伞形科植物蛋白质的系列实验
植物组织中可溶性蛋白质含量的测定
实验8 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定Ⅰ．斐林-酚试剂法 [原理] 斐林(Folin)-酚试剂法结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应，其中包括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，颜色深浅与蛋白含量成正相关。
在650nm时比色测定的灵敏度比双缩脲法高100倍。
由于肤键显色效果增强，从而减少了因蛋白质种类引起的偏差。
该法适于微量蛋白的测定(范围为5～l00μg蛋白质)。
[材料、仪器设备及试剂](一)材料各种植物材料。
(二)仪器设备 722分光光度计，离心机，恒温水浴，定量加样器，冷凝回流装置一套，研钵，离心管，刻度移液管，微量滴定管，试管等。
(三)试剂 (1)0．5mol／L Na0H。
(2)斐林-酚试剂甲液：由A、B两种溶液组成：A液：4％碳酸钠(Na2C03)溶液与0.2mol/L氢氧化钠(Na0H)溶液等体积混合。
B液：1％硫酸铜(CuS04·5H20)溶液与2％酒石酸钾钠溶液等体积混合。
使用前将A与B按50:1的比例混合即成，此试剂只能在使用当天配制。
(3)斐林-酚试剂乙液：称取钨酸钠(Na2W04。
H20)100g，钼酸钠(Na2Mo04·2H20)25g，加蒸馏水700ml溶解于1500mL的圆底烧瓶中。
之后加入85％的H3PO450mL，浓Hcl 100 mL，安上回流装置(使用磨口接头，若用软木塞或橡皮塞时，就必须用锡铂纸包起来)，使其慢慢沸腾10h。
冷却后加入硫酸锂（Li2SO4.H2O）150g,蒸馏水50ml，溴水2-3滴，打开瓶口煮沸15min，以逐出过量的溴，冷却后溶液呈黄色（若仍绿色，须再滴加几滴溴水，继续煮沸15min）。
待冷却后稀释至1000ml，过滤入棕色瓶中保存。
使用时大约加水1倍，使最终浓度相当于1mol/L酸度。
因此在使用前应进行标定。
伞形科药用植物化学成分的研究
伞形科药用植物化学成分的研究摘要对伞形科药用植物化学成分进行综述。
关键词伞形科；药用植物；化学成分伞形科(Umbelliferae) 草本，常含挥发油而有香气；茎中空。
叶互生，叶柄基部膨大成鞘状。
花小，多幅射对称，集成伞形或复伞形花序。
花瓣5；雄蕊5；子房下位，心皮2合生，2实，每室胚珠1；花柱2。
果实为双悬果。
该植物全世界约有200 余属, 2 500 种, 主要分布于北温带、亚热带或热带地区。
我国约有90 属, 500 多种, 全国均有分布[1-3]。
伞形科植物绝大多数为一年至多年生草本, 经济植物较多, 可作为药材、蔬菜、香料、农药等。
供药用的有当归(Angelica sinensis)、前胡(Peucedanumspp)、防风(Saposhnikoviadivaricata ) 等; 在蔬菜食用方面, 常见的有芹菜(Apiumgraveolens )、芫荽(Coriandrumsa- tivum )、胡萝卜(Daucuscarotavarsativa ) 等; 供做香料和调料用的有茴香( F oeniculumvulgare)、莳萝(Anethumgraveolens) 等; 供杀虫或抗菌用的有毒芹(Coniummacula tum )、刺果芹(Turgenialatifolia)、毒参(Coniummacutatum )、蛇床子(Cnidiummonnieri) 等[4]。
民间主要以伞形科植物的根和茎入药, 根类主要用于防治风寒感冒、咳喘、风湿痈痛; 全草主要用于感冒咳嗽、风湿痈痛、痈疮肿毒; 果实主要用于驱风理气、和胃消食、腹痛、胃痛、驱虫、杀菌等笔者对该科药用植物化学成分进行综述并展望其应用前景。
1 化学成分伞形科植物的化学成分类型比较复杂, 主要有香豆素类、挥发油、多炔类、黄酮类、三菇皂苷、生物碱等类成分。
在亚科和族间的分布有一定的规律性。
香豆索类成分主要分布于芹亚科中,三菇皂俄主要分布于天胡英亚科和变豆菜亚科中,在芹亚科中仅见柴胡属有分布。
植物生理学实验课件9植物组织中可溶性蛋白的测定
可溶性蛋白质含量的计算
可溶性蛋白含量 (μg/g.FW)=标准曲线上查得的 蛋白质量（ μg ） × 提取液体积5/0.1
示意如下：
0.35
Y=-0.00381+0.032029*X 0.30 r=0.9992
0.25
Absorbance
0.20
植物组织中可溶性蛋白的测定
植物叶片衰老过程中，叶绿素含量下降，叶 色变黄，蛋白质含量减少（可溶性蛋白）
课上笔记
三个指标
– 蛋白质含量
考马斯亮蓝
– 新叶2份 – 老叶2份，一次次加 – 转移到1.5毫升 – 显色反应做2次，合计4次（调零磷酸+考马斯亮蓝
– MDA含量
沉重，磨好， 反求诸己
实验原理
in darkness at 30
No 3: 10ppm ABA 20 ml 提取
称叶龄差异明显的叶片各1.00g ，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol， pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提取，匀浆液以10 000g 离心力作用下（4度）离心10min，其上清液即为蛋白提取液。
显色反应
可溶性蛋白测定：缓冲液提取后可溶性蛋白溶于 上清液中，蛋白质提取液与考马斯亮蓝G-250反 应呈蓝色。在595nm处有最大吸收峰。
实验步骤
制备匀浆
48小时前预处理:称取叶片三份,每份1g（最好打圆孔），30度恒 温箱放置。
No 1: water 20ml (control);
No 2: 10ppm BA 20 ml; ℃ 2d.
0.15
0.10
0.05
0.00 0
2 4 6 8 10
胡萝卜组织培养
2.2.2 培养条件
◆接种环境
1先用75%酒精擦拭无菌操作台的内部6个面。
2将现配的75%的酒精、1%次氯酸钠、刀、镊子、无菌纸、无菌水、小烧杯、培养皿、废液缸、试管架、打火机等操作用的工具放置到相应位置。
3将酒精灯添加适当的酒精（不超过容积的2/3），并检查是否可以点燃。
4先开紫外灯40min，后再通风20min。
5进入操作台的物品都要经酒精消毒。
◆操作过程及有关条件
1在无菌操作台上操作。
2点燃酒精灯，倒平板。
3消毒外植体。
把清洗好的胡萝卜块根放入无菌操作台，消毒先用75%酒精
对胡萝卜直根消毒10s 再用1%的次氯酸钙溶液消毒7~8min，用无菌水冲
洗3次，放入成有无菌水的烧杯中待用。
4拆刀镊，并消毒。
5切外植体。
用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度3~5mm左右的小圆片，然后如图所示切，将韧皮部和木质部切去，留下形成层。
6 接种外植体，4~5个/培养皿。
7 封口。
◆培养环境
25℃暗处理
图1
图2
图3
胡
萝
卜
愈
伤
组
织
培
养
化学与生物学院
生物11级二班
31 赵如月。
植物生理学实验报告植物组织中可溶性蛋白和MDA的测定
实验报告课程名称：植物生理学及实验实验类型：探索、综合或验证实验项目名称：植物组织中可溶性蛋白和MDA的测定一、实验目的和要求1.掌握植物组织中蛋白和丙二醛（MDA，malonyldialdehyde）提取。
2.掌握用比色法测定组织粗提液蛋白质和MDA.3.掌握植物组织中超氧物岐化酶（SOD)活性测定方法；4.了解植物衰老的原理。
二、实验内容和原理衰老是指细胞、器官或整个植株生理功能自然衰退，最终导致死亡的过程。
衰老时生理生化变化主要有：蛋白质含量下降，生物膜降解，核酸含量的变化，光合速率下降，呼吸速率下降，植物内源激素的变化等。
植物叶片衰老过程中，叶绿素含量下降，叶色变黄，蛋白质含量减少（可溶性蛋白）。
自由基代谢失调, 并在体内积累膜脂过氧化的产物之一：MDA。
（1）可溶性蛋白测定的原理（2）考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，溶液的吸收光谱发生变化，从465nm偏转到595nm，并表现出在595nm处的吸收值与溶液中的蛋白质含量有线性关系，其范围从0~1000g/ml。
据此可制作蛋白质的标准曲线，牛血清蛋白为常用的标准蛋白。
（3）待测样品经缓冲液提取后，可溶性蛋白溶于上清液中，蛋白质提取液与考马斯亮蓝G-250反应呈蓝色。
测定595nm吸收值，并根据蛋白质的标准曲线，得到样品中可溶性蛋白的含量。
（4）MDA测定原理（5）MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸(TBA)反应，形成粉红色复合物（3，5，5－三甲基噁唑2，4-二酮），该复合物在532nm处有最大吸收峰；600nm处是最小吸收峰，两峰差值的消光系数为155 (mM)-1 cm-1（6）超氧物岐化酶（SOD)活性测定原理：→ H2O2+ O22O2·−+2H2O SOD四氮唑蓝(NBT)光照还原的分光光度法:核黄素受光照产生的O2.-能将NBT还原为蓝色的甲腙，甲腙在560nm波长有最大吸收,而SOD能清除O2.-, 抑制甲腙的产生使吸收减小。
植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定
实验四植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。
二、原理（一）分离提取原理在80-85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2 mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1 mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。
（二）测定原理1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。
蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10 min后出现，而核糖在相同温度下，加热3 min后出现。
此法灵敏度高，糖含量达30 μg即可测定。
2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570 nm下有最大光吸收。
在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。
3.考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595 nm，在一定范围内（0-1000 μg /mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。
此法快速灵敏，反应在2 min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。
三、实验用品（一）实验材料：植物样品。
（二）器皿：1. 25 mL刻度试管⨯8 ，15 mL试管⨯20；2. 10 mL离心管⨯2；3. 容量瓶：50 mL⨯1 ，25 mL⨯1；4. 移液管：5 mL⨯2，2 mL⨯4，1 mL⨯2，0.1 mL⨯2；5. 恒温水浴锅；6. 离心机；7. 电子天平；8. 分光光度计。
药用植物学考试练习题及答案11_2023_背题版
***************************************************************************************试题说明本套试题共包括1套试卷每题均显示答案和解析药用植物学考试练习题及答案11(500题)***************************************************************************************药用植物学考试练习题及答案111.[单选题]从叶的组成上来看，下列植物的叶属于完全叶的是( )。
A)桃B)白菜C)女贞D)台湾相思答案:A解析:2.[单选题]垂柳的花序为（ ）。
A)总状花序B)伞房花序C)穗状花序D)柔荑花序答案:D解析:3.[单选题]植物细胞中进行呼吸作用的细胞器是( )。
A)细胞核B)溶酶体C)线粒体D)核糖体答案:C解析:4.[单选题]玉米胚乳外的糊粉层中主要的贮藏物质是( )。
A)糖类B)脂肪C)蛋白质D)核酸答案:C解析:A)羽状网状脉B)掌状网状脉C)平行脉D)二叉脉答案:D解析:6.[单选题]大多数双子叶植物幼根的中柱不包括( )。
A)中柱鞘B)初生木质部C)髓D)初生韧皮部答案:C解析:7.[单选题]蓖麻种子的营养物质主要贮存在( )。
A)种皮B)胚乳C)胚轴D)子叶答案:B解析:8.[单选题]根中凯氏带存在于内皮层细胞的( )。
A)横向壁和径向壁上B)横向壁和切向壁上C)径向壁和切向壁上D)所有方向的细胞壁上答案:A解析:9.[单选题]一般单子叶植物具有( )A)网状脉B)平行脉C)掌状脉D)羽状脉答案:B解析:10.[单选题]植物细胞特有的细胞器是( )。
C)高尔基体D)细胞核答案:B解析:二、 多选题 （共43题）11.[单选题]禾本科植物根的内皮层细胞在发育后期常五面增厚，不加厚的是 ( )。
A)横向壁B)径向壁C)内切向壁D)外切向壁答案:D解析:12.[单选题]松树木材中兼有输导和机械支持作用的结构成分是( )。
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量测定
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要：目的通过标准曲线的绘制，测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方法。
方法分别用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。
结论关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。
在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。
可溶性蛋白是植物体内氮素存在的主要形式，其含量的多少与植物的代谢和衰老有密切的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有很大关系。
白菜是十字花科芸薹属叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰富，素有“菜中之王”的美称，为广大群众所喜爱。
芹菜属伞形科植物，富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇静的功效。
菠菜藜科一年生草本植物，菠菜含有丰富的维他命A、维他命C及矿物质，它对各种贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助治疗作用。
2 材料与方法2.1 植物体内可溶性糖含量的测定新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取0.5—1.0g）葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂分光光度计；分析天平；恒温水浴；试管；三角瓶；移液管；剪刀；玻璃棒；滤纸；研钵样品中可溶性糖的提取：称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～1.0 g （或干样粉5～100 mg ），放入大试管中，加入15 ml 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min，取出冷却，过滤入100 ml 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。
实验五：植物组织蛋白质提取与含量测定
1.4
1.0 5 Y
1.9
1.0 5 Z
四、实验步骤
三、样品蛋白质含量测定
2. 蛋白质含量测定：
两个原则来选择合适稀释倍数： 样品A595不能超过标准蛋白的最大A595值；
去除最小吸光度，选择中间吸光度。
将待测液最佳A595值(Y)代入标准曲线所得方程式中求出待测液中蛋白含量（X）
3. 蛋白质含量计算：
添加
• 按下页表所示依次加入各种试剂；
• 震荡，混匀； • 室温下静置5 min;
混匀
静置
测定 绘制
• λ =595 nm处测各管吸光度； • 绘制标准曲线，X=标准BSA含量，Y=吸光度，
四、实验步骤
一、标准曲线制作 管号 BSA(mL) 0.9%NaCl(mL) 0 0 1.0 1 0.2 0.8 2 0.4 0.6 3 0.6 0.4 4 0.8 0.2 5 1.0 1.0
定容
• 上清定容，用0.9% NaCl定容至10 mL(样品液)，
四、实验步骤
三、样品蛋白质含量测定
1. 样品液的稀释：
管号
稀释倍数（n） 样品液
1
5 0.2
2
10 0.1
3
15 0.1
4
20 0.1
0.9% NaCl
待测液 G-250(mL) A595
0.8
1.0 5 W
0.9
1.0 5 X
G-250(mL)
蛋白含量（ug）
5
0
5
20
5
40
5
60
5
80
5
100
5
X
振荡混匀，静置5 min，以0号管为空白对照 A595
高中生物适合在家做的实验
高中生物适合在家做的实验以高中生物适合在家做的实验为标题，写一篇文章:高中生物是一门有趣且实用的学科，通过实验可以更好地理解生物学的知识。
在家里也可以进行一些简单的生物实验，既能加深对生物学的理解，又能提高实验操作的能力。
下面，我将介绍几个适合高中生在家进行的生物实验。
实验一：酵母发酵实验材料：酵母、糖、温水、透明塑料瓶、气球步骤：1. 将适量的酵母和糖放入透明塑料瓶中；2. 加入适量的温水，用盖子封紧瓶口；3. 将气球套在瓶口上；4. 观察一段时间后，气球会逐渐膨胀。
实验二：植物光合作用实验材料：绿色植物（如水葱、豆苗）、水、酒精、试管步骤：1. 将绿色植物放入试管中；2. 加入适量的水，使植物完全浸泡；3. 用酒精替代水中的二氧化碳，将试管封闭；4. 放置一段时间后，观察植物的颜色变化。
实验三：蚯蚓觅食实验材料：蚯蚓、泥土、透明容器步骤：1. 准备一段泥土和透明容器；2. 将蚯蚓放入容器中；3. 观察蚯蚓在泥土中的觅食行为；4. 注意观察蚯蚓的身体结构和运动方式。
实验四：鸡蛋浸泡实验材料：鸡蛋、醋、透明容器步骤：1. 将鸡蛋放入透明容器中；2. 倒入足够的醋，使鸡蛋完全浸泡；3. 放置一段时间后，观察鸡蛋外壳的变化；4. 尝试轻轻捏碎鸡蛋，观察内部结构的变化。
实验五：果蝇觅食实验材料：果蝇、果蝇培养基、透明容器步骤：1. 准备透明容器和培养基；2. 将果蝇放入容器中；3. 在容器中放入适量的培养基；4. 观察果蝇的觅食行为和繁殖情况。
这些实验都比较简单，但能够帮助我们更好地理解生物学知识。
在进行实验时，我们要注意安全，遵循实验操作规范，避免造成伤害。
同时，还可以记录实验过程和结果，写下实验报告，进一步加深对生物学的理解。
通过在家进行这些实验，我们不仅可以提高实验操作的能力，还能培养对生物学的兴趣。
希望大家能够积极参与这些实验，享受实验带来的乐趣，并在实验中不断探索和学习。
生物学是一门需要实践和观察的学科，通过这些实验，我们能更加深入地了解生物世界的奥秘。
【精品】芹菜解剖结构研究48
芹菜解剖结构研究摘要：采用常规石蜡切片法对芹菜根、茎、叶结构，通过显微镜观察法进行探究。
关键词：石蜡切片法，显微镜观察法引言：芹菜(Apium graveolens)又称富菜，属伞形科植物。
是原产于欧洲地中海地区一带。
在中国烹饪中是一种常见的蔬菜。
芹菜可食用部分主要为叶柄，芹菜含有丰富蛋白质、胡萝卜素、碳水化合物、脂肪、B族维生素、维生素C、糖类、氨基酸及矿物质和膳食纤，其中磷和钙的含量较高。
100克芹菜中含蛋白质2.2克、钙8.5毫克、磷61毫克、铁8.5毫克。
另外芹菜叶中营养成分要高于芹菜茎，叶中胡萝卜素含量是茎的88倍；维生素C的含量是茎的13倍；维生素B1是茎的17倍；蛋白质是茎的11倍；钙超过茎2倍。
有水芹、旱芹两种，功能相近，药用以旱芹为佳。
旱芹香气较浓，又名"香芹"，亦称"药芹"。
芹菜是高纤维食物,它经肠内消化作用产生一种木质素或肠内脂的物质,这类物质是一种抗氧化剂,常吃芹菜,尤其是吃芹菜叶,对预防高血压、动脉硬化等都十分有益,并有辅助治疗作用。
芹菜是一年或两年生草本植物，株高约50～80厘米。
茎一般都在手指粗细，中间为空。
根呈须状。
叶为羽状复叶卵形。
花白色。
芹菜每年六月开始播种，一星期左右就可出苗，经过六十天左右生长，就可以食用。
芹菜的开花期为七月至十一月，花朵细小呈白色，里面可找到种子。
芹菜耐寒不喜高温，最佳温度在15到20摄氏度之间为佳。
通过本研究旨在探究芹菜根、茎、叶结构和了解其耐寒性的原因。
一、实验材料及用具芹菜、光学显微镜、双面刀片、滤纸、滴管、载玻片、放大镜、蕃红—固绿、石蜡、FAA液、毛笔、培养皿、盖玻片，0.1%番红溶液、50％酒精溶液二、实验方法茎：将新鲜材料切取适当长度且成熟的芹菜茎的横切面（同一器官做连续性横切片，切面面积小于1cm²）和纵切面，用FAA液固定，然后按下列步骤：软化、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展开、蕃红—固绿复染、中性树胶封片，制成石蜡切片，在光学显微镜下观察，拍照。
植物蛋白质的提取和测定实验
植物蛋白质含量的测定一、原理查询资料，得知玉米蛋白质含量较高。
再经Tris-HCl缓冲液研磨、离心后，得可溶性蛋白质于上清液中，将沉淀用碱水解则得到非可溶性蛋白质的提取液，将提取液与卡马斯亮蓝溶液反应呈蓝色，在595nm处有最大吸收峰。
在一定范围内，蛋白质含量与反应液在595nm 波光的吸收度呈正比，由此可求出蛋白质的含量二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：玉米粒（二）仪器设备：分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；离心管；刻度移液管；微量滴定管；试管等（三）试剂：100μg／ml牛血清标准蛋白质溶液；0.15mol/L NaCl; 1mol/LNaOH;50mmol/L Tris-HCl提取液、卡马斯亮蓝溶液三、实验步骤（一）标准曲线的绘制编号 0 1 2 3 4 5标准蛋白（ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1Tris-HCl提取液(ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0卡马斯亮蓝溶液(ml) 5 5 5 5 5 5每管牛血清蛋白含量(ml) 0 20 40 60 80 100加入表中的试剂，摇匀，室温放置4分钟，以不加标准蛋白的0号管为空白，在595nm波长处测定吸光度。
以标准蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定称取鲜样0.5g，加提取液6ml，研磨成匀浆后，在10000r/min,4℃条件下离心20min，上清液即为可溶性蛋白质提取液。
沉淀加3ml1mol/L NaOH溶液，在90℃恒温水浴锅中加热20min，在4000r/min，4℃条件下离心10min，上清液为非可溶性蛋白质提取液。
取上清液各0.1ml，分别加入Tris-HCl提取液0.9ml，然后再分别加入卡马斯亮蓝溶液5ml，摇匀，于595nm 波长处测定吸光值。
根据吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。
四、结果计算：样品中蛋白的含量（μg/g）＝查标准曲线值（μg）×提取液总体积（ml）/(样品鲜重（g）×测定时加样量（ml）)粗蛋白量（％）＝蛋白氮含量×6.2。
伞形科ppt课件
.
16
当归 Radix Angelicae
Sinensis
植物形态 产地 性状 显微特征 化学成分 药理功效 习题
[来源] 本品为伞形科植物
当归Angelica sinensis 的干燥根。
[来源]本品为伞形科植物
茴香Foeniculum vulgare 的
干燥成熟果实。 [产地]主产于山西、内蒙古、黑 龙江等地）；
其他各地均有栽培。
.
10
[植物形态]
多年生草本，全株具粉霜，有强烈的 香气。茎直立，上部分枝，有棱。叶 互生，二至四回羽状细裂，最终裂片 丝状；下部叶具长柄，基部鞘状抱茎。 复伞形花序顶生，花小，金黄色。双 悬果卵状长圆形，有5条隆起的纵棱。
CHO
H
CHCHC3 H C2 H CHC2 H
OC 3 H
d-小茴香酮
茴香脑
甲基胡椒酚
茴香醛
.
15
[理化鉴别] 粉末加乙醚冷浸，加7%盐酸羟胺甲醇液、 20%氢氧化钾乙醇液，调pH值至酸，再加1%三氯化铁 乙醇溶液1～2滴呈紫色(检查香豆素)。
[药理作用]本品挥发油能促进胃肠蠕动和分泌， 能排除肠内气体；并有祛痰作用。
O O
邻羧基苯正戊酮 D2,4-二氢邻苯二甲酸酐
2、酚酸类：阿魏酸(ferulic acid)等
3、多糖类：如具有抗补体作用的酸性多糖，由D-半乳糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、葡萄糖醛酸
半乳糖醛酸等组成。
.
25
1.对子宫的作用：含兴奋子宫和抑制子宫两种成分；抑
药 理
制成分为挥发油，兴奋成分为水溶性或醇溶性的非挥发 性物质。
植物组织中可溶性蛋白质含量的测定
5．植物组织中可溶性蛋白质含量的测定Ⅰ考马斯亮蓝G – 250 染色法一、原理考马斯亮蓝G – 250 （Coomassie brilliant blue ，G-250 ）法是利用蛋白质–染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。
考马斯亮蓝G-250 存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。
它和蛋白质通过范德瓦尔键结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律。
此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由465 nm 变成595 nm ，通过测定595 nm 处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约2 min 即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定 1 h ，之后，蛋白质–染料复合物发生聚合并沉淀出来。
此法灵敏度高（比Lowry 法灵敏 4 倍），易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。
其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物材料。
（二）试剂1. 标准蛋白质溶液（100 μg ／mL 牛血清白蛋白）：称取牛血清蛋白25 mg ，加水溶解并定容至100 mL ，吸取上述溶液40 mL ，用蒸馏水稀释至100 mL 即可。
2. 考马斯亮蓝试剂：称取100 mg 考马斯亮蓝G-250 ，溶于50 mL 90 ％乙醇中，加入100 mL 85 ％（W ／V ）的磷酸，再用蒸馏水定容到1000 mL ，贮于棕色瓶中。
常温下可保存一个月。
（三）仪器设备分光光度计，离心机，研钵，烧杯，量瓶，移液管，试管等。
三、实验步骤1. 标准曲线的绘制取 6 支试管，按表26–1 加入试剂，摇匀，向各管中加入 5 mL 考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5 min 左右，以0 号试管为空白对照，在595 nm 下比色测定吸光度。
以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
植物提取蛋白实验报告
一、实验目的1. 了解植物蛋白质提取的基本原理和方法。
2. 掌握三氯乙酸-丙酮法提取植物全蛋白的操作步骤。
3. 学习蛋白质含量测定的方法。
二、实验原理植物蛋白质是植物细胞内的重要组成部分，具有多种生物学功能。
本实验采用三氯乙酸-丙酮法提取植物全蛋白，该方法能够有效地使蛋白质变性并沉淀，同时阻止多酚氧化酶和其他氧化酶类失活，防止蛋白质互相结合形成难溶的复合体。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜、甘蓝等）。
2. 试剂：三氯乙酸、巯基乙醇、丙酮、R2D2 蛋白质溶解缓冲液、UKS 蛋白质溶解缓冲液、IPG 胶条水化液。
3. 仪器：研钵和研槌、离心机、液氮、冰箱、电子天平。
四、实验步骤1. 植物材料处理- 将新鲜植物叶片洗净，用液氮快速冷冻，然后研磨成细小的粉末。
- 将约200 μl 粉末转移到 2 ml 的离心管中。
2. 蛋白质沉淀与变性- 加入 1.8 ml 预冷的三氯乙酸-2ME-丙酮溶液，混合后置于 -20℃ 冰箱中沉淀 1 小时。
- 三氯乙酸和丙酮可以使蛋白质变性并沉淀，同时阻止多酚氧化酶和其他氧化酶类失活。
3. 离心分离- 将混合液在4℃、48000 rpm 下离心 1 小时，弃去上清液。
- 加入等体积的冰浴丙酮（含 0.07% 的巯基乙醇），摇匀后再次离心 1 小时。
- 弃去上清液，将沉淀用真空干燥箱干燥，备用。
4. 蛋白质溶解- 将干燥的沉淀加入适量的 R2D2 蛋白质溶解缓冲液，室温下放置 30 分钟，使蛋白充分溶于缓冲液中。
- 再次离心 1 小时，弃去上清液。
5. 蛋白质含量测定- 采用 Brandford 法测定蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 通过三氯乙酸-丙酮法提取植物全蛋白，实验成功得到了较高纯度的蛋白质。
2. 蛋白质含量测定结果显示，提取的蛋白质含量符合预期。
六、实验讨论1. 三氯乙酸-丙酮法是一种高效、简便的植物全蛋白提取方法，适用于多种植物组织。
2. 在实验过程中，需要注意以下几点：- 严格控制实验条件，如温度、pH 值等。
药用植物学单选题
药用植物学单选题1：13.苔藓植物的孢子体___1___在配子体上。
1.寄生2.腐生3.共生4.借生3：76.种子无胚乳的植物是(2 )。
1.蓖麻2.向日葵3.小麦4.玉米4：39.蕨类植物有配子体和孢子体两种植物，其中幼小孢子体(3 )于配子体上。
1.腐生2.共生3.寄生4.借生5：83.药用植物银杏的种子入药时叫(2 )。
1.火麻仁2.白果3.五味子4.黄芥子6：29.植物体常具膜质托叶鞘的是。
41.蔷薇科2.木兰科3.毛茛科4.蓼科7：7.一般成熟胚囊内的细胞数为。
11.8个2.6个3.4个4.2个8：8.侧膜胎座是由___2___组成的。
1.单心皮雌蕊2.合生心皮雌蕊3.隔膜消失雌蕊4.子房多室雌蕊9：122.维管束进入胚囊的通道称( 2)。
1.珠心2.珠孔3.合点4.主脉10：114．李时珍的《本草纲目》的分类方法属于(2 )。
1.自然分类系统2.人为分类系统3.药用部位分类系统4.主要功效分类系统11：77.厚壁组织中具有( 4)。
1.卵细胞2.分泌细胞3.液泡4.石细胞12：128.说明被子植物分类的有四大系统，其中较为重要的是(4 )。
1.哈钦松系统与林奈系统2.恩格勒系统与陈世骧系统3.林奈系统与陈世骧系统4.恩格勒系统与哈钦松系统13：89.具有佛焰苞花序的药用植物是( 1)。
1.掌叶半夏2.桔梗3.金樱子4.白术14：68.在没有加粗的单子叶植物，就没有( 4)。
1.原分生组织2.居间分生组织3.顶端分生组织4.侧生分生组织15：125.具有异形叶的药用植物是(2 )。
1.人参与党参2.人参与慈姑3.慈姑与党参4.枸杞与沙棘16：121.花常具副萼的科是( 4)。
1.禾本科2.十字花科3.夹竹桃科4.锦葵科17：70.具托叶鞘的科是(3)。
1.豆科2.毛茛科3.蓼科4.苋科18：137.入药部位具一定毒性的药用植物是(3 )。
1.天南星与地黄2.大黄与地黄3.天南星与半夏4.大黄与半夏19：90.属于多年生草本植物的是( 4)。
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学号：191202125生化实验报告论文（09 级本科）题目：伞形科植物蛋白质的系列实验系（部）院：生命科学与工程系专业：生物科学作者姓名：完成日期：2010 年12 月25 日伞形科植物蛋白质的实验摘要：通过对伞形科植物中可溶性蛋白质的提取，分离与纯化，含量及相对分子品质的测定和薄层层析五个实验，学会蛋白质系列实验的实验方法与实验原理。
关键词：伞形科植物中可溶性蛋白质，提取，分离与纯化，含量测定，性对分子品质测定。
引言：蛋白质的制备是一项十分细致的工作。
涉及物理学、化学和生物学的知识很广。
近年来虽然有了不改进，但其主要原理仍不外乎两个方面：一是利用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配于可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析、有机溶剂提取、层析和结晶等；二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同区域而达到分离的目的，如电泳、超离心、超滤等。
由于蛋白质不能溶化，也不能蒸发，所能分配的物相只限于固相和液相，并在这两相间互相交替进行分离纯化。
制备方法可按照分子大小、形状、带电性质及溶解度等主要因素进行分类。
按分子大小和形态分为差速离心、超滤、分子筛及透析等方法；按溶解度分为盐析、溶剂抽提、分配层析、逆流分配及结晶等方法；按电荷差异分为电泳、电渗析、等电点沉淀、离子交换层析及吸附层析等；按生物功能专一性有亲合层析法等★一:伞形科植物中蛋白质的提取大部分蛋白质均溶于水、稀盐、稀碱或稀酸溶液中。
因此蛋白质的提取一般以水为主。
稀盐溶液和缓冲溶液对蛋白质稳定性好、溶度大，也是提取蛋白质的最常用溶剂。
\提取步骤：1．2克植物叶片加提取液与少量石英砂匀浆倒入离心管，加4毫升提取液离心4摄氏度下在1000转离心机离心10分上清液（留1毫升测蛋白含量）加3倍体积预冷丙酮放置（0.5小时，-20摄氏度）4摄氏度下离心10分沉淀2.5-3倍体积的预冷丙酮洗涤4摄氏度下在1000转离心机离心10分留沉淀并在-20摄氏度下放置2.2克植物叶片加提取液与少量石英砂匀浆倒入烧杯，超声4摄氏度下超声2分离心4摄氏度下在1000转离心机离心10分上清液（留1毫升测蛋白含量）加3倍体积预冷丙酮放置（0.5小时，-20摄氏度）4摄氏度下离心10分沉淀2.5-3倍体积的预冷丙酮洗涤4摄氏度下在1000转离心机离心10分留沉淀并在-20摄氏度下放置分析：在各种细胞中普遍存在着蛋白水解酶，提取时要注意防止由它引起的水解。
降低提取温度其目的之一也是防止蛋白水解酶的水解。
多数蛋白水解酶的最适PH在3～5或更高些，因在较低PH条件下可降低蛋白质水解酶引起的破坏程度。
低pH可使许多酶的酶原在提取过程中不致启动而保留在酶原状态，不表现水解活力。
加蛋白质水解酶的抑制剂也同样起保护作用，如以丝氨酸为活性中心的酶加二异丙基氟磷酸，以巯基为中心的酶加对氯汞苯甲酸等。
提取溶液中加有机溶剂时也能产生相类似的作用。
★二，蛋白含量的测定考马斯亮蓝G-250是利用染料与蛋白质结合的原理，定量测定微量蛋白含量的快速方法。
考马斯亮蓝G-250存在两种不同的颜色，红色与蓝色，此染料与蛋白质结合由红色转变为蓝色，最大吸收由465纳米变为595纳米，通过测定595纳米处光吸收的增加量可知道与其结合的含量。
实验步骤：试剂管号0 1 2 3 4 5标准蛋白质0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00蒸馏水量 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0考马斯亮蓝 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00蛋白质含量0 20 40 60 80 100吸光度0 0.161 0.317 0.412 0.614 0.674微量蛋白的吸光值名称未超声处理超声处理1 未超声处理超声处理2吸光值 0.354 0.405 0.3790.230 蛋白质含量 4.871262 5.601735 2.6146685 1.547605蛋白质含量计算公式：蛋白质含量=Y .N\V绘制曲线：蛋白含量标准曲线y = 0.0069x + 0.0184R 2 = 0.9870.10.20.30.40.50.60.70.8020406080100120蛋白含量吸光度系列1线性 (系列1)蛋白含量1=4.871262*10\0.1 蛋白含量1=5.601735*10\0.1 蛋白含量1=52.29337*10\0.1 蛋白含量1=32.9429*10\0.2 分析：由蛋白质含量的实验可以看出随着蛋白含量的增加，蛋白质与考马斯亮蓝G-250的结合物的吸光值也相应增加，在该实验操作过程中应注意添加试剂的精确程度。
★ 三．分离与纯化有机溶剂分离纯化法有机溶剂能降低溶液的介电常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度降低。
凝胶层析最常用的蛋白质分离方法。
把适当的凝胶颗粒装填到玻璃管中制成层析柱，于柱内加入欲分离的混合物，然后用大量蒸镏水或其它稀溶液洗柱，由于混合物中各物质的分子大小和形状不同，在洗柱过程中，分子量最大的物质不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗 粒间的空隙最先流出柱外。
分子量最小的物质因能进入凝胶网孔而受阻滞，流速缓慢，致使最后流出柱外。
由于物质在分离过程中的阻滞减速现象，有人也称之为阻滞扩散层析、排阻层析等， 凝胶过滤是分子筛的一种。
实验步骤：1.凝胶的选择与处理2.柱装3.平衡4.加样5.洗脱 6测蛋白质含量与考马斯亮蓝G-250结合后的OD595的值 实验结果与资料 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 管号 0.151 0.241 0.722 0.906 0.815 0.731 0.679 0.613 管号 9 10 11 12 13 14 15 16 吸光度 1.475 0.36 0.301 0.285 0.143 0.115 0.142 0.099管号 17 18 19 20 21 22 23 24 吸光度 0.111 0.171 0.141 0.124 0.178 0.186 0.138 0.161绘制曲线：层析图谱00.20.40.60.81051015202530管号吸光度系列1分析：有机溶剂与水作用能破坏蛋白质的水化膜，使蛋白质在一定浓度的有机溶剂中沉淀析出。
常用的有机溶剂是乙醇和丙酮，由于有机溶剂的加入易引起变性失活，尤其乙醇和水混合释放热量，操作一般宜在低温下进行，且在加入有机溶剂时注意搅拌均匀以免局部浓度过大。
用此法所析出的沉淀一般比盐析法易过滤或离心沉降。
分离后的蛋白质沉淀应立即用水或缓冲液溶解，以降低有机溶剂的浓度。
操作时的pH 值大多数控制在待沉淀蛋白质等电点附近。
有机溶剂在中性盐存在时能增加蛋白质的溶解度，减少变性和提高分离的效果。
★ 四．SDS-PAGE 检测纯化蛋白质及相对分子量．SDS 是十二烷基硫酸钠的简称，它是一种阴离子去污剂，它能按一定比例与蛋白质分子结合成为带负电荷的复合物，其负电荷远远超过了蛋白质原有的电荷，这样就消除或降低了不同蛋白质之间原有的电荷差别，使蛋白质分子电泳迁移率只取决于分子大小这一个因素。
根据标准蛋白质的相对分子质量的对数对迁移率所作的标准曲线，就可以求得未知蛋白质的相对分子质量。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，目前常用的垂直平板电泳，该法样品的起点一致，便于比较分离胶的灌制 浓缩胶的配制和灌制 样品的制备1)标准蛋白质样品的制备 2)待测样品的制备(1)待浓缩胶完全聚合后，小心拔出齿梳，用电极缓冲液洗涤加样孔(梳孔)数次，然后将电泳槽注满电极缓冲液(2)用微量注射器按号向凝胶梳孔内加样。
(3)接上电泳仪，上电极接电源的负极，下电极接电源的正极。
待蓝色的溴酚蓝条带迁移至距凝胶下端约lcm 时，停止电泳。
染色与脱色小心将胶取出，置于一大培养皿中。
加染色液染色1h ，倾出染色液，加入脱色液，数小时更换一次脱色液，直至背景清晰 。
用直尺分别量出标准蛋白质、待测蛋白质区带中心以及钢丝距分离胶顶端的距离：相对迁移率= 样品迁移距离（cm）/染料迁移距离（cm）以标准蛋白质相对分子质量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线。
根据待测蛋白质样品的相对迁移率，从标准曲线上查出其相对分子质量分析：1 2 4 5 6 7泳道1 泳道2迁移率面积强度迁移率面积强度条带1 6 3117 175 5 2685 159条带2 75 2920 87 75 1435 66条带3 107 3147 96聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）之所以能将不同的蛋白质生物大分子化合物分开，是因为这些蛋白质生物大分子化合物所带电荷的差异和分子大小不同。
如果将电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，这些有机化合物在凝胶上的迁移率则完全取决于相对分子质量。
注意：在电泳槽的两玻璃之间灌注，留出梳齿的齿高加lcm的空间以便灌注浓缩胶。
用滴管小心地在溶液上覆盖一层重蒸水，将电泳槽垂直静置于室温下约30～60min，分离胶则聚合，待分离胶聚合完全后，除去覆盖的重蒸水，尽可能去干净。
并得出伞形科植物中可溶性蛋白质的相对分子量。
★五．测定蛋白质的等电点配备pH浓度梯度（pH 3,4,5,6,7,8）的缓冲液，加入试管中，再加入蛋白溶液。
根据蛋白质在等电点处溶解度最小的原理，比较各个试管浑浊程度判断蛋白质大概等电点。
★六．蛋白质的薄层层析1．蛋白质的水解：取实验一所保存的样品置于1.5mL的EP管中，在110℃水解22h后，低温保存备用。
2.点样：在硅胶G板下缘2cm处确定点样线，一般距离1.5~2cm一个样点。
用微量点样器吸取蛋白质水解液点样，点完每个样点后用吹风机吹干。
.3 展层：在层析缸中加入1cm高的展开剂，平衡30min。
将G板点样端插入展开剂中，盖好层析缸盖。
当展开剂扩散至距离G板上端2cm时，停止展层。
取出G板，用铅笔描出展层前端界线，用吹风机吹干。
4 显色：用喷雾剂将茚三酮显色剂均匀喷在G板上，然后放在60~85℃的烘箱中5~10min。
取出后用铅笔描出各条色带顶端到点样线的距离，计算Rf值。
RF值=点样点到层析点中心的距离/点样点到溶剂前沿的距离红芪y = 0.5443x + 0.0492R 2 = 0.95970.000.100.200.300.400.500.600.700.000.200.400.600.80 1.00 1.20葡萄糖的标准含量O D -490系列1线性 (系列1)红芪0.000.200.400.600.801.001.20123456葡萄糖的标准含量C D -490系列1系列2分析：由蛋白质薄层层析实验得出伞形科植物中初步测定可溶性蛋白有 氨基酸和色氨酸，不含有脯氨酸和羟脯氨酸。
参考文献：生物化学实验技术，生物化学教材。