 标记1.5mlEP管吸取20ul蛋白酶K加入1.5mlEP管底部。
2 加入200ul血清至1.5mlEP管。
若血清不足200ul可加适量PBS补充。
余血清-20℃保存3 加200ul缓冲液AL至样品管震荡混匀15s。
4 56℃孵育10min。
5 稍微离心将EP管壁上的液体离心下去。
6 加200ul无水乙醇至样品管中震荡混匀15s稍微离心。
7 混合液转移至QIAamp螺旋住置于2ml收集管上小心勿沾湿边缘。
加样器垂直于螺旋住将混合液慢慢加至滤膜中间。
关盖标记8000rpm离心1min。
再将QIAamp螺旋住转移至一个清洁的2ml收集管内弃含滤液的收集管。
8 打开QIAamp 螺旋柱加入500ul缓冲液AW1勿沾湿边缘。
关盖8000rmp离心1min。
再将QIAamp柱转移至一个清洁的2ml收集管内弃含滤液的收集管。
9 打开QIAamp柱加入500ul缓冲液AW2勿沾湿边缘。
关盖全速12000rpm离心3min。
10 标记1.5ml离心管将QIAamp柱置于一个清洁的1.5mlEP管弃含滤液的收集管。
打开QIAamp柱加入50ul缓冲液AE。
室温孵育3min。
12000rpm离心1min。
继续下一步实验操作或-20℃保存。
二目的片段的扩增第一轮PCR 反应体系30ul要有一个阳性对照和一个阴性对照n个标本10×Buffer 3n ul dNTP200ul/ml 3n ul primer 上游引物0.3n ul 下游引物0.3n ul Taq酶0.5n ul H2O 20n ul 模板DNA 3 ul 反应条件94℃1min 94℃20sec 55℃20sec 72℃1min20sec 反应35个循环注意配体系时先配总反应体系混匀分装后再加标本一管一枪头。
防止污染。
配置体系要在超净台内操作。
4.第二轮PCR 反应体系50ul取第一轮PCR产物另加一空白管做阴性对照即有二个阴性对照若出现污染可以据此判断是那一轮PCR污染。
细菌基因组DNA提取试剂盒(离心柱法)
细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱法） PBZ0207‐1 20次 180.00 (Bacteria Genomic DNA Mini Preparation Kit） PBZ0207‐2 50次 420.00 简介本试剂盒用于极大部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌细胞基因组DNA的提取。
该试剂盒提供的方法简单易行，通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA结合在柱材上，避免酚仿抽提。
所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和稳定性好等特点。
可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验需要。
试剂盒组成 <20次>离心柱及收集管 各20个溶菌酶缓冲液ELB 6 ml 裂解液GDL 6 ml 缓冲液GDB 6ml蛋白洗涤液PWB 12ml 洗涤液WB 20ml 蛋白酶K 340µl洗脱液EB 15ml需自备的试剂无水乙醇，溶菌酶(用于革兰氏阳性菌破壁处理)，RNase A(25mg/ml)。
保存条件及有效期试剂盒保存在室温（15‐30℃）。
试剂如出现混浊或结晶，可以将试剂瓶置于55℃水浴加热，溶液变清亮后再使用。
本试剂盒有效期为12个月。
蛋白酶K含50％的甘油及稳定剂，请置于‐20℃可保存更长时间。
操作步骤所有离心步骤皆使用台式离心机，为室温下操作。
第一次使用前请先参考试剂瓶上的标签，在洗涤液WB中加入无水乙醇。
1.取适量的细菌培养液（最多提取的细菌数量为2×109个），10,000rpm离心1分钟，弃上清，留细菌沉淀备用。
2.提取的细菌为革兰氏阴性菌，可以在菌体沉淀中加入200µl裂解液GDL。
用吸头吹打几下，充分混匀。
然后进入步骤4。
3.提取的细菌为革兰氏阳性菌，必须要进行溶菌酶破壁处理（如不确定为何种菌属，请按处理革兰氏阳性菌的方法进行）。
具体操作如下：称取20mg溶菌酶，置于1.5ml离心管中，取1ml溶菌酶缓冲液ELB，反复吹打几次将溶菌酶完全溶解，配制成溶菌酶裂解液。
DNA提取及PCR解读
DNA提取常见问题与对策 问题三：DNA提取量少。
原 因
1. 2. 3. 4.
1. 2.
实验材料不佳或量少 破壁或裂解不充分
沉淀不完全
洗涤时DNA丢失
对 策
3.
4. 5.
6.
尽量选用新鲜（幼嫩）的材 料。 动植物要匀浆研磨充分；G＋ 菌、酵母裂解前先用生物酶 或机械方式破壁。 高温裂解时，时间适当延长 （对于动物细胞、细菌可增 加PK的用量）。 低温沉淀，延长沉淀时间。 加辅助物，促进沉淀。 洗涤时，最好用枪头将洗涤 液吸出，勿倾倒。
第二部分 PCR技术
PCR
变性
95˚C左右
原 理
延伸
适温
退火
Tm-5˚C
19
The mechanism of PCR
Template DNA
5 5
5
Primer 1 5 Primer 2
Cycle 1
5 5 5 5
Cycle 2
5
5 5 5
5 5
5 5
Cycle 3
alternative splicing; lamin; lamin A; lamin C; 3 of 3
1..6110 join(L12399:417..772,L12400:45..201,71..196,472..642, 71..196 472..642 /number=3 /number=4
1. Primer premier 5.0
2. Oligo6.71
三、PCR的反应体系
• 寡核苷酸引物 • DNA聚合酶 • DNA模板 • dNTP • 反应缓冲液
29
反应体系一般选用10～100μL.
ddH2O
pcr实验室流程
pcr实验室流程PCR实验室流程一、引言PCR（聚合酶链式反应）是一种在实验室中常用的分子生物学技术，用于扩增DNA片段。
PCR实验室流程是指在进行PCR实验时所需的步骤和操作。
本文将详细介绍PCR实验室流程的各个环节。
二、实验前的准备工作1. 提取DNA样本：从待检测的生物体中提取DNA，可以通过使用DNA提取试剂盒进行提取。
2. 设计引物：根据需要扩增的目标DNA片段的序列，设计合适的引物。
引物应具有高度特异性，避免与其他非目标序列结合。
3. 制备PCR反应体系：根据所需扩增的目标DNA片段的大小和扩增效率，精确计算反应液中的各个组分的浓度。
三、PCR反应体系的配制1. 选择合适的PCR反应管：PCR反应管应具有良好的热传导性能，以保证反应的均一性。
2. 加入引物：根据所设计的引物，向反应管中加入合适浓度的引物。
引物的浓度应根据实验需要进行优化。
3. 加入模板DNA：向反应管中加入所提取的DNA模板。
模板DNA的浓度应在合适范围内，过高或过低的浓度都会影响PCR反应的效果。
4. 加入PCR反应缓冲液：PCR反应缓冲液中含有适当的离子浓度和pH值，以保证PCR反应的进行。
5. 加入dNTPs：向反应管中加入dNTPs，提供PCR反应所需的四种核苷酸单体。
6. 加入聚合酶：向反应管中加入高保真聚合酶，以保证PCR反应的准确性和高效性。
7. 加入辅助物质（如Mg2+）：根据实验需要，向反应管中加入辅助物质，如Mg2+，以优化PCR反应的条件。
四、PCR反应的进行1. 放入热循环仪：将配制好的PCR反应管放入热循环仪中，进行PCR反应。
2. 程序设定：根据实验需要，设定PCR反应的温度和时间参数。
常见的PCR反应程序包括：变性步骤、退火步骤和延伸步骤。
3. 变性步骤：将PCR反应管加热至94-98℃，使DNA解旋成单链。
4. 退火步骤：将PCR反应管降温至引物的退火温度，使引物与目标DNA序列结合。
PCR的条件和注意事项
PCR的条件和注意事项PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。
引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR 反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致。
现将几种主要影响因素介绍如下。
一、温度循环参数在PCR自动热循环中，最关键的因素是变性与退火的温度。
如操作范例所示，其变性、退火、延伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共25～30个循环，扩增片段500bp。
在这里，每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。
在自动热循环仪内由混合液原温度变至所要求温度的时间需要30～60s，这一迟滞时间的长短取决于几个因素，包括反应管类型、壁厚、反应混合液体积、热源（水浴或加热块）以及两步骤间的温度差，在设置热循环时应充分给以重视和考虑，对每一仪器均应进行实测。
关于热循环时间的另一个重要考虑是两条引物之间的距离；距离越远，合成靶序列全长所需的时间也越长，前文给出的反应时间是按最适于合成长度500bp的靶序列拟定的。
下面就各种温度的选择作一介绍。
1．模板变性温度变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。
变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。
一般取90～95℃。
样品一旦到达此温度宜迅速冷却到退火温度。
DNA变性只需要几秒种，时间过久没有必要；反之，在高温时间应尽量缩短，以保持Taq DNA聚合酶的活力，加入Taq DNA 聚合酶后最高变性温度不宜超过95℃。
2．引物退火温度退火温度决定PCR特异性与产量；温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。
土壤DNA提取试剂盒说明书
土壤基因组DNA提取及PCR报告一、步骤试剂盒22℃--25℃储存使用前：用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer 1、0.5g【500ml】玻璃珠加入15ml离心管中（15ml离心管可以更好的涡旋、悬浮），加0.5g【0.4—0.5g】土样，加1ml Buffer SLX Mlus 【裂解菌体】，最高速度涡旋3-5 min；2、加100ul Buffer DS，涡旋混匀；3、70℃水浴10 min,并短暂涡旋；（对于难提取样品可以在90℃水浴）4、3000rpm 室温【25℃】离心3min，转移800ul上清液于一新的2ml离心管中，加入270ul Buffer SP2，涡旋混匀；5、冰浴5 min，4℃，13000xg 离心5 min；6、小心转移上清液于一新的2ml离心管，加0.7体积【约600—900ul】的异丙醇，反复颠倒离心管20-30次以混合，（若样品DNA含量低，可以放置于-20℃1h ）;7、13000xg 4℃离心10min，获得沉淀DNA；8、小心去除上清液，将离心管在吸水纸上倒置1min；9、加200ul Elution Buffer,涡旋10s，溶解DNA，【预热EB，保存60℃，15min水浴】；10、加100ul HTR Reagent，涡旋10s混匀；（HTR Reagent使用前要摇匀，吸取时将枪头剪大一点儿）；11、室温静置2min后13000xg 室温离心2min；12、取上清液于新2ml离心管中（若上清液有黑色则重复步骤10-12）；13、加上清液的等体积【300—350ul】XP2 Buffer并涡旋混匀；14、将HiBind DNA柱置于2ml 收集管中，将上一步样品转移到柱中，10000xg 室温离心1min，弃流液，保留收集管；15、将柱移入上一步中的收集管，加入300ul XP2 Buffer，10000xg 离心1min，弃流液、收集管；16、将柱移入新2ml离心管中，加入700ul SPW Wash Buffer（用无水乙醇稀释过的）洗涤，10000xg 离心1min，弃流液保留收集管；17、重复16步；18、弃流液，将柱插入空收集管中，13000xg 室温离心2min，空甩干燥柱子；（是为了除去乙醇，乙醇对后续操作有影响）19、将柱移入干净1.5ml 离心管，将50ul Elution Buffer 直接加入HiBind matrix 中心，65℃水浴10-15min，室温放置3—5min；20、13000xg 离心1min 以洗脱DNA21、加入30-100ul Elution Buffer，重复19-20步22、检测二、结果1、OD值Nanodrop 2000 analysis2、电泳：土样量6ul；1%琼脂糖凝胶分析3、PCR:20ul体系：PCR Mix：10ul 引物：0.3+0.3ul 模板：1ul 加水补齐预变性：94℃10 min变性：94℃20s退火：52℃20s延伸：72℃20s终延伸：72℃5minPCR电泳：上样量：8ul；1%琼脂糖凝胶分析。
PCR的条件和注意事项
PCR的条件和注意事项PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。
引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR 反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致。
现将几种主要影响因素介绍如下。
一、温度循环参数在PCR自动热循环中，最关键的因素是变性与退火的温度。
如操作范例所示，其变性、退火、延伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共25～30个循环，扩增片段500bp。
在这里，每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。
在自动热循环仪内由混合液原温度变至所要求温度的时间需要30～60s，这一迟滞时间的长短取决于几个因素，包括反应管类型、壁厚、反应混合液体积、热源（水浴或加热块）以及两步骤间的温度差，在设置热循环时应充分给以重视和考虑，对每一仪器均应进行实测。
关于热循环时间的另一个重要考虑是两条引物之间的距离；距离越远，合成靶序列全长所需的时间也越长，前文给出的反应时间是按最适于合成长度500bp的靶序列拟定的。
下面就各种温度的选择作一介绍。
1．模板变性温度变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。
变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。
一般取90～95℃。
样品一旦到达此温度宜迅速冷却到退火温度。
DNA变性只需要几秒种，时间过久没有必要；反之，在高温时间应尽量缩短，以保持Taq DNA聚合酶的活力，加入Taq DNA 聚合酶后最高变性温度不宜超过95℃。
2．引物退火温度退火温度决定PCR特异性与产量；温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。
真菌DNA提取试剂盒
技术咨询电话：400-607-9999真菌DNA提取试剂盒Fungal DNAout货号:M090091产品及特点本产品用于快速提取各种真菌的基因组DNA，其中包括酵母（如：Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pomb、Pichia pastoris）、动物病原真菌（如：Candida albicans、Aspergillus niger）和植物病原真菌（如：Collectotrichum musae、Fusarium oxysporum）。
本产品的主要特点是：1.DNA纯净，OD260/280一般都在1.9左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。
DNA 大小在50 Kb左右。
2.操作简单，整个过程约30分钟左右，比大多数同类产品短。
3.液体培养物处理量在0.1-3 mL 之间，真菌菌丝、孢子、子实体的处理量在0.1-0.5 g之间。
4.价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
5.安全无毒，不需要使用氯化苄等有毒物质，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
规格及成分10次包装成份（CAT：M090091）溶液A 10 mL溶液B 10 mLRNase A溶液150 uL使用手册1份运输及保存常温运输，4℃保存，有效期一年。
技术咨询电话：400-607-9999使用方法1.先将全部RNase A溶液全部加入到50 mL溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在4℃保存。
2.称取0.1-0.5g湿的真菌菌丝、孢子、子实体或0.1-3 mL液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5 mL 塑料离心管中。
注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA会吸附在表面，影响得率。
如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量最好比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份)，请按相关的标准方法先将该真菌预纯化出来，以沉淀物的形式放液氮研磨。
pcr实验流程和注意事项
pcr实验流程和注意事项PCR（聚合酶链反应）是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，用于扩增寻找的DNA片段。
它被广泛用于基因分型、疾病诊断、DNA克隆、基因组测序等领域。
下面将介绍PCR实验的流程和注意事项。
一、PCR实验流程：1. DNA样品提取：从所研究的样品中提取所需的DNA，可以是细胞、组织、血液等。
2.先导扩增：先导扩增是为了增加所需的DNA靶序列数目，用于后续的扩增反应。
通过使用特定的引物扩增产生所需的DNA靶序列。
3.扩增反应液的制备：准备PCR反应液，通常包括DNA样本、引物、酶（聚合酶、缓冲液）、dNTPs（四种脱氧核苷三磷酸）和Mg2+离子等。
4.反应条件设置：根据所使用的PCR仪和所需扩增的DNA靶序列长度等参数，设置PCR反应的温度、时间等条件。
5. PCR扩增：将反应液放入PCR仪中，按照所设定的条件进行PCR扩增。
6. PCR产物检测：使用琼脂糖凝胶电泳等方法，对PCR扩增的产物进行检测和分析。
7. PCR产物纯化：可以使用PCR产物纯化试剂盒，将扩增的DNA 片段纯化、回收。
8.测序：如果需要测序分析，可以将PCR产物进行测序。
二、PCR实验的注意事项：1.实验区分：DNA准备、引物配置和反应设置等步骤应在无污染的实验区中进行，避免产生假阳性和污染的结果。
2. DNA样品的准备：DNA样品的提取应严格按照操作规程执行，避免外源性DNA的污染。
同时，要确保样品的质量和浓度。
3.引物设计：合理的引物设计对PCR扩增的特异性和效率有重要影响。
引物的长度、GC含量、Tm值等要充分考虑。
4.酶的选择：PCR酶的选择应根据所需的PCR反应类型和条件来确定。
常见的PCR酶包括Taq聚合酶和Pfu聚合酶等。
5.反应条件设置：PCR反应的条件（包括温度、时间等）应根据实验需求和所用引物的特性来设定，避免扩增效率低或非特异性扩增。
6.防止污染：使用无核酸的试剂和耗材，并采取严格的无菌操作。
天隆NP968核酸提取试剂盒使用说明书
核酸提取或纯化试剂使用说明书【产品名称】核酸提取或纯化试剂【通用名称】病毒DNA/RNA提取试剂盒【规格】96T/盒（预封装）16T/板×6板【预期用途】可从拭子洗液等多种液体样品中快速提取病毒DNA和病毒RNA，提取的病毒DNA和病毒RNA纯度高、质量稳定，可广泛应用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗等用途。
【检测原理】核酸提取过程中，配合天隆NP968系列仪器，利用磁珠吸附原理，通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠，实现磁珠/核酸的转移，自动完成核酸的提取。
【试剂盒组成】组件名称96T/盒（预封装）组件规格组件数量预封装试剂16T/板6蛋白酶K 1.1ml/支2【储存条件及有效期】室温保存；有效期一年。
【适用仪器】天隆NP968系列核酸提取仪及同类型仪器。
【样本要求】1.适用样本类型：拭子洗液等。
2.样本保存：可立即进行提取，也可于4℃保存待测，保存期不超过24小时，长期保存需置于-20℃。
【使用方法】1.预封装试剂准备从试剂盒中取出预封装试剂，慢慢颠倒混匀数次使磁珠重悬，去掉真空包装，轻甩孔板，使试剂及磁珠均集中到孔板底部（也可使用孔板离心机，500rpm×1min行离心），使用前小心撕去铝箔封口膜，避免孔板振动，防止液体溅出。
2.自动化仪器提取步骤2.1在预封装试剂的第1或7列（注意有效孔位）中加入200µl样品、20μl蛋白酶K。
2.2按以下程序进行自动化提取；2.2.1快速版（适合口腔拭子、鼻腔拭子、新型冠状病毒）步骤槽位名称等待时间（min）混合时间（min）磁吸时间（sec）混合速率体积（µl）温度状态温度（℃）12转移磁珠0030快300裂解加热90 21结合0590中720裂解加热90 34洗涤0160快600洗脱加热90 46洗脱1290中80洗脱加热90 54弃磁010快600关闭02.2标准程序（适合血清血浆中病毒HBV\HCV等）步骤槽位名称等待时间（min）混合时间（min）磁吸时间（sec）混合速率体积（µl）温度状态温度（℃）12转移磁珠0030块600裂解加热90 21裂解结合01090中720裂解加热90 32洗涤10260快600洗脱加热75 43洗涤20160快600洗脱加热75 54洗涤30160快600洗脱加热90 66洗脱1590中80洗脱加热90 74弃磁010快600关闭02.3自动化程序结束后，将第6、12列的洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管中。
PCR生产操作规程
PCR生产操作规程PCR（聚合酶链反应）是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA序列。
PCR的操作过程需要严格控制条件，以保证反应的准确性和稳定性。
以下是PCR生产的操作规程：1. 实验室准备：- 确保实验室整洁干净，操作台面清洁无尘。
- 确保实验室内温度适宜，保持恒温状态。
- 准备PCR试剂盒，包括DNA模板、引物、逆转录酶、聚合酶、dNTPs等。
2. 样品处理：- 提取DNA样品时，要避免污染、降解和损伤。
- 使用无菌管、无菌试剂和消毒仪器，避免样品交叉污染。
3. PCR试剂配置：- 根据实验样品的数量和浓度，计算所需的试剂量。
- 试剂配置过程中要注意无菌操作和准确的配比，避免试剂误差。
4. 反应体系：- 根据实验需求进行不同的PCR反应设置，包括温控系统、反应管、引物和试剂的加入顺序等。
- 准备阳性和阴性对照样本，以检验PCR反应的准确性。
5. 反应条件：- 根据PCR扩增的要求，设置反应体系的温度、时间和循环次数等。
- 设置好PCR反应的温度曲线，包括变性、退火和延伸阶段，以保证扩增效果。
6. 仪器操作：- 启动PCR仪器前，确保设备完好、无异常情况。
- 设置好PCR仪器的程序和参数，包括温度梯度、循环次数、温度保持时间等。
- 监控PCR反应的过程，及时调整温度和时间等参数。
7. 结果分析：- PCR反应结束后，分析PCR产物的扩增结果。
- 使用电泳技术对PCR产物进行分析，观察扩增片段的大小和条带的强度。
- 对PCR结果进行解读，确认是否成功扩增目标DNA序列。
8. 结果记录和保存：- 将PCR结果记录在实验日志中，包括样品编号、反应条件、扩增结果等信息。
- 将PCR产物进行保存，可以冷冻保存或进行二次扩增和测序等后续实验。
9. 试剂和废弃物处理：- 将使用过的试剂垃圾按照规定的分类进行处理，尽量减少对环境的污染。
- 将废弃物进行消毒处理，避免有害生物的传播和污染。
10. 定期维护和检验设备：- 定期对PCR仪器进行检验和维护，确保其正常工作。
普通pcr实验步骤 -回复
普通pcr实验步骤-回复普通PCR实验步骤引言PCR（聚合酶链反应）是一种重要的分子生物学技术，可以在实验室中通过扩增DNA片段，从而使其数量倍增。
PCR通常由三个主要步骤组成：变性、退火和延伸，这些步骤使反应体系中的DNA能够周期性地被扩增。
本文将详细介绍PCR的各个步骤、所需试剂和设备，并提供一些建议，以确保PCR实验顺利进行。
一、实验前的准备在进行PCR实验之前，需要准备以下试剂和设备：1. DNA样本：从所需生物材料中提取所需的DNA样本。
DNA样本可以通过DNA提取试剂盒或传统的制备方法获得。
2. 引物：为特定DNA片段设计的引物。
引物是指具有与目标DNA序列互补的两个短DNA片段，它们将定向扩增所需的DNA片段。
3. PCR反应模板：DNA样本中所需扩增的特定DNA片段。
4. DNA聚合酶：核酸聚合酶用于在PCR过程中合成新的DNA链。
5. PCR反应缓冲液：含有聚酰胺胶稳定剂，确保PCR反应在合适的pH 和离子条件下进行。
6. dNTP混合物：含有所有四种核苷酸（dATP、dCTP、dGTP和dTTP）的混合物，用于DNA链的合成。
7. 镁离子：在PCR反应过程中需要的辅助离子。
8. 纯化水：用于制备反应体系和稀释试剂。
9. PCR试管：使用具有螺纹盖的薄壁PCR试管，以便在PCR反应中保持样本的温度和避免样本的蒸发。
10. PCR仪：根据反应体积和温度控制要求选择合适的PCR设备。
二、PCR实验步骤下面是PCR实验的详细步骤：1. 确定PCR反应条件：根据需要扩增的DNA片段的大小和特性，选择合适的PCR反应条件。
这包括放大温度、延伸时间和引物的浓度等参数。
2. PCR反应体系的制备：根据所需的反应体积和组分量，制备PCR反应体系。
通常反应体系包括PCR反应缓冲液、dNTP混合物、引物和聚合酶。
反应体系的制备应在无菌条件下进行。
3. PCR反应装药：将PCR反应液分装到PCR试管中，并在顶部加入少量矿油或矿脂，以避免反应液蒸发。
pcr技术的实验操作步骤
pcr技术的实验操作步骤引言PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，通过在体外扩增DNA片段，使其数量呈指数级增加。
本文将介绍PCR技术的实验操作步骤，让大家了解PCR实验的基本过程。
材料和试剂•DNA模板•扩增引物（前向引物和反向引物）•dNTPs（脱氧核苷酸）•酶切酶•聚酰胺凝胶和电泳设备•扩增物可视化染料•TE缓冲液•分孔板和PCR试管•离心机•PCR仪步骤1. DNA提取将需要扩增的DNA提取出来，可以使用常见的DNA提取试剂盒按照说明书进行操作。
2. 反应体系准备按照以下比例配制PCR反应液： - DNA模板：1µg - 前向引物：0.5µM - 反向引物：0.5µM - dNTPs：200µM - 聚合酶：0.5U/µl - 缓冲液：适量 - 模板DNA稀释至适当浓度 - 扩增引物和其他试剂稀释至适当浓度3. PCR扩增条件设定根据所需扩增片段的长度和GC含量等因素，设定PCR扩增条件，包括温度和时间等参数。
4. PCR扩增反应体系组装按照以下步骤组装反应体系： - 取一干净的PCR试管或分孔板。
- 按照配制好的反应液体系，依次加入试管或分孔板中。
- 加入模板DNA和其他试剂，用微量移液器混匀。
5. PCR反应仪设置根据设定的PCR扩增条件，设置PCR仪的温度和时间参数，确保反应进行顺利。
6. PCR反应体系PCR扩增将所装有反应体系的PCR试管或分孔板放入预热好的PCR仪中，按照设定的程序进行PCR扩增反应。
7. PCR扩增产物分析完成PCR反应后，可以通过以下步骤进一步分析扩增产物： - 取少量PCR反应体系，加入荧光染料。
- 通过电泳将样品分离。
- 使用分泌设备可视化扩增产物。
- 进行分析和记录结果。
8. PCR产物保存如果需要保存PCR产物，可以按照以下步骤进行： - 将产物转移到干净的试管中。
- 加入适量的TE缓冲液，混匀。
细菌基因组DNA提取试剂盒(溶液型)操作方法及步骤说明书
细菌基因组DNA提取试剂盒目录号：DN12DN120150次DN1202100次DN1203200次❖适用范围：适用于快速提取各种细菌基因组DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：细胞核裂解液室温30 ml60 ml120 ml蛋白沉淀液室温10 ml20 ml40 mlDNA溶解液室温10 ml15ml30 mlRNase A(10mg/ml)-20℃150μl250μl400μl本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，轻轻旋摇，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpure Reagent 抽提指南◆目录号 RP022.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍：本试剂盒用于快速的从各种细菌中提取基因组DNA。
细菌样品加入细胞核裂解液(或者通过溶菌酶或者其它一些酶帮助裂解细胞壁后)，首先在强去污剂作用下裂解细胞释放出基因组DNA，接着加入RNase A去除RNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3.结果稳定，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50 kb -150kb，可直接用于构建文库，PCR，Southern-blot和各种酶切反应。