CTAB法提取瓜叶菊不同组织基因组DNA的研究

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ctab法提取dna实验报告

ctab法提取dna实验报告CTAB 法提取 DNA 实验报告一、实验目的掌握 CTAB 法提取 DNA 的原理和操作方法，提取高质量的植物或微生物 DNA，为后续的分子生物学实验（如 PCR、基因测序等）提供纯净的 DNA 样本。

二、实验原理CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，在高离子强度的溶液中能与核酸形成复合物，并通过离心将其与蛋白质、多糖等杂质分离。

随后，用乙醇或异丙醇沉淀 DNA，使其从溶液中析出。

三、实验材料与试剂1、实验材料选取新鲜的植物叶片（或微生物培养物）。

2、实验试剂CTAB 提取缓冲液：2% CTAB，14 M NaCl，20 mM EDTA，100 mM TrisHCl（pH 80），02% β巯基乙醇（使用前加入）。

氯仿异戊醇（24 ： 1）异丙醇70% 乙醇TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）四、实验仪器与设备1、高速冷冻离心机2、恒温水浴锅3、移液器4、涡旋振荡器5、微量紫外分光光度计五、实验步骤1、材料处理植物材料：取新鲜植物叶片约 2 g，用液氮速冻后研磨成粉末。

微生物材料：收集一定量的微生物培养物，离心收集菌体，用无菌水洗涤后重悬。

2、加入提取缓冲液将研磨好的植物粉末（或重悬的微生物）迅速转移至离心管中，加入预热至 65℃的 CTAB 提取缓冲液，充分混匀，65℃水浴保温 30 60 分钟，期间不时轻轻颠倒混匀。

3、抽提加入等体积的氯仿异戊醇（24 ： 1），涡旋振荡 10 15 分钟，使其充分混匀，然后 12000 rpm 离心 10 15 分钟。

4、转移上清用移液器小心吸取上清液至新的离心管中，避免吸取中间的蛋白质层。

5、 DNA 沉淀向上清液中加入 06 07 倍体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温放置10 20 分钟，使 DNA 沉淀。

6、离心收集12000 rpm 离心 10 15 分钟，弃上清。

7、洗涤用 70% 乙醇洗涤沉淀 2 3 次，每次离心 5 10 分钟，弃上清。

CTAB法小量制备植物基因组DNA

CTAB法小量制备植物基因组DNA【原理】CTAB分离DNA的方法最初用于细菌，后来经修改用于从植物中获取DNA。

CTAB（即十六烷基三乙基溴化铵）是一种阳离子去污剂。

CTAB可与核酸形成复合物，该复合物仅溶于高盐溶液。

此外，CTAB可十分有效地促进DNA和RNA与多糖的分离并去除多糖。

可通过提高NaCl的浓度和沉淀核酸去除CTAB。

残留的CTAB可用76%~80%乙醇洗涤核酸沉淀去除；CTAB较易溶于乙醇因而可通过洗涤溶液去除。

某些植物组织包含高浓度的酚类物质。

除去这些化合物至关重要，因为酚类化合物可氧化形成醌，后者可与核酸交联。

聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和β-巯基乙醇（BME）——裂解混合液中的常见组分，是有效的还原剂，可将因酚类化合物氧化形成的醌降至最低。

PVP在某种程度上相当于一种巨大的多糖，本质上它可占据物理空间从而增加其它分子的有效浓度并使得这些分子的沉淀更为容易。

任何基因组DNA制备技术的目的是分离足够纯的、高分子量的DNA。

有两种因素会影响所分离DNA的尺寸：剪切力和核酸酶活性。

因此裂解应当温和处理从而将剪切力降至最小。

植物细胞富含核酸酶。

大多数核酸酶需要Mg2+作为辅因子。

为了降低核酸酶活性，组织应当快速冷冻并在包含有去污剂和高浓度EDTA的提取缓冲液中解冻。

【材料】植物组织，新鲜液氮2× CTAB提取缓冲液氯仿:异戊醇【24:1（v/v）】异丙醇洗涤缓冲液95%乙醇TE 缓冲液（pH 8.0）10 mg/mL 无DNase的RNase A 金属匙研钵和研杵37°C和65°C水浴微量离心机移液器涡旋仪微型真空泵记号笔灭菌的1.5 mL一次性微量离心管灭菌吸头手套【步骤】1. 称取100 mg叶片组织，并在液氮预冷的研钵中研磨为细粉末。

然后将粉末转移至1.5 mL微量离心管中。

2. 添加700 μL新鲜的2× CTAB提取缓冲液并用涡旋仪混匀。

实验一 CTAB法提取植物基因组DNA

实验一CTAB法提取植物基因组DNA实验目的:学习从植物组织中(幼叶)提取基因组DNA的基本原理与方法。

实验原理:采用机械研磨的方法破碎植物的组织与细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其就是氧化酶类),其对DNA的抽提产生不利的影响,所以在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。

在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),就是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。

该复合物在高盐的溶液中(>0、7mol/L NaCl)就是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀(CTAB能溶于乙醇)即可使核酸分离出来。

CTAB溶液在低于15度时会形成沉淀洗出,因此再将其加入冰冷的植物材料中之前必须预热(65度),且离心温度不要低于15度。

实验步骤:1、取幼嫩的植物叶片(3-5g)剪碎液氮研磨成粉,转入1、5ml离心管内。

加入等体积的65℃预热的DNA提取缓冲液置于65℃的恒温水浴摇床上1-2h(1、5h)。

2、加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻上下颠倒5分钟,静置5分钟,之后于12000rpm离心10分钟。

3、吸取上层水相,重复步骤2一次。

4、吸取上层水相,加入预冷2/3体积的异丙醇,轻缓颠倒2分钟并置-20℃冰箱内10min,待DNA沉淀后于12000rpm离心收集,收集的DNA于70%乙醇中洗2-3次。

将弃去乙醇风干后的DNA加适量水使其溶解。

5、待DNA完全溶解后加入1-2μl不含RNAaseA(10mg/ml),37℃保温1h以除去DNA中的RNA。

6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿:异戊醇(24:1)轻轻上下颠倒10分钟后10000rpm离心10分钟。

7、吸取上层水相并先后加入1/10体积的3M醋酸钠及2倍总体积的预冷的无水乙醇,接着置于-20℃冰箱,10分钟后10000rpm离心10分钟,弃去无水乙醇,加入70％乙醇洗涤2-3次,风干,最后将DNA溶于适量(200-500μl) TE中。

CTAB法提取瓜叶菊不同组织基因组DNA的研究

叶）的基因组ＤＮＡ，析不同组织Ｄ分ＮＡ的含量，旨
草本花卉。花色艳丽，泽丰富，中蓝色花已成色其
为目前国内进行蓝色基因克隆的主要植物材料【ｌ】。花期长，冬至翌年初夏，初是元旦、节、一等节春五
２１年００
辽宁林业科技
ＪｕａｏａｎｎＦｒｓｒＳｃｅｃｏｒｌｆＬｉｏｉｇｏｅｔｙｎｉｎｅ＆Ｔｃｎｏｙｅｈｏｌｇ
２００１Ｎｏ２
第２期
马月萍任生，
（．１东北大学理学院生物技术研究所，辽宁沈阳１００；．１０４２吉林省林业调查规划院，吉林长春１０１）３０３
ｎｍｉＮＡｗｉｅｅｑａｒｏｃＤｔｔｒｕｒｙｗａｘｒｃ￣ｆｍｌａ，ｔｍａｄｆｗｅｏＳｎｎ／ｒｅｕ．ｎｈｌｔｐｏｅｉｓｉｓｒｌｒｈｂｔｓｅｔｔｒａｏｅｆｓｅｎｌｏｒｆｅｅｃｏｃｕｒｓａｄｔｅｅｅｒｈｒｓｒｗｅｅｃｅ，ｇｃｏｓｔｐａ
摘
要：获得高质量ＤＮＡ是进行分子生物学研究的基础。通过ＣＡＢ法提取瓜叶菊叶、花的基Ｔ茎、
因组ＤＮＡ，取的ＤＡ质量良好，提Ｎ电泳条带清晰，取过程无明显的Ｄ提ＮＡ降解，子量接近分２Ｋｂ以提取的ＤＮＩ。Ａ为模板，用一对引物扩增瓜叶菊中与花色相关的特异基因，到条带单一、得大小与已知一致，明提取的Ｄ说ＮＡ可以满足相关的分子生物学研究。ＣＡＢ法提取瓜叶菊不同组Ｔ

CTAB法提取植物DNA

清洗
• 将上清液再次离心，去除其中的杂质和蛋白质。将得到的上清液转移到新的离心管中。
DNA的纯化与溶解
在上清液中加入等体积的异丙醇，混匀后放置一段时间，使DNA沉淀下来。
将清洗后的DNA晾干，然后加入适量的TE缓冲液溶解DNA。此时可以得到高质量的植物DNA样品，可用于后续的实验或保存备用。
利用ctab法提取的DNA进行遗传多样性分析，有助于了解植物种群的遗传结构和演化历程。
在植物育种中的应用
分子标记辅助育种
利用ctab法提取的DNA进行分子标记辅助育种，能够快速准确地鉴定优良基因型，提高育种效率。
转基因育种
通过ctab法提取的DNA可以用于构建基因，为转基因育种提供重要的基因资源。
DNA浓度测定
根据DNA溶液的吸光度值，计算DNA的浓度。
DNA完整性评估
通过电泳检测DNA片段的大小和完整性，评估DNA的质量。
04 ctab法提取植物DNA的应用与展望
在植物遗传研究中的应用
基因定位
通过ctab法提取的DNA可用于基因定位，确定基因在染色体上的位置和功能。
VS
遗传多样性分析
实验过程中的安全注意事项
实验操作安全
在实验过程中，应遵循实验室安全规定，避免交叉污染和意外事故的发生。
防护措施
佩戴实验服、手套、口罩等防护用品，确保实验操作人员的安全。
化学品使用
正确使用和处理实验过程中涉及的化学试剂，避免对实验操作人员造成伤害。
实验结果的判定与评估
DNA纯度检测
通过紫外分光光度计检测DNA溶液的A260/A280值，判断DNA 的纯度。
参考文献3
CTAB法提取植物DNA的步骤包括将植物组织研磨成粉末，加入预热的缓冲液和CTAB，混合均匀后进行离心，取上清液加入乙醇沉淀，离心后取出 DNA进行洗涤和干燥。在提取过程中需要注意避免交叉污染和样品间的混淆。

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。

植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。

本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续分子生物学实验提供基础支持。

在本次实验中，我们选择了小麦叶片作为实验材料，采用CTAB法提取植物基因组DNA，并对提取的DNA进行质量评估。

首先，我们收集了新鲜的小麦叶片样品，并将其置于液氮中迅速冷冻保存，以保持DNA的完整性。

接着，将叶片样品磨成细末状，并加入预冷的CTAB提取液中，进行细胞破裂和DNA的溶解。

随后，通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质，最终得到DNA的沉淀物。

在实验过程中，我们注意到了一些关键的操作细节。

首先，样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行，以防止DNA的降解。

其次，在加入CTAB提取液后，充分混合样品并保持恒温，有助于细胞破裂和DNA的溶解。

最后，在进行DNA的沉淀时，需要注意避免将上清液一同转移，以保证提取得到的DNA纯度。

提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测，结果显示其纯度较高，吸光比值（A260/A280）约为1.8，符合DNA的纯度要求。

随后，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，观察到明显的DNA条带，并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况，初步评估了提取得到的DNA片段大小。

通过本次实验，我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA，并对其质量进行了评估。

下一步，我们将利用提取得到的DNA样品，开展进一步的分子生物学实验，包括PCR扩增、基因克隆等，以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。

本次实验为我们提供了可靠的DNA样品，为后续实验奠定了坚实的基础。

总之，植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA，并对其进行了质量评估。

提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性，为后续实验提供了可靠的基础支持。

CTAB法提取植物基因组DNA

CTAB法抽提植物组织DNA
1、准备工作：
（1）将玻璃瓶，药匙，镊子，研钵，滤纸，枪头，水浴锅准备好；
（2）准备CTAB溶液：
2×CTAB buffer（50mL）
CTAB Powder（2%） 1.0g
1M Tris-HCl（pH8.0，100mM） 5.0mL
0.5M EDTA（20mM） 2.0mL
5M NaCl（1.4M）14.0mL
（3）将水浴锅调到65℃；
（4）事先准备好要用的氯仿，Tris饱和酚（1:1），异丙醇。

无水乙醇放在-20℃冰箱。

2、提取方法
（1）称取0.5 g 新鲜植物叶片，置于研钵中，加入液氮迅速研磨成粉末，用小药匙迅速转移至1.5 mL Eppendorf 管中；
（2）加入700 μL 2×CTAB/巯基乙醇缓冲液，颠倒混匀；
（3）将离心管置于65℃水浴中保温1h，中间不时颠倒混匀；
（4）加入700 μL氯仿：Tris饱和酚（1:1），温和颠倒5min；
（5）室温，12000×g，离心10min；
（6）取上清（约700μL）于一新的Eppendorf管中（切勿扰动界面），加入氯仿：异戊醇（24:1）700μL，轻轻颠倒混匀；
（7）室温，12000×g，离心10min；
（8）取上清500 μL，加入500 μL-20℃预冷的无水乙醇，混匀。

-20℃放置30min；
（9）室温，12000×g，离心10min；
（10）弃上清，用70%乙醇将沉淀小心清洗两遍；
（11）铺一块吸水纸于超净台中，将离心管开口向下置于滤纸上，室温下吹干10min左右；
（12）溶于适量水或TE溶液中（约50 μL）。

CTAB植物DNA的提取方法

CTAB法提植物DNA
2010-11-26 09:14:27| 分类：DNA提取
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CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法，
其原理是：采用机械破碎植物细胞，然后加入CTAB分离缓冲液将DNA溶解出来，再经氯仿－异戊醇抽提除去蛋白质，最后得到DNA。

CTAB法的版本有很多，不过大同小异。

以下是我使用的方法：
1.将植物组织洗净，用75％的酒精表面消毒4-5min，用去离子水冲洗3次；
2. 将样品放在灭过菌的研钵中，加入液氮捣碎，迅速转入1.5ml离心管中，加入600mlCTAB （或同时加入石英砂和CTAB研磨，然后转入1.5ml离心管中）；
3. 65℃水浴1h（每20min反转摇匀一次）；
4. 加等体积的氯仿－异戊醇（体积比24：1），或加入苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀；
5. 6500rpm离心30min，取上清于新管中；
6. 重复4，5步骤；
7. 向上清中加入2倍体积的无水乙醇（或2/3体积的异丙醇）沉淀DNA，-20℃放置20min 或更长时间，或过夜；
9. 加75％的乙醇清洗DNA，每次12000rpm 2min，去上清；
10. 风干后加入40ul的TE缓冲液溶解DNA；
11. 取2ul溶液电泳检测。

实验一--CTAB法提取植物基因组DNA.doc

实验一--CTAB法提取植物基因组DNA.doc
CTAB法是一种提取植物基因组DNA的标准技术，它是将植物组织或细胞固定剂与有机溶剂混合溶解后，利用高通量PCR技术显微镜适用的植物DNA提取方法，将病毒与细菌遗
传学上的DNA提取技术应用到植物DNA提取上来。

CTAB法的提取策略主要是先收缩细胞壁，然后分解细胞质，使DNA与蛋白质、核酸等其他物质分离。

有两种方法可以用于收缩细胞壁，一种是使用脱水剂，另一种是使用温和
的柱状体破碎物质，这两种方法可以使细胞壁被开裂。

随后，有机溶剂被用来分离DNA，
有机溶剂会与蛋白质和核酸结合，然后消除组织成份，使DNA易于收集。

在有机溶剂洗涤后，用CTAB溶液在冰上半小时沉淀DNA，紧接着用脱盐水冲洗，最后用70%的乙醇对DNA
进行沉淀。

最后，DNA可以被收集，净化，脱水或冻存，随时可用。

此外，为了获得精确的结果，在使用CTAB法提取植物基因组DNA时也有一些需要考
虑的因素，其中包括样本所处的第一步，样品消毒，采取合适的收缩细胞壁和有机溶剂剂量，CTAB溶液沉淀时间，脱盐水洗涤次数，乙醇沉淀次数，DNA注射缓冲液等，如果这些
步骤都能得到恰当的处理，则可以保证获得的 DNA 极为纯净。

为了提高植物DNA提取效率，CTAB法在提取植物基因组DNA时也可以使用DNA限制酶，例如酸性磷酸酶和热胡萝卜素变性酶之类的酶，这种方法可以使细胞壁更易被分解，从而
使DNA更容易被收集。

总而言之，CTAB法提取植物基因组DNA是一种比较有效的方法，能够获得更高质量的DNA，但是在使用这种技术提取植物DNA时，需要注意一些关键的步骤及酶的使用，以确
保获得的DNA有较高的纯度。

利用CTAB法提取植物基因组DNA

利用CTAB法提取植物基因组DNA植物基因组DNA提取是分子生物学领域中常用的技术之一。

目的是为了获取高质量的DNA样品，以便进行PCR、测序、基因克隆以及染色体制备等实验。

目前，CTAB法是植物基因组DNA提取中广泛采用的方法之一。

本文将介绍利用CTAB法提取植物基因组DNA的步骤及注意事项。

1. 准备植物组织样品首先需要准备好待提取的植物组织样品，这些样品可以是叶子、花、芽、根等。

样品应该分别收集、标记，冷藏保存并尽快进行提取。

2. 样品研磨取一小段样品，用液氮将其冷冻，然后用研钵和研杵将其研磨成细碎的粉末状。

如果样品过多，则可以用离心管研磨器等仪器进行批量高效研磨。

3. 细胞壁裂解将磨细的植物组织加入CTAB裂解缓冲液中，加热至65℃，开启混合器磁子，同时混合2-3分钟左右，以破坏细胞壁，释放出DNA。

4. 除去蛋白质加入一定量的氯仿，并短暂的混合均匀，待混合物静置后，可以观察到混合液结成两层。

上层为水相，在此基础上加入同体积的异丙醇，沉淀出DNA进行洗涤和离心。

离心后，上清液含有蛋白质，可以废弃，而下沉淀可以进行枸橼酸溶解。

5. 获取DNA加入枸橼酸缓冲液后，可以分别进行洗涤和沉淀。

最后，通过乙醇提取，可以得到纯度较高的基因组DNA样品。

注意事项：1. 必须严格控制植物组织样品的数量，避免混入过多的杂质干扰提取效果。

2. 在DNA分离过程中，所有试剂、试管和磨具等物品都必须干燥无水，以免水分对提取质量产生干扰。

3. CTAB裂解缓冲液中的NaCl浓度和pH值的调节必须准确，其浓度和pH值直接关系到DNA的结晶和浓度。

4. 在进行DNA纯化过程中，必须注意所有材料的稳定性和纯度，同时要充分保护目标DNA，避免DNA被降解。

总之，CTAB法提取植物基因组DNA是一种安全、高效、可靠的方法。

在实际操作中，应充分掌握其原理、步骤和注意事项，以获取高质量的DNA样品，为后续的实验打下良好的基础。

ctab法提取植物基因组dna资料

ctab法提取植物基因组dna资料一、实验原理CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在高离子强度（0.7mol/L）的溶液里是可溶的，通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。

在酚仿变性的条件下，去除残留的CTAB和蛋白质等杂质，然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分子从上清溶液中沉淀出来，最后用TE溶解DNA，并加入RNA酶以去除基因组中的RNA，置于-20℃备用。

因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体中提取核酸，例如：植物的叶片组织。

二、实验材料及试剂实验材料：新鲜植物叶片。

试剂与溶液：CTAB提取缓冲液，Tris-饱和酚，氯仿-异戊醇（24:1），异丙醇，70%乙醇，含RNase的TE溶液。

CTAB提取缓冲液：2%（M/V）CTAB，1.4MNaCl，100mMTris-Cl （pH8.0），20mMEDTA，pH8.0，2%（V/V）β-巯基乙醇（使用前加入）。

三、实验步骤取0.5g新鲜植物叶片置于研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成均匀粉末。

将粉末移入1.5mL离心管，加入800μLCTAB分离缓冲液，上下颠倒离心管，混合均匀。

将盛有样品的离心管置于65℃水浴中保温30min，其间每隔3-4min轻摇混匀。

低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。

加入等体积的Tris-酚和氯仿异戊醇，上下颠倒离心管，混合均匀；低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。

加入等体积的氯仿异戊醇上下颠倒离心管，混合均匀；低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。

加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混匀，置于-20℃沉淀30min。

低温12000rpm离心5min去上清，加入500μL70%乙醇洗涤沉淀，常温12000rpm2min，去上清，沉淀尽量干燥。

加入适量含有RNase的TE（20μL）溶解沉淀，37℃水浴30min，消化RNA。

CTAB法提取植物基因组DNA

CTAB法提取植物基因组DNACTAB法提取植物基因组DNACTAB法原理CTAB（Cetyl trimethyl ammonium bromide），⼗六烷基三甲基溴化铵，是⼀种阳离⼦去污剂，可溶解细胞膜，能与核酸形成复合物，具有从低离⼦强度溶液中沉淀核酸的特性。

当降低溶液盐浓度到⼀定程度（0.3 mol/L NaCl）时，CTAB-核酸的复合物从溶液中沉淀，通过离⼼就可将其与蛋⽩，多糖类物质分开，在经过有机溶剂抽提，去除蛋⽩，多糖，酚类等杂质。

最后通过⼄醇或异丙醇沉淀DNA，⽽CTAB溶于⼄醇或异丙醇⽽除去在⾼离⼦强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋⽩质和多聚糖形成复合物，不能沉淀核酸。

CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加⼊冰冷的植物材料之前必须预热，且离⼼时温度不要低于15℃。

另外，它还能保护DNA不受内源核酸酶的降解。

主要试剂与溶液的配制：PVP（聚⼄烯吡咯烷酮K30）巯基⼄醇氯仿︰异戊醇（24︰1）异丙醇70%⼄醇Tris-苯酚RNaseA⽆⽔⼄醇CTAB 溶液：CTAB——20g/LNaCl（58.44）——1.4 mol/L（81.816g）EDTA（292.25）——10 mmol/L（2.9225g）Tris（121.14）——100 mmol/L（12.114g）pH 8.01×TE 缓冲液：EDTA（292.25）——1 mmol/L（0.29225g）Tris（121.14）——10 mmol/L（1.2114g）pH 8.0NaAC溶液：NaAC（82.03）——3mol/L（246.09g）pH 4.0植物总DNA的提取1、取适量⽢薯新鲜叶⽚，⽤液氮迅速研磨，中间加PVP（聚⼄烯吡咯烷酮K30）少许，成粉末后转⼊10mL的离⼼管中，放⼊液氮或-80℃冰箱储存（在研磨样品时，研的细和研的粗，提出的DNA量可以相差⼏倍，所以，在液氮保护的很好的情况下尽量多研磨⼏次）。

ctab法提取dna原理

ctab法提取dna原理咱们要从细胞里把 DNA 给弄出来，CTAB 法可是个厉害的招儿！先来说说 CTAB 是啥。

CTAB 这家伙，学名叫做十六烷基三甲基溴化铵，听着挺复杂，其实你就把它当成一个神奇的小助手。

细胞就像一个小小的城堡，DNA 被藏在里面。

CTAB 能打破城堡的墙壁，让里面的东西都跑出来。

它怎么做到的呢？因为 CTAB 可以和细胞里的一些成分结合，让细胞膜呀、细胞壁呀变得不再那么坚固，就像是给城堡的城墙开了个大口子。

当城墙被攻破，细胞里的各种东西都一股脑儿地跑出来啦，这里面可不光有咱们想要的 DNA ，还有蛋白质、多糖等等。

这时候，CTAB 又发挥作用啦，它能让蛋白质和多糖这些家伙乖乖听话，不跟 DNA 捣乱。

你看啊，DNA 是带负电的，CTAB 能和带负电的 DNA 结合在一起，形成一种复合物。

这个复合物就像是给 DNA 穿上了一层保护衣，让它不容易受到其他杂质的干扰。

接下来，咱们得把 DNA 从这个复合物里给分离出来。

这就得靠一些小手段啦，比如说加点盐。

加盐之后，DNA 就会从复合物里跑出来。

然后呢，再用酒精或者异丙醇这些神奇的液体。

DNA 在酒精或者异丙醇里溶解度很低，所以它就会乖乖地沉淀出来，变成小小的白色絮状物。

你是不是觉得很神奇？就这么一步步地，咱们就把细胞里那小小的 DNA 给提取出来啦！提取出来的 DNA ，就像是找到了宝藏一样。

咱们可以用它来做各种各样的实验，去探索生命的奥秘。

想象一下，通过这个小小的提取过程，我们能了解到一个生物的遗传信息，这多酷啊！CTAB 法就像是一个魔法，能把隐藏在细胞深处的 DNA 给变出来。

每次用这个方法，都感觉自己像是个小小的魔法师，能解开生命的密码。

不管是小小的细菌，还是大大的植物，只要用对了这个方法，DNA 都能被咱们收入囊中。

怎么样，是不是觉得 CTAB 法提取 DNA 特别有趣？这就是科学的魅力呀，总是能带给我们惊喜和探索的乐趣！。

CTAB法提取植物DNA

实验三： CTAB法提取植物DNA 目的要求: 掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。实验内容: 采用CTAB法从植物叶片中提取基因组 DNA，并进行琼脂糖凝胶电泳。
CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
• 1、在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在；在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。 • 2、在浓氯化钠溶液(1～2mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀氯化钠溶液 (0.14mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将 DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。
2、氯仿的作用？氯仿：加速有机相与液相分层；去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中） 3、用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？
异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡 (异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定) 4、乙醇/异丙醇的作用能够消除核酸的水化层，使带负电荷的磷酸基团暴露出来。 5、用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少 DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

CTAB

CTAB法提取植物ＤＮＡ标签：离心植物乙醇提取液氮分类：专业2006-12-07 10:54CTAB法提取植物ＤＮＡ一、实验目的1.掌握CTAB法和快速法提取植物DNA。

2.了解0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量及DNA 浓度的原理，掌握测定方法。

3. 掌握DNA样品的保存。

二、实验材料水稻嫩叶三、实验原理CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖留在溶液中。

在高离子浓度下，CTAB与蛋白质和除大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，但不能沉淀核酸。

在一定的盐浓度下，DNA、蛋白质与多糖在CTAB溶液中溶解度不一样而达到去多糖的目的。

生物体内的DNA与蛋白质结合在一起，提取时需除去其结合的蛋白质，然后再将DNA与RNA分开，并进一步纯化。

此外需抑制 DNAase 的活性以防DNA被降解。

基本环节：1．破碎细胞壁以释放细胞内容物2．破坏细胞膜使DNA释放到提取缓冲液中3．DNA释放后，尽量确保DNA的完整性4．去除杂质（大量的RNA、蛋白质、多糖、单宁和色素等）四、实验仪器和药品试剂：1．实验仪器：高速冷冻离心机、荧光成像仪器、槽式电泳仪、研钵和研棒、水浴锅、移液器、离心机、灭菌锅、冰箱、电泳漕。

2．药品试剂：液氮、2×CTAB提取缓冲液、 1mol/L Tris-HCl PH8.0、 10mmol/L NaCl、0.5mol/L EDTA pH8.0、氯仿/异戊醇 24：1 、RNaseA ：10mg/mL 、异丙醇、75%乙醇，0.2mol/L乙酸钠、TE缓冲液、及各种药品试剂：使用前用100℃沸水浴处理15min，以除去残留的DNase活性。

1）1×TE bufferTris-HCl(pH8.0) 10mMEDTA(pH8.0) 10mM2）2×CTAB提取液的配制：2%（W/V） CTAB 4g100mM Tris 1.21g20mM EDTA 1.49g PH 8.0 定容200mL1% PVP-360 2.0g1.4M NaCL 16.38g3）0.5mol/L EDTA的配制(PH8)：EDTA 37.22gNaOH 4g调PH至8.0，加水定容至200mL4）1mol/L Tris-HCl （PH8.0）：Tris 24.22g浓盐酸 8.4mL调PH至8.0，加水定容至200mL五、实验方法和步骤1、水稻DNA微量提取（1）、取叶片100mg，液氮研磨成粉末，置1.5mlEP管中。

CTAB法提取瓜叶菊不同组织基因组DNA的研究

CTAB法提取瓜叶菊不同组织基因组DNA的研究马月萍;任生【摘要】获得高质量DNA是进行分子生物学研究的基础.通过CTAB法提取瓜叶菊叶、茎、花的基因组DNA,提取的DNA质量良好,电泳条带清晰,提取过程无明显的DNA降解,分子量接近21Kb.以提取的DNA为模板,用一对引物扩增瓜叶菊中与花色相关的特异基因,得到条带单一、大小与已知一致,说明提取的DNA可以满足相关的分子生物学研究.CTAB法提取瓜叶菊不同组织的DNA产率不同,其中叶的DNA产率最大,茎的产量居中,花的最低.【期刊名称】《辽宁林业科技》【年(卷),期】2010(000)002【总页数】3页(P15-17)【关键词】瓜叶菊;DNA;提取;CTAB法【作者】马月萍;任生【作者单位】东北大学理学院生物技术研究所,辽宁,沈阳,110004;吉林省林业调查规划院,吉林,长春,130013【正文语种】中文【中图分类】S682.39瓜叶菊（Senencio cruentus）菊科千里光属多年生草本花卉。

花色艳丽，色泽丰富，其中蓝色花已成为目前国内进行蓝色基因克隆的主要植物材料[1]。

花期长，初冬至翌年初夏，是元旦、春节、五一等节日的理想盆花，是冬春代表性花卉，具有较高的观赏价值。

瓜叶菊中蓝色基因资源的保护和开发，能为分子育种技术培育蓝色菊花的研究奠定基础。

因此，对瓜叶菊优良的基因资源进行分子生物学研究具有重要的意义。

由于材料来源、部位、形态等外在性质的不同，以及化学成分、组织结构等内在特点的差异，本试验采用CTAB法提取瓜叶菊不同器官（包括花、茎、叶）的基因组DNA，分析不同组织DNA的含量，旨在探索提取高质量瓜叶菊基因组DNA的方法，从而为瓜叶菊分子生物学研究打下坚实的基础。

1 材料和方法1.1 植物材料瓜叶菊种植于东北大学“花苑”。

1.2 试验方法1.2.1 基因组DNA的提取参照Doyle等[2]基因组DNA提取方法并加以改良。

分别取瓜叶菊的叶、茎、花各1g，加入20%PVP，于液氮中研磨后，每个样品分装入4管经65℃预热的700μl CTAB提取缓冲液（2%CTAB，100 mmol/L pH 8.0 的 Tris-HCl，20 mmol/L EDTA，1.4mol/L NaCl）中，加2% β-巯基乙醇，在65℃水浴中充分混匀后，室温放置10 m in；加700μl氯仿∶异戊醇(24∶1)，充分混匀；10 000r/m in离心10m in；将上清液转到一支新离心管中，再加氯仿/异戊醇抽提一次。

[精彩]ctab法枯草芽孢杆菌（bacillussubtilis）基因组dna的提取

CTAB法枯草芽孢杆菌（Bac illus subtilis）基因组DNA的提取内容提要以枯草芽孢杆菌为材料，采用CTAB法（十六烷基三甲基溴化铵）提取枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的基因组DNA作为基因扩增的模板，并测定其含量和纯度。

本实验要求：提取高质量的基因组DNA为下一步的基因操作准备。

原理高纯度、高分子量的基因组DNA是构建基因组文库、Southern 杂交(包括RFLP)及PCR等后续的分子生物学操作的基础。

利用基因组DNA较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。

加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA 即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中，可用玻棒将其取出，而小分子DNA 则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到提取的目的。

在提取过程中，染色体会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离基因组DNA 时应尽量在温和的条件下操作，如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓，以保证得到较长的DNA。

一般来说，构建基因组文库，初始DNA长度必须在100kb 以上，否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。

而进行RFLP 和PCR 分析, DNA长度可短至50kb，在该长度以上，可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下)，并可保证包含PCR 所扩增的片段(一般2kb 以下)。

不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同；不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。

在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA 大分子。

尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR 反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA 时, 应考虑除去多糖和酚类物质。

DNA的含量与纯度在研究工作中十分重要，常常需要测定。

目前使用较多和较简便的是紫外吸收法。

核酸在260nm波长有一特征吸收峰，根据其光密度（OD）值可计算DNA浓度。

植物基因组DNA的提取及分析

CTAB法提取植物基因组DNA原理这种方法是由Murray 和Thompson（1980）修改而成的简便方法。

CTAB是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白、多糖类物质分开。

最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB 溶于乙醇或异丙醇而除去。

(1) 2×CTAB溶液CTAB（W/V）2%Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0）EDTA 20mmol/L （pH8.0）NaCl 1.4mol/LPVP 1%灭菌备用。

没灭菌前呈粘稠状，CTAB灭菌后变成清亮的溶液。

(2) 氯仿/异戊醇（24:1）(3) RNaseA 10mg/ml(不用)(4)乙醇或异丙醇(5)β-巯基乙醇(6) 70%乙醇操作程序⏹1．在2mL离心管中，加入500μl的2×CTAB, 65℃预热，用前加入20 μl β-巯基乙醇。

⏹2．嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净，再用灭菌ddH2O冲洗2次，放入经液氮预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到预热的离心管中，总体积达到1mL混匀后置65℃水浴中保温45-60min，并不时轻轻转动试管。

⏹注：冻存材料直接研磨，绝对不能化冻。

而且粉末应在化冻前转移，否则内源性DNase有可能降解基因组DNA。

⏹3．加等体积的氯仿/异戊醇，轻轻地颠倒混匀，室温下10 000rpm离心10 min，移上清至另一新管中。

4．加入2倍体积的100%乙醇或0.7倍体积异丙醇，会出现絮状沉淀，-20℃放置30 min 或-80℃放置10min ，12 000rpm 离心10-15min 回收DNA 沉淀。

⏹ 5．用70%乙醇清洗沉淀两次，吹干后溶于适量的灭菌ddH2O 或TE 缓冲液中⏹ 6．0.8%琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA 的完整性。