微生物的实验室培养(一轮)

无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能
是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了
污染。
.
两种纯化细菌的方法的比较
项目
优点
缺点
平板 划
线法
可以观察菌落特征， 对混合菌进行分离
不能计数
稀释 涂
布平 板法
可以计数，可以观 察菌落特征
吸收量较小，较麻 烦，平板不干燥效 果不好，容易蔓延
.
1、下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 实验步骤：
系列稀释操作
101 102
103
104
105
106
(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。 (2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中， 轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。
(3)从101倍稀释的试管中吸.取1mL稀释液，注入第三支 试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。
涂布平板操作（P19）
消毒 使用较为温和的方法来杀死部分对人体 有害的微生物。
灭菌 使用较为强烈的理化因素杀死物体内外 的所有微生物（包括芽孢和孢子）。
对实验操作的空间、操作者的衣着和手进 行 清洁消；毒
将培养皿、接种用具进行 灭；菌 接种的过程要在 酒精附灯近进行。
.
(1)消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min 或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁 尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……
专题二 微生物的培养与应用
课题一 微生物的实验室培养
.
一、细菌
1、形态：球形、杆形、螺旋形。
球菌
螺旋菌
.
杆菌
2、繁殖 —— 二分裂
20分钟——30分钟，分裂一次
.
二、菌 落
无鞭毛的球菌： 菌落较小较厚、边 缘整齐.
有鞭毛的细菌： 菌落大而扁平、边 缘波状或锯齿状.
菌落可以作为菌种 鉴定的重要依据。
(1)将涂布器浸在盛有70％的酒精的烧杯中。 (2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培养基表面。 (3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷 却8～10s。 (4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
涂布平板操作后，37度恒温培养，如果在培养基 上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是 从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少， 每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着 划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌 繁殖而来的菌落。
.
2.稀释涂布平板法
稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀 释操作和涂布平板操作。
问：菌落在生态学 上属于什么单位？
单个或者少数细菌在固体培 养基上大量繁殖时，会形成 一个肉眼可见的、具有一定 形态结构的子细胞群体。
.
几 种 菌 落
.
一、微生物的实验室培养
（一）培养基
人们按照微生物对营养物质的不同需 求，配制出供其生长繁殖的营养基质
1、培养基的基本成分
一般的培养基均需要碳源、氮源、生长因 子、无机盐和水等。
.
（二）纯化大肠杆菌 1.平板划线法
在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的 肉眼可见的子细胞群体称菌落。
1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼 烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？
杀灭残留在接种环的微. 生物。
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行 划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
＊不同培养基要满足不同微生物对pH、特殊营 养物质及氧气的需求。 .
2、培养基的种类
（1）按物理状态来分： 分为固体培养基和液体培养基(还有半
固体)。其中固体培养基用于菌种分离、 鉴定菌落等。 （2）按功能来分：
分为选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分来分：
分为天然培养基和合成培养基。
.
（二）无菌技术
(3)用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的 数量__多___，因为 _当_两__个__或__多__个_细__菌__连__在__一_起__时__，__平__板_上__观__察__到__的_只__是__一__个__菌_落__
.
二、实 验 操 作
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算 2.称量 3.溶化 4.灭菌
5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右（P17）
平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的 培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可 以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止 皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
.
（2）常用的灭菌方法
1.灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口 放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。
2.干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需 要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～ 170OC中加热1～2h即可。
3.高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压 灭菌锅内（见教材16页图2-4）煮沸，待冷空气排尽 后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到 121OC后，维持15～30mi.n即可。
(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 (2)为了得到更加准确的结果，你选用_稀__释__涂__布__平_板__法接种样品。 (3)适宜温度下培养。 结果分析：
(1)测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以 下几种统计结果，正确可信的是__D_，其理由是 在设计实验时，一 _定__要__涂_布__至__少__三__个_平__板__作__为__重_复__组__，__才__能_增__强__实__验__的_说__服__力__与__准__确 性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否合理 。
A．一个平板，统计的菌落数是230 B．两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240 C．三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260 D．四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平 均值250 (2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值 为234，那么每毫升样品中的菌落数. 是__2_.3_4_×__1_0_8_(涂布平板时所用 稀释液的体积为0.1 mL)。