分子生物学实验室常用仪器及使用方法
分子生物学实验室仪器使用说明书
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分子生物学实验室仪器使用说明书一、引言分子生物学实验室仪器的使用是进行基因研究和分析的重要环节,正确的仪器操作和维护对于保证实验结果的准确性具有至关重要的作用。
本说明书旨在提供对分子生物学实验室仪器的正确使用方法和维护技巧的指导,以确保实验室工作的顺利进行。
二、常用仪器1. 基因扩增仪基因扩增仪是分子生物学实验室常用的仪器之一,其中最常见的是PCR仪。
以下是PCR仪的使用步骤:- 将待扩增的DNA模板、引物和试剂添加至PCR管或96孔板中;- 根据所需的扩增程序,在PCR仪面板上设置合适的温度和时间参数;- 启动PCR仪,开始扩增;- 扩增结束后,及时取出试管或孔板,并进行下一步实验操作。
2. 凝胶电泳仪凝胶电泳仪主要用于观察DNA、RNA或蛋白质的迁移情况以及分子大小的测定。
以下是凝胶电泳仪的使用步骤:- 准备所需的琼脂糖凝胶,并注入到电泳槽中;- 将待检测的样品混合液加入到电泳槽中的样品孔中;- 在电泳槽两侧连接正负极电源,并设置合适的电压和时间参数;- 启动电源,进行电泳;- 电泳结束后,取出凝胶,进行染色或进一步分析。
3. 离心机离心机用于分离混合物中的固体颗粒和液体,是分子生物学实验室必备的仪器之一。
以下是离心机的使用步骤:- 将待离心的样品均匀加入离心管中,并保持离心管的平衡;- 将离心管放入离心机转盘的相应位置,并注意转盘的平衡;- 根据离心速度和时间要求,设置合适的参数;- 启动离心机,开始离心过程;- 离心结束后,小心取出离心管,注意避免离心管的倾斜或颠倒。
三、常见问题及处理方法1. 仪器出现异常- 若仪器出现异常操作或显示异常,应首先检查是否按照正确的使用步骤进行操作;- 仔细阅读仪器说明书,查看是否存在使用特殊注意事项;- 若仍无法解决问题,及时联系仪器维修人员进行检修。
2. 仪器维护- 每次使用仪器后,应进行基本的清洁和消毒,保持仪器干净整洁;- 定期检查仪器是否正常,如电源是否接触良好,仪器表面是否有明显损坏等;- 根据仪器的要求,及时更换耗材和维护配件。
分子生物学实验:安全与仪器使用
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分子生物学实验安全
紫外线辐射的危害和防护
在实验室里常用的紫外光源包括 手提式紫外灯和紫外透射仪、凝胶成像系统 。 只能通过吸收有害波长的滤片或安全玻璃片才能观察。在紫外光下操作时要戴合适的预防性手 套。应佩戴具有紫外线防护功能的护目镜和/或防护面罩,并遮蔽暴露的皮肤。
建议:使用荧光染料,切胶在Dark reader上操作。
分子生物学实验安全
化学试剂的安全使用
DTT 二硫苏糖醇
很强的还原剂,散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危 害健康。当使用固体或高浓度储存液时,戴手套和护目镜,在通风橱中 操作。 PMSF 苯甲基磺酰氟 一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常 大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜, 始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下,要立即用大量的水冲洗眼睛或 皮肤,已污染的工作服作为有害废物处理。 Triton X-100 引起严重的眼睛刺激和灼伤。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。戴合适 的手套和护目镜。
分子生物学实验安全
化学试剂的安全使用
过硫酸铵 (NH4)2S2O8 对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命 。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱里操作, 操作完后彻底洗手。 叠氮钠(NaN3) 毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要 标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安 全护目镜,操作时要格外小心。 吉姆萨(Giemsa) 染料咽下可致命或引起眼睛失明,通过吸入和皮肤吸收是有毒的。 其可能的危险是不可逆的效应。戴合适的手套和安全护目镜。在化学通 风橱里操作,不要吸入其粉末。
Dark Reader 荧光透射仪 (Transilluminators) 的特点 : 1.Dark Reader 使用新的无毒 DNA 染料 : SYBR Green, SYBR Gold等, 避免了Ethidium Bromide (EB) 染料对人体的伤害。 2.Dark Reader使用 可见光 (400-500 nm),没有UV(紫外线),将其对人体的伤害降低 至零。同时,大大降低了 对DNA样本的损伤,克隆DNA的效率将成百倍的提高。 3.灵敏度高,远远高于UV检测仪。 4.适 用染料范围广;荧光素 (fluorescein), AttoPhos, GelStar, Vistra Green, SYPRO Orange, red-shifted GFP variants等都可使用。对于Rhodamines, Ethidium Bromide(EB)等激发光大于500 nm的染料亦 可适用;可以广泛用于DNA、RNA 以及蛋白质的检测。 5.Dark Reader同时提供琥珀色镜片的观 察眼镜(AG16),供切割凝胶时使用。 紫外照射消毒后由于空气中臭氧富集,不宜立即开始工作,应在停止紫外照射30 min后开始 工作,有条件的实验室,可安装无臭氧紫外灯。 超净工作台中进行紫外照射消毒后,也应用强风进行吹扫后再进行工作,以免臭氧危害身 体健康。
现代分子生物学常用实验仪器
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实验一分子生物学实验室常用仪器及使用事实证明,在科学飞速发展的今天,无论从事哪个领域的研究,要想突破,除了有良好的理论基础外,更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。
一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外,还具有一些特殊用途的仪器,这些仪器一般较精密,价格昂贵。
下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。
一、冷冻离心机低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。
基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术,因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。
在国内,有多个厂家生产冷冻离心机,本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型(上海安亭),落地式。
配有角式转头:6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。
极限转速20000rpm。
1. 安装与调试离心机应放置在水平坚固的地面上,应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中,周围空气应呈中性,且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体,环境温度应在0~30℃之间,相对湿度小于80%。
试转前应先打开盖门,用手盘动转轴,轻巧灵活,无异常现象方可上所用的转头。
转子准确到位后打开电源开关,然后用手按住门开关,再按运转键,转动后立即停止,并观察转轴的转向,若逆时针旋转即为正确,机器可投入使用。
2. 操作程序(1)插上电源,待机指示灯亮;打开电源开关,调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定,温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。
(2)设定机器的工作参数,如工作温度,运转时间,工作转速等。
(3)将预先平衡好的样品放置于转头样品架上,关闭机盖。
按控制面板的运转键,离心机开始运转。
在预先设定的加速时间内,其运速升至预先设定的值。
(5)在预先设定的运转时间内(不包括减速时间),离心机开始减速,其转速在预先设定的减速时间内降至零。
分子生物学实验室常用仪器设备简介
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实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介一、实验目的熟悉分子生物学实验室常用仪器并熟练使用二、实验原理1、恒温气浴摇床:用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养,发酵,杂交,生化反应及酶和组织研究等。
2、超净工作台:用于分子生物学无菌操作。
3、低温台式高速离心机:用于分离纯化DNA和蛋白质等,如基因片段的分离,蛋白酶的沉淀和回收等。
4、微量移液管:是连续可调的,计量和转移液体的专用仪器,其装有直接读数容量计。
有多种规格:①0.5-10μL②10-100μL③20-200μL④100-1000μL。
5、电泳仪:用于确定大分子物质的分子量以及鉴定物种亲缘关系的仪器。
6、PCR仪:用于目的基因的扩增,是一对寡糖核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧,从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段。
主要用于基础研究和应用研究等领域。
7、灭菌锅:用于细菌和细胞培养及核酸等有关实验使用的试剂,器皿及实验用具的严格灭菌。
三、实验仪器恒温气浴摇床、超净工作台、低温台式高速离心机、微量移液管、灭菌锅、PCR仪、电泳仪。
四、实验步骤(一)、恒温气浴要穿的使用:1、样品瓶牢固放入弹簧夹中2、接通电源开关,仪器进入准备状态3、参数设定,(设定温度、时间、转速等参数)4、按启动键仪器开始工作,按暂停键可暂停托盘的旋转;5、按电源键,显示屏显示消失,关闭电源总开关(二)、超净工作台的使用1、使用工作台时,先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面,然后用消毒剂擦拭消毒。
2、接通电源,提前30分钟打开紫外灯照射消毒,处理净化工作区内工作台表面积累的微生物,15分钟后,关闭紫外灯,开启送风机。
3、工作台面上,不要存放不必要的物品,以保持工作区内的洁净气流不受干扰。
4、操作结束后,清理工作台面,收集各废弃物,关闭风机及照明开关,用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
5、最后开启工作台紫外灯,照射消毒30分钟后,关闭紫外灯,切断电源。
(三)、低温台式高速离心机的使用1、把离心机放置于平面桌或平面台上,目测使之平衡,用手轻摇一下离心机,检查离心机是否放置平衡。
分子生物学实验教案
![分子生物学实验教案](https://img.taocdn.com/s3/m/33b8cceb172ded630b1cb685.png)
机 5m 后关灯,关灯后 10 分钟打开照明灯,即可使用。 11. 电泳系统:
期保存在超低温环境下,就需要一个液氮罐(-196℃)具有经济、省力和较好地保 持细胞生物学特性的优点。 3.培养箱:37℃恒温箱用于细菌的固体培养和细胞培养。
CO2培养箱适用于培养各种细胞,可恒定地提供一定量的CO2(通常 5%),用来维 持培养液的酸度(pH值)。 37℃恒温空气摇床可进行液体细菌的培养。 4. 水浴锅:用于保温。 25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验,各种生物化学酶反应等试验的保温。 25-100℃水浴箱用于常规试验。 5. 烘箱:主用于烘干实验器皿,有些需要温度高些,有些需要温度低些。用于 RNA 方面 的实验用具,需要在 250℃烤箱中烘干,有些塑料用具只能在 42-45℃的烤箱中进行 烘干。 (二)水的净化装置:随着分子生物学的飞速发展,许多实验对水纯度的要求越来越高。 1. 蒸馏水皿:单蒸水常难以满足实验要求。双蒸水、三蒸水配液,许多实验要去离子水。
3
1. 真空加热干燥箱:核酸在硝酸纤维素膜和尼龙膜上固定,用于杂交实验。 2. 电泳凝胶干燥箱:电泳后的凝胶进行脱水干燥的仪器,一般可将凝胶干燥到一些玻
璃纸上,干燥后的凝胶易于保存。 3. 液氮冷冻干燥:适用于活性蛋白质样品的干燥与结晶。 4. 真空泵:许多实验都需要抽真空。如:乙醇沉淀后核酸样品的干燥,电泳凝胶的干
主用于核酸样品琼脂糖凝胶和 PCR 电泳结果的紫外观察和照像。 8. PCR 仪:PTC-200 基因扩增仪
分子生物学实验仪器设备分析
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• 1. 空气垫移液器 • 该类移液器适用于固定或可调体积液体的加样。 空气垫的作用是将
吸于一次性吸头内的液体样本与加样器内的活塞分隔开来, 空气垫 通过加样器活塞的弹簧样运动而移动, 进而带动吸头中的液体, 死 体积和一次性吸头中高度的增加决定了加样中空气垫的膨胀程度。
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第一节 微量移液器
• 四、 微量移液器的使用方法
• 1. 容量设定 • 容量设定可通过容量调节轮的旋转来完成。 正确的容量设定有两个
步骤: 一是粗调, 即通过排放按钮将容量值迅速调整至接近需要的 预想值; 二是细调, 当容量值接近需要的预想值以后, 应将移液器 横置, 水平放至在观察者的眼前, 通过调节轮慢慢地将容量值调至 预想值, 从而避免视觉误差所造成的影响。 • 在容量设定时, 还有一个需要特别注意之处, 即从大值调整到小值 时, 调整到预想值即可; 但从小值调整到大值时, 需要超 1 / 3 圈后再返回。 这是因为计数器里面有一定的空隙, 需要弥补。
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第七章 房地产权属登记法律制度
• 第一节 房地产权属登记概述 • 第二节 土地登记 • 第三节 房屋登记 • 第四节 房屋权属登记信息查询与档案管理
返回
第一节 房地产权属登记概述
• 一、房地产权属登记的含义
• 房地产权属登记又称为房地产登记,是指经申请人申请,由房地产登 记机构将申请人的房地产权利和其他应当记载的事项在房地产登记簿 上予以记载的行为,是将房地产权利现状、权利变动情况以及其他相 关事项记载在房地产登记簿上予以公示的行为,是一种不动产物权的 公示方式。其主要分为土地登记和房屋登记两种。
分子生物学实验常用仪器
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编号
1
分子生物学实验常用仪器
品牌
名称
超低温冰箱 普通低温冰箱
液氮罐 制冰机 微量天平 分析天平 纯水器 超纯水器 高压灭菌器 灭菌箱 超声波清洗器 pH测定计 移液器 移液器 瓶口分配器 电动移液器 多道电动移液器 冷冻离心机 高速离心机 超速离心机 全自动密度梯度 分离系统 普通水浴 低温循环水浴 组织、植物研磨
机 超声波破碎仪
涡旋振荡 匀浆机
凝胶成像系统 恒床 冻干机
离心浓缩 超净台
分光光度计 常温水浴 电转化仪 电泳仪 电泳仪 干浴 培养箱
普通PCR/梯度 荧光定量PCR 半干转膜仪/半
干转印槽 原位杂交仪
型号
用途
样品储存
分子杂交箱 多色荧光系统
酶标仪 显微镜 体式显微镜 激光共聚焦显微
实验常用仪器的主要用途和使用方法
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实验常用仪器的主要用途和使用方法实验室是科学研究和教学的重要场所,各种仪器设备在实验中扮演着关键角色。
在这篇文章中,我们将介绍一些实验常用仪器的主要用途和使用方法。
一、显微镜显微镜是实验室中最常见的仪器之一、显微镜主要用于观察微小物体的结构和特性。
它可以放大细胞、细菌、植物和动物组织等微观物质。
使用显微镜时,首先需要将待观察的样本放置在载玻片上,然后用调焦旋钮将样本调焦到清晰图像,在低倍镜下初步观察,再切换到高倍镜进行详细观察。
二、色谱仪色谱仪广泛用于分析和检测混合物中的化学成分。
色谱仪可以通过将混合物分离成各个成分,从而确定各个组分的含量。
常见的色谱仪包括气相色谱仪和液相色谱仪。
使用色谱仪时,首先将混合物通过气流或溶剂将其分离出来,然后在探测器中测定各个组分的浓度。
三、分光光度计分光光度计是用于测量物质吸光度的仪器。
它可以分析和测定溶液中物质的浓度,并通过与标准曲线进行比较来确定样品中成分的含量。
使用分光光度计时,首先需要设置合适的波长和吸光度值范围,然后将待测溶液放入光束中测量吸收的光线强度。
四、天平天平是测量物质质量的仪器。
它通过测量两个物体之间的力的差异来确定物体的质量。
天平广泛用于化学实验和药学制剂的制备中。
使用天平时,首先需要将待测物体放在天平盘上,然后调整天平的精确度,读取其质量。
五、离心机离心机用于分离液体中的固体颗粒或悬浮液中的液体。
离心机基于离心力的作用原理,通过迅速旋转样品来分离样品中的组分。
使用离心机时,首先将样品加入离心管中,然后将离心管放入离心机的转子中,再选择适当的转速和离心时间进行离心操作。
六、pH计pH计用于测量溶液酸碱度的仪器。
它通过测量水中氢离子的浓度来确定溶液的酸碱性。
使用pH计时,首先将pH电极插入待测溶液中,等待一段时间以达到稳定状,然后读取pH计上的数值。
七、实时聚合酶链反应仪(PCR仪)PCR仪主要用于分子生物学中的DNA扩增实验。
它能够在很短时间内制备大量的特定DNA片段或基因。
分子生物学科耗材及仪器
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分子生物学科耗材及仪器
以下是一些常见的分子生物学科耗材及仪器:
1. 实验耗材:
- 移液器和吸头:用于准确量取液体。
- 离心管和离心机:用于分离和沉淀细胞、核酸和蛋白质等。
- 培养皿和培养箱:用于细胞培养和微生物培养。
- PCR 管和 PCR 仪:用于聚合酶链式反应(PCR)实验。
- 电泳槽和电泳仪:用于核酸和蛋白质的电泳分离。
- 试剂瓶和移液器:用于储存和分配试剂。
- 一次性手套和实验服:用于保护实验人员的安全。
2. 实验仪器:
- 紫外可见分光光度计:用于测定核酸和蛋白质的浓度。
- 凝胶成像系统:用于观察电泳结果。
- 实时荧光定量 PCR 仪:用于定量检测基因表达。
- 离心机:用于分离和沉淀细胞、核酸和蛋白质等。
- 移液器:用于准确量取液体。
- 生物安全柜:用于处理危险的生物样本,提供安全的实验环境。
这些耗材和仪器是分子生物学实验中常用的工具,它们的选择和使用将取决于具体的实验需求和研究目的。
在进行分子生物学实验时,正确选择和使用合适的耗材及仪器是确保实验成功和结果准确性的重要因素。
分子生物学实验常用仪器设备
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磁力搅拌器
超净工作台
直流式 细菌增殖 质粒纯化
凝胶成像仪
印 及 分 析 结 果 的 保 存 、 打 泳 电 胶 凝
恒温循环仪
酶切 动物DNA 动物DNA 制备
微波炉
溶化琼脂和 琼脂糖
PCR 仪
凝胶电泳装置 --水平电泳仪ຫໍສະໝຸດ 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳
凝胶电泳装置 --垂直电泳仪
微量可调移液枪及枪头
微量离心管
又作:指管、 eppendorf管 eppendorf管 常用0.5ml 常用0.5ml 1.5ml 微量物质离心沉淀 PCR 标记探针 样品保存 菌种保存
电子分析天平
0.01mg0.01mg100g(左 100g(左 德国 美特勒) 美特勒) 0.1mg0.1mg-200g (右 上海奥 豪斯) 试剂配制 样品定量称量
紫外分光光度计
测定核酸含量 蛋白质含量 细菌生长密度
紫外透射仪
观测琼脂糖 凝胶电泳的 结果
台式高速冷冻离心机
德国effendorf 德国effendorf 最高转速 25000rpm 感受态细胞的制 备
台式高速离心机
德国 eppendorf 最高转速 12500rpm DNA样品制备 DNA样品制备
全温摇床(振荡器) 全温摇床(振荡器)
DNA 制备 细菌繁殖
恒温培养箱
菌 株 培 养
自动高压蒸汽灭菌器
器具灭菌 培养基灭菌
制冰机和纯水仪
冰箱和超低温冰柜
pH计和pH试纸 pH计和 试纸 计和pH
分子生物学仪器设备安全操作规定
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分子生物学仪器设备安全操作规定分子生物学是研究分子结构、复杂的细胞和生物体的分子机制的学科。
随着现代科技的不断发展,分子生物学仪器设备得到广泛的应用。
为保障工作人员安全,本规定旨在规范分子生物学仪器设备的安全操作。
1. 培养箱安全操作1.1 保持清洁卫生培养箱作为实验室常用设备之一,在使用时应保持清洁卫生。
使用前应检查箱内是否有废弃物、杂物或污垢。
使用后应定期清洁箱体、观察口和照明系统,并保持培养箱内部干燥。
1.2 正确设置温度与湿度在使用培养箱时,应按照实验的需要正确设置温度和湿度。
使用前,应确认培养箱的温控及湿控系统均能正常工作。
设置温度和湿度时,应按照实验的需要,并确保设置正确。
1.3 避免过度装填在使用培养箱时,应避免过度装填,以免影响温控及湿控系统的正常工作,导致培养箱内部温度过高或过低,影响实验结果。
1.4 定期检查及维护为确保培养箱的正常工作,应定期检查温控及湿控系统的工作状态,并进行必要的维护。
若发现系统出现故障,应及时联系维修人员进行维护。
2. 离心机安全操作2.1 正确安装试管在使用离心机时,应确保试管正确安装在离心盘中,并确保离心盘平衡。
使用时避免过度转速和离心时间。
2.2 控制离心速度在使用离心机时,应按照实验需求控制离心速度,不宜过高或过低。
离心前应检查离心机转速表是否正常并调整速度。
在离心时,应关注离心机的运转情况,随时注意是否有异常情况。
2.3 预防样本泄漏在离心机转动时,试管内样本之间的力可能会相互作用,导致样本泄漏。
为了避免样本泄漏,应选择合适的离心管和离心机,同时注意安装离心管以及离心盘的角度和长度,使之尽可能的固定。
2.4 定期维护为确保离心机的正常工作,应定期检查机器运转情况,及时清洗离心盘、离心机转轴等易受污染的部分,确保离心机延长使用寿命并不影响实验结果。
3. PCR仪安全操作3.1 正确设置温度及时间在使用PCR仪时,应按照实验设计的参数设置温度和时间,确保PCR反应的可靠性。
分子生物学常用仪器介绍
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核酸电泳的染色剂
• 最常用的染色剂
– 溴化乙锭 – 银染色
蛋白电泳的染色剂
• 最常用的染色剂
– 考马斯亮蓝G – 考马斯亮蓝 R
• 溴化乙锭(ethidium bromide,EB) – 是一种荧光染料,EB分子可嵌入核酸双 链的碱基对之间,在紫外线激发下,发出 红色荧光
– 可在凝胶电泳液中加入终浓度为0.5ug/ml 的EB,有时亦可在电泳后,将凝胶浸入 该浓度的溶液中染色10~15min
• 镜头: 电动/自动镜头。
主要用途(1)
• 图像获取
• 图像获取容易 • 可以以多种格式存储 • 获取粘贴板上的图像、与其它软
件交换图像资源 • 图像复制功能,对所获取的原始
图像进行剪切、复制
主要用途(2)
• 图像处理
• 彩色图像转换为黑白灰度图像 • 图像的镜像和旋转 • 图像反色、即负片效果 • 图像的对比度/亮度调整 • 图像的均匀化、平整区域、背景校正 • 图像的锐化、柔化、羽化、强化物体
安普利等)
PCR仪的种类
• 总体来说可以分为两大类: PCR扩增仪和实时荧光定量PCR仪 普通的PCR扩增仪又衍生出带梯度PCR功 能的梯度PCR仪、和带原位扩增功能的原 位PCR仪等。 1996年由ABI公司首先推出将扩增和检测 融为一体的实时荧光定量PCR仪,此后很 多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、 MJ等等都先后推出不同款式的定量PCR 仪,
核酸电泳的指示剂
• 指示剂:
– 溴酚兰 – 二甲苯青
• 溴酚兰:在碱性液体中呈紫兰色 • 二甲苯青:水溶液呈兰色
• 电泳时,其迁移速率与双链线性 DNA大致相当
载样缓冲液
• 指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成 载样缓冲液
pcr仪的使用方法和注意事项
![pcr仪的使用方法和注意事项](https://img.taocdn.com/s3/m/df25302b640e52ea551810a6f524ccbff121caca.png)
pcr仪的使用方法和注意事项
技术服务说明书
一、概述
PCR仪是一种高效灵敏的DNA扩增技术,是现代分子生物学的重要组成部分。
其特点是快,灵敏,可靠,并且能够在微量样本中获得大量DNA。
PCR仪是一种可以进行非编码RNA表达水平定量实验的常用仪器,可提供温度控制、计时和编程,以确保每次反应的准确性和精确性。
二、使用方法
1、首先,用户在PCR仪上安装一个放大振荡器,并将PCR反应液和反应封袋放在其上。
2、然后,启动PCR仪,并输入仪器中的相应参数,如温度、时间、复制次数等。
参数各种参数要参照试剂盒中的说明,并以实验需要为准。
3、接着,根据实验要求,将反应液添加到反应封袋中,完成PCR 试剂添加。
4、最后,控制PCR仪的反应参数,稳定的温度、时间、复制量,以及控制PCR仪的加热、稳定时间,以完成PCR实验。
三、注意事项
1、使用PCR仪之前,用户要搞清楚所使用试剂的厂家,以确保试剂的质量。
2、使用PCR仪进行实验时,用户要确保设置的参数符合实验要
求,以 make sure 反应结果精准可靠。
3、当使用PCR仪时,要特别注意清洁,避免污染样本,以保证实验数据的可靠性。
4、使用PCR仪时,要定期检查PCR仪内的元件,如放大板,电位器等,使仪器保持良好的工作状态,可以有效的保证实验的效果。
5、当使用PCR仪时,用户要注意安全,应避免曝晒、触碰内部的高温以及电源线,以免造成损伤。
分子生物学实验常用仪器设备ppt课件
![分子生物学实验常用仪器设备ppt课件](https://img.taocdn.com/s3/m/065070f21b37f111f18583d049649b6648d709d6.png)
测定核酸含量 蛋白质含量 细菌生长密度
紫外透射仪
观测琼脂糖 凝胶电泳的 结果
台式高速冷冻离心机
德国effendorf 最高转速
25000rpm 感受态细胞的制
备
台式高速离心机
德国 eppendorf
最高转速 12500rpm
DNA样品制备
全温摇床(振荡器)
DNA 制备 细菌繁殖
PCR 仪
凝胶电泳装置 --水平电泳仪
琼 脂 糖 凝 胶 电 泳
凝胶电泳装微量离心管
又作:指管、 eppendorf管
常用0.5ml 1.5ml 微量物质离心沉淀 PCR 标记探针 样品保存 菌种保存
恒温培养箱
菌 株 培 养
自动高压蒸汽灭菌器
器具灭菌 培养基灭菌
制冰机和纯水仪
冰箱和超低温冰柜
pH计和pH试纸
磁力搅拌器
超净工作台
直流式 细菌增殖 质粒纯化
凝胶成像仪
凝 印胶 及电 分泳 析结
果 的 保 存 、 打
恒温循环仪
酶切
动物DNA 制备
微波炉
溶化琼脂和 琼脂糖
分子生物学实验室需要的仪器配置
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1培养箱在分子生物学试验中,有很多反应都是在特定温度下进行的,这时就需要一个控温的装置.例如:用于细菌的平板培养,我们通常设定为37℃于培养箱倒置培养;其他分子生物学实验如酶切等需要25℃,30℃,37℃等条件.2冰箱冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器.分子生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存,有些要求是负20度保存,实验人员一定要看清试剂的保存条件,放置在恰当的温度下保存.具体来说,不同温度下保存的物品如下:a.4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等.b.-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等.c.-80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特殊的低温处理消化液,感受态等的保存.d.0-10℃的层析冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验.3摇床摇床是实验室常用仪器,一般有常温型和低温型两种.对于分子生物学实验室,如果能配置低温型摇床,就可以适应不同的实验需求.例如:用于大肠杆菌,酵母菌等生物工程菌种的振荡培养及蛋白的诱导表达,培养通常为28度和37度,诱导表达需要20-37度;在感受态的制备过程中,需要有18度的温度控制;用于蛋白凝胶的染色脱色时振荡,常温使用;用于大肠杆菌常规转化时振荡复苏,常为37度.对于控制温度低于室温时,我们需要低温型摇床来控温.4水浴锅水浴锅也是一种控温装置,水浴控温对于样品来说比较快速且接触充分.例如,用于42度的大肠杆菌转化时的热激反应;用于DNA杂交过程中水浴控温.5烘箱烘箱是用于灭菌和洗涤后的物品烘干.烘箱有不同的控温范围,用户可以根据实验需求进行选择.例如,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干;用于RNA方面的实验用具,需要在250℃烤箱中烘干.6纯水装置纯水装置包括蒸馏水器和纯水机.蒸馏水器的价格便宜,但在造水过程中需要有人值守;纯水机价格高些,但是使用方便,可以储存一定量的纯水.纯水使用也有不同的级别,一般实验用水需要纯水,用于PCR、DNA测序、酶反应均需要超纯水.7灭菌锅分子生物学所用到的大部分实验用具都应严格消毒灭菌.包括实验物品、试剂、培养基等.灭菌锅也有不同大小型号,有些是手动的,有些是全自动的.用户需要根据自己的需要选购.8天平天平用于精确称量各类试剂.实验室常用的是电子天平,电子天平按照精度不同有不同的级别.9液体量器液体量器用于精密量取各类液体.常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯.10pH计用于配置试剂时精确测量PH值,从而保证配置的溶液的精确性.有时也需要利用pH 计测定样品溶液的酸碱度.11分光光度计分光光度计通过测定吸光值,从而用于分析样品核酸和蛋白的含量及纯度;同时也可以测定培养菌液的浓度.12离心机离心机有冷冻和常温之分.主要用于收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物.有些样品由于在常温下不太稳定,需要低温环境.例如在感受态制备过程中必须保证低温环境,所以需要冷冻离心机.13超净工作台分子生物学中凡是涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成,还有感受态制备,转化反应等,都需要无菌的环境.14电泳系统实验室常用的电泳主要是三种:水平电泳用于核酸DNA/RNA的琼脂糖电泳检测;垂直电泳用于蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测;转印电泳用于将蛋白转印到膜上做western 检测.15PCR仪PCR仪有不同的类型,分别用于不同的实验.普通和梯度PCR仪用于基因克隆和基因检测过程中DNA/RNA的扩增.荧光定量PCR仪用于核酸定量分析、基因表达差异分析、单核苷酸多态性检测、甲基化检测.原位PCR仪用于鉴定和定位带有靶序列的细胞在组织中的位置.16凝胶成像分析系统/紫外检测仪凝胶成像系统用于对染色后的核酸琼脂糖电泳胶和蛋白聚丙烯酰胺凝胶的观察和拍照,有些可以进行切胶操作.紫外检测仪可以用于对染色后的核酸琼脂糖电泳胶的观察,胶回收时切胶操作,但是不能连接电脑拍照.17制冰机实验室常用的是雪花制冰机,制冰机一般是按每日制冰量分成不同型号.分子实验室中制造大多数核酸、蛋白质的实验操作所需的低温环境,以减少核酸酶或蛋白质酶的水解.感受态制备也需要长时间冰浴.18磁力搅拌器在配置试剂过程中,有些试剂较难溶解,这时需要借助磁力搅拌器.磁力搅拌器可以加速溶解固体内容物.磁力搅拌器一般带加热功能.19生物安全柜分子实验中涉及的试剂和样品很多是有毒的,对于操作人员来说伤害较大.为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散,可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全保护.20微波炉和电炉用于溶液的快速加热,电泳琼脂糖凝胶的加热溶化配制,固体培养基的加热溶化.21液氮罐分子生物学实验中感受态细胞的制备需要液氮处理.感受态的保存也可以存于液氮中.22微管移液器微管移液器也有不同型号,是用于准确量取特定体积的溶液.。
生物实验常用仪器和实验室技能
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生物实验常用仪器和实验室技能生物实验常用仪器和实验室技能随着时间的推移,生物学研究技术的不断进步,新的仪器和技术不断涌现。
在生物学研究过程中,仪器和技能的使用是不可或缺的。
本文将着重探讨2023年生物学实验室中常用的仪器以及相应的实验技能。
一、PCR扩增仪PCR扩增仪是生物学实验室中的一个核心设备,它是进行多种分子生物学和遗传学实验的关键工具。
PCR扩增仪是通过PCR技术不断复制DNA片段,从而产生大量可用于研究的DNA样品。
随着技术的发展,PCR扩增仪不断升级,不断推陈出新,具有更高的准确性和更高的扩增速度。
要想在PCR实验中取得良好的结果,必须具备一些实验室技能。
首先,需要精确制备PCR反应体系,测量反应物的浓度,并控制反应过程中的时间和温度。
其次,灵敏的 PCR 扩增仪需要有良好的维护和管理,以确保每次实验都能够得到准确的结果。
二、电泳仪电泳仪是常用的生物学实验室仪器之一,用于分离和分析DNA、RNA和蛋白质。
电泳仪分为几种不同类型,包括聚丙烯酰胺凝胶电泳仪和琼脂糖凝胶电泳仪。
每种仪器都有各自的优势和劣势,可以根据需要进行选择。
在实验技能方面,电泳仪的操作相对简单,但仍需要注意实验条件。
例如,正确的样品制备和反应缓冲液的选择对分离结果的准确性和重现性至关重要,需要在实验过程中专注和准确。
三、细胞培养箱细胞培养箱是生物实验室中不可或缺的设备之一。
它提供了一种控制温度、湿度和CO2水平的环境,保护细胞不受外界环境的影响,帮助实验人员进行不同类型的细胞实验。
在2023年,细胞培养箱的性能和功能将更加智能化和高效。
正确维护细胞培养箱是至关重要的。
实验室技能包括维护箱子的清洁,替换污染过滤器和确保温度和湿度的准确性。
管理员需要了解温度和湿度传感器的性能和特性,以确保细胞培养过程的成功。
四、显微镜显微镜是生物学实验室中最基本的工具之一。
它被广泛用于观察和分析细胞、组织和器官的形态和结构。
随着时间的推移,显微镜的分辨率和分析能力有了极大的提高。
分子生物学领域常用的实验室仪器介绍
![分子生物学领域常用的实验室仪器介绍](https://img.taocdn.com/s3/m/08a533d9988fcc22bcd126fff705cc1755275feb.png)
分子生物学领域常用的实验室仪器介绍分子生物学领域是现代生命科学的重要分支之一,它研究的是生物分子层面的生命过程,旨在深入揭示生命的本质和机制。
而在分子生物学研究中,实验室仪器则是不可或缺的工具,它们不仅可以帮助研究者进行实验操作,还能够提高实验结果的可靠性和精度。
本文将为大家介绍分子生物学领域常用的实验室仪器。
一、PCR扩增仪PCR(聚合酶链式反应)扩增技术是分子生物学领域中最常用的实验技术之一,是通过对核酸单链进行不断反复的扩增,从而获得足够多的样品用于后续的实验研究。
PCR扩增仪是一种能够精确控制温度并产生稳定温度的设备,它可以通过快速升温和降温的方式对PCR反应的反应体系进行加热和冷却,以满足PCR反应各个步骤所需的不同温度条件。
根据不同的实验需求,PCR扩增仪通常有单块、双块和四块等不同规格型号。
二、电泳仪电泳是一个常见的探测和分离生物分子的方法,尤其在DNA和RNA分子的研究中应用广泛。
电泳仪则是进行电泳实验的设备。
电泳仪根据不同的实验需求、对样品大小和数量的要求,可以选择垂直电泳仪、平板电泳仪、毛细管电泳仪、聚丙烯酰胺凝胶等不同类型的电泳仪。
其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳仪是目前应用最广泛的电泳仪之一,它可以以高效、稳定和可重复的方式对生物分子进行分离、检测和纯化。
三、荧光定量PCR仪荧光定量PCR(实时PCR)技术是PCR技术的一种延伸,它通过检测PCR反应过程中荧光信号的变化动态监测扩增产物的累积情况,从而实时定量测定PCR反应产物的含量。
荧光定量PCR仪是荧光定量PCR技术实验的核心设备,它通过荧光信号的强度或增长速率来定量PCR反应物质的含量。
荧光定量PCR仪可根据实验数量和复杂程度的不同分为单通道和多通道两种类型。
四、显微镜生物显微镜是分子生物学领域中经常使用的设备,它主要用于观察、研究和记录细胞和组织样品的结构和形态特征,以及细胞间和分子间的相互作用和动态过程。
在生物领域中广泛应用多种类型的显微镜如荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、超高分辨率显微镜等。
分子生物学实验
![分子生物学实验](https://img.taocdn.com/s3/m/c629b40a68eae009581b6bd97f1922791688be22.png)
分子生物学实验引言分子生物学是研究生物分子结构与功能的一门学科,通过实验手段来研究分子水平上的生物现象。
分子生物学实验是该学科的基础,通过实验可以得到有关分子生物学的重要数据和结论。
本文将介绍分子生物学实验的基本原理、实验方法和常用技术。
实验目的分子生物学实验的目的是为了研究和探究生物分子结构、功能和相互作用,揭示生物体内基因表达和调控的机制。
具体实验目的可以根据研究方向和课题的需求来确定。
实验材料和仪器•DNA/RNA样品:可通过提取方法从细胞或组织中获得。
•酶:常见的酶有限制性核酸内切酶、DNA/RNA聚合酶等。
•缓冲液和试剂:用于调节反应条件和提供必要的物质。
•电泳仪:用于分离和检测DNA/RNA片段。
•PCR仪:用于DNA扩增反应。
•逆转录仪:用于合成cDNA。
•光镜和荧光显微镜:用于观察和记录实验结果。
基本原理DNA/RNA提取DNA/RNA提取是分子生物学实验的基础步骤,通过此步骤可以从细胞或组织中提取出DNA或RNA,并用于后续反应。
提取方法主要包括细胞破碎、蛋白酶处理、有机溶剂抽提和纯化等。
聚合酶链式反应(PCR)PCR是一种在体外合成DNA的方法,能快速扩增DNA序列。
PCR反应需要DNA模板、引物、聚合酶和核苷酸等组分,通过多个循环的温度变化,重复进行DNA的核酸链分离、引物结合和DNA合成等步骤,达到扩增目标序列的目的。
凝胶电泳凝胶电泳是一种常用的分离DNA/RNA片段的方法。
将DNA/RNA样品加入琼脂糖凝胶孔隙中,加电使其迁移,根据片段大小不同,进行分离和检测。
凝胶电泳主要分为琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)PCR-RFLP是一种通过PCR扩增后的DNA样品再经由限制性核酸内切酶的切割,根据不同的酶切位点产生不同的DNA片段组合,从而区分不同基因型的方法。
PCR-RFLP常用于基因型鉴定和基因突变检测等。
基因克隆基因克隆是研究分子生物学的重要方法之一,通过将DNA片段插入到载体DNA中,形成重组DNA,再将其转化到宿主细胞中,实现大量复制和表达目的基因。
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实验指导目录实验一分子生物学实验室常用仪器及使用方法实验二质粒DNA的提取-碱裂解法实验三琼脂糖凝胶电泳实验四限制性内切核酸酶的酶切与鉴定实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验六动物组织细胞基因组 DNA提取实验七 DNA的定量实验八 PCR基因扩增实验九琼脂糖凝胶电泳分离与纯化目的DNA 实验十 DNA重组实验十一动物组织细胞总RNA的提取实验一分子生物学实验室常用仪器及使用事实证明,在科学飞速发展的今天,无论从事哪个领域的研究,要想突破,除了有良好的理论基础外,更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。
一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外,还具有一些特殊用途的仪器,这些仪器一般较精密,价格昂贵。
下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。
一、冷冻离心机低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。
基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术,因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。
在国内,有多个厂家生产冷冻离心机,本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型(上海安亭),落地式。
配有角式转头:6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。
极限转速20000rpm。
1. 安装与调试离心机应放置在水平坚固的地面上,应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中,周围空气应呈中性,且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体,环境温度应在0~30℃之间,相对湿度小于80%。
试转前应先打开盖门,用手盘动转轴,轻巧灵活,无异常现象方可上所用的转头。
转子准确到位后打开电源开关,然后用手按住门开关,再按运转键,转动后立即停止,并观察转轴的转向,若逆时针旋转即为正确,机器可投入使用。
2. 操作程序(1)插上电源,待机指示灯亮;打开电源开关,调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定,温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。
(2)设定机器的工作参数,如工作温度,运转时间,工作转速等。
(3)将预先平衡好的样品放置于转头样品架上,关闭机盖。
(4)按控制面板的运转键,离心机开始运转。
在预先设定的加速时间内,其运速升至预先设定的值。
(5)在预先设定的运转时间内(不包括减速时间),离心机开始减速,其转速在预先设定的减速时间内降至零。
(6)按控制面板上的停止键,数码管显示dedT,数秒钟后即显示闪烁的转速值,这时机器已准备好下一次工作。
3. 注意事项(1)离心机应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配,并要求有良好的接地线,机器不使用,要拔掉电源插头。
(2)开机前应检查转头安装是否牢固,机腔中有无异物掉入。
(3)样品应预先平衡,使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。
(4)挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,并确保液体不外漏以免腐蚀机腔或造成事故。
(5)除工作温度、运转速度和运转时间外,不要随意更改机器的工作参数,以免影响机器性能。
转速设定不得超过最高转速,以确保机器安全运转。
(6)使用中如出现0.00或其它数字,机器不运转,应关机断电,10秒钟后重新开机,待所设转速显示后,再按运转键,机器将照常运转。
(7)不得在机器运转过程中或转子未停稳的情况下打开盖门,以免发生事故。
(8)每次操作完毕应做好使用情况记录,并定期对机器各项性能进行检修。
二、电泳仪电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要手段。
电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳大类,自由界面电泳不需支持物,如等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。
区带电泳需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶―G薄层等,分子生物学实验中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。
应用电泳法可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备。
下面以DYY-12型电脑三恒多用电泳仪(北京六一仪器厂)为例介绍其使用方法。
1.使用方法(1)按电源开关,显示屏出现“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪…”等字样后,同时系统初始化,蜂鸣4声,设置常设置。
屏幕转成参数设置状态,见图一:U: 0V U= 100V | Mode: STDI: 0mA I = 50mA |P: 0W P= 50W |T: 00:00 T= 01:00 |其中:左侧大写U: I: P: T: 为电泳时实际值;中间部分显示程序的常设值(预置值)。
Mode(模式):STD(标准);TIME(定时);VH(伏时);STEP(分步)(2)设置工作程序。
用键盘输入新的工作程序。
例如,要求工作电压U=1000V,电流I 限制在200mA以内,功率W限制在100W以内,时间T为3小时20分,并且到时间自动关掉输出。
则操作步骤如下:①按“模式”键,将工作模式由标准(STD)转为定时(TIME)模式。
每按一下模式键,其工作方式按下列顺序改变:STD®TIME®VH®STEP®STD。
②先设置电压U,按“选择”键,先将其反显,然后输入数字键即可设置该参数的数值。
按数字1000,则电压即设置完成。
③设置电流I,按“选择”键,先使I反显,然后输入数字200。
④设置功率P,按“选择”键,先使P反显,然后输入数字100。
⑤设置时间T,按“选择”键,先使T反显,然后输入数字320。
如果输入错误,可以按“清除”键,再重新输入。
⑥确认各参数无误后,按“启动”键,启动电泳仪输出程序。
在显示屏状态栏中显示Start! 并蜂鸣4声,提醒操作者电泳仪将输出高电压,注意安全。
之后逐渐将输出电压加至设置值。
同时在状态栏中显示“Run”,并有两个不断闪烁的高压符号,表示端口已有电压输出。
在状态栏最下方,显示实际的工作时间(精确到秒)。
⑦每次启动输出时,仪器自动将此时的设置数值存入“MO”号存储单元。
以后需要调用时可以按“读取”键,再按“0”键,按“确定”键,即可将上次设置的工作程序取出执行。
⑧电泳结束,仪器显示:“END”,并连续蜂鸣提醒。
此时按任一键可止鸣。
2.注意事项(1)U、I、P三个参数的有效输入范围是:U:5~3000V;I: 4~400mA;P:4~400W.(2)一般情况下,当No Load!时,首先应关机检查电极导线与电泳槽之间是否有接触不良的地方,可以用万用表的欧姆档逐段测量。
(3)如果输出端接多个电泳槽,则仪器显示的电流数值为各槽电流之和,此时应选择稳压输出,以减小各槽的相互影响。
(4)注意保持仪器的清洁,不要遮挡仪器后方进风通道。
严禁将电泳槽放在仪器顶部,避免缓冲液洒进仪器内部。
(5)本仪器输出电压较高,使用中应不避免接触输出回路及电泳槽内部,以免发生危险。
(6)长期不用仪器,应放置在干燥通风的清洁环境中保存。
三、分析天平分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器,充分了解仪器性能及熟练掌握其使用方法,是获得可靠分析结果的保证。
分析天平的种类很多,有普通分析天平、半自动/全自动电光分析天平及电子分析天平等。
目前实验室常规备用的是自动化程度较高的电子分析天平。
下面介绍电子分析天平 PL203/01型和AL104/01型 (METTLER-TOLEDO)的性能及使用方法。
PL203/01型精密电子天平:最大称量210g;实际分度值0.001g;AL104/01型高分辨率电子分析天平:最大称量110g;实际分度值0.0001g1. 使用方法(1)检查并调整天平至水平位置。
检查电源电压是否匹配(使用配置的稳压器),按天平仪器要求通电预热至所需时间30min 。
(2)打开天平开关“on”,天平则自动进行灵敏度及零点调节。
待显示屏上所有字段短时点亮,天平回零时,可进行正式称量。
(3)称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上,关上侧门,天平将显示该重量,点击“®O/T¬”键自动校对零,然后逐渐加入待称物质,直至所需重量为止。
(4)称量结束应及时除去称量瓶(纸),关上侧门,切断电源,并做好使用情况登记。
2. 注意事项(1)天平应放置在牢固平稳水泥台或木台上,室内要求清洁、干燥,同时应避免光线直接照射到天平上。
(2)称量时应从侧门取放物质,读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。
(3)挥发性、腐蚀性、强酸强碱类物质应盛于带盖称量瓶内称量,防止腐蚀天平。
(4)电子分析天平若长时间不使用,则应定时通电预热,每周一次,每次预热2h,以确保仪器始终处于良好使用状态。
四、分光光度计不同物质对不同波长入射的吸收程度各不相同,从而形成各具特征的吸收光谱。
根据这一原理,应用比色法可以对某些有色物质进行定性或定量分析。
但由于比色法仅限于可见光区,而且精度低,已远远不能满足高精度微量分析的要求。
随着科学技术不断发展,分析仪器也不断地更新换代,人们引进了分光光度法的概念,分光光度计随之应用。
分光光度计由光源、单色器、吸收池、接受器、显示屏幕所组成,它不仅适应于可见光区,同时还扩展至紫外光区及红外光区。
光密度(OD)是许多溶液中的溶质定量的指标之一,通过所产生的单色光而测定某一溶液对该单色光的吸收值。
分子生物学实验中常使用紫外分光光度计进行核酸溶液定量和纯度的初步判断。
下面介绍紫外可见光分光光度计GeneQantTM Pro(Amersham)的使用方法。
该仪器除了能检测核酸样品浓度外,还可进行蛋白质浓度以及细胞培养液浓度的测定,能检测低至几微升样品(70µl和5~7µl),样品无需稀释,测量后还可全部回收。
使用方法(1)打开电源开关(ON),等待数秒钟,显示屏上显示一系列数据,如本机型号、当前日期等,这些数据可以重新设置,当出现“instrument Ready”即可进入下一程序。
(2)在仪器面板上有许多功能键,其中包括检测base sep 、Tm、DNA、RNA、oligo、Protein595assay、Protein280 meas、cell culture等。
例如,欲检测DNA,按DNA键,即进入DNA检测程序。
在显示屏上:Pathlengh 10mmUnits µg/µlUse 320nm NODilution Faotor 1Insert reference,以上为仪器预设置的参考数据,若按“enter”键,和“select”键可以将以上的参数进行重新设定。
(3)取石英样品杯70µl或5~7µl,容量大小根据需要。
先用吸管吸高纯水入样品杯中,然后放入仪器上的样品槽中,放入时注意样品杯的光学面朝前方。
(4)按“set ref”键,进行空白测试。
显示屏上出现一系列数据均“0.000”并提示插入样品“Insert sample ”。