黔产千里光提取物总生物碱的含量测定及抗菌作用研究_饶海

授鉴定为药典收载的千里光正品。 1． 1． 2 主要仪器。FA2004 电子天平，购自福州华志科上海 舜宇恒平学仪器有限公司； UV-2401 紫外可见分光光度计， 购自日本岛津公司。 1． 1． 3 主要试剂。苦参碱对照品，购自中国食品药品检定 研究院，批号 110805-200507； 其他试剂均为分析纯，市售。 1． 2 方法 1． 2． 1 对照品的选择［3］。在预试验的基础上，选择苦参碱 为标准品。以无水甲醇为空白，作苦参碱标准品及千里光的 吸收曲线，结果发现千里光吸收曲线与苦参碱标准品的吸收 曲线相 近，所 以 试 验 选 择 苦 参 碱 为 对 照 品，测 定 波 长 为 207 nm。 1． 2． 2 对照品溶液制备。精密称取苦参碱对照品 10． 95 mg，置 50 ml 容量瓶中，用蒸馏水溶解，并稀释至刻度，即得 浓度为 0． 219 mg / ml 的苦参碱标准品溶液，备用。 1． 2． 3 样品溶液的制备。（ 1） 含量测定用样品溶液的制备。 精密称取适量黔产千里光样品置圆底烧瓶中，分别加入 30 ml 浓度 60% 乙醇、浓度 95% 乙醇、水进行回流提取，收集提 取液，用旋转蒸发仪回收溶剂，挥干溶剂得到生物碱粗提物 浸膏，称量圆底烧瓶与浸膏的总重，计算出浸膏的量，然后用 无水甲醇溶解浸膏转移至 50 ml 容量瓶中，并用无水甲醇定 容。（ 2） 抗菌作用检测用样品溶液的制备。称取适量黔产千 里光样品置圆底烧瓶中，分别加入 30 ml 浓度 60% 乙醇、浓 度 95% 乙醇、水进行回流提取，收集提取液，用旋转蒸发仪回
摘要 ［目的］比较黔产千里光不同溶剂提取物总生物碱的含量及其抗菌作用。［方法］采用紫外可见分光光度法测定千里光中总生物 碱的含量，并采用牛津杯法观察各提取物的抗菌作用。［结果］采用紫外可见分光光度法测定千里光中总生物碱浓度在 0． 011 0 ～ 0． 055 0 mg / ml 范围内与吸光度的线性关系良好，回归方程为 Y = 23． 654X + 0． 021，平均回收率为 99． 2% ，R = 0． 999 9。千里光浓度 60% 醇提液总生物碱含量为 38． 71 mg / g，浓度 95% 醇提液生物碱含量为 52． 25 mg / g，水煎液总生物碱含量为 60． 50 mg / g。浓度 60% 乙醇提 取液对肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用较强; 水提液对大肠杆菌抑制作用较强; 浓度 95% 乙醇提取液抗菌作用较弱， 对绿脓杆菌无抑制作用。［结论］该方法准确、简便、重复性好，可用于黔产千里光中生物碱的含量测定; 千里光提取物总生物碱的含量 与其抗菌作用无正相关关系。 关键词 千里光( Climbing Groundsel Herb) ; 总生物碱; 紫外可见分光光度法; 抗菌作用 中图分类号 S 567 文献标识码 A 文章编号 0517 － 6611( 2013) 14 － 06207 － 03
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41（ 14） ： 6207 － 6209
责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
黔产千里光提取物总生物碱的含量测定及抗菌作用研究
饶 海1 ，周 镁2 ，秦拴梅2 ，黄秀平2 ，覃容贵2*
（ 1． 贵阳市云岩区人民医院，贵州贵阳 550003； 2． 贵阳医学院药学院，贵州贵阳 550004）
Study on Determination of Content of Total Alkaloids in Different Extractive of Climbing groundsel Herb from Guizhou and Its Antibacterial Action RAO Hai et al ( Guiyang People’s Hospital of Yunyan District，Guiyang，Guizhou 550003) Abstract ［Objective］To compare content of total alkaloids in different extractive of Climbing groundsel Herb from Guizhou and its antibacterial action．［Method］The content of total alkaloids was measured by UV spectrophotometer． Oxford cup method was applied to observe the antibacterial action．［Result］The absorbance of total1 alkaloids was measured by UV spectrophotometer，the concentration of total alkaloids was linear in the range of 0． 011 0-0． 0548 mg / ml，its regression equation was Y = 23． 654X + 0． 021，and its average recovery rate and correlation coefficient R were 99． 2% and 0． 999 7． The contents of total alkaloids in 60% ，95% alcohol and water extractive were 38． 71 mg / g，52． 25 mg / g and 60． 50 mg / g respectively． The extractive of 60% alcohol had strong antibacterial action on Streptococcus pneumoniae，Staphylococcus aureus and Escherichia coli． The water extractive had strong antibacterial action on Escherichia coli． The antibacterial action was weak in extractive of 95% alcohol． ［Conclusion］This method is simple，accurate and reliable，which can be used for assaying of total alkaloids in Climbing groundsel Herb． There is no positive correlation between the contents of total alkaloids in different extractive of Climbing groundsel Herb and their antibacterial activities． Key words Climbing groundsel Herb; Total alkaloids; Ultraviolet spectrophotometry; Antibacterial action
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安徽农业科学
20 / ml。 1． 2． 4 测定波长的选择。生物碱类化合物在 200 ～ 400 nm 区域内存在主要吸收峰，峰带 200 ～ 280 nm。将浓度 95% 的 乙醇提取液用紫外可见分光光度计 200 ～ 400 nm 区域内扫 描，制作吸收图谱进行测定。取 1． 0 和 0． 5 ml 浓度为 0． 219 mg / ml 的苦参碱标准品，在 190 ～ 400 nm 扫描，选择最佳测定 波长。 1． 2． 5 方法学考察。（ 1） 线性关系的考察。精密量取 0． 50、 1． 00、1． 50、2． 00 和 2． 50 ml 苦参碱标准品溶液于 10． 00 ml 容 量瓶中，配制成浓度为 0． 011 0、0． 022 0、0． 033 0、0． 044 0 和 0． 055 0 的系列梯度溶液，在 207 nm 波长处测定，以吸光度 （ Y） 对浓度（ X） 作图，计算回归方程。（ 2） 精密度试验。于 50 ml 容量瓶中精密量取 0． 4 ml 浓度 95% 乙醇提取样品溶 液，置于 25 ml 容量瓶中，并用无水甲醇定容，在同一条件下 重复测定 6 次，计算 RSD。（ 3） 稳定性试验。于 50 ml 容量瓶 中精密量取 0． 4 ml 浓度 95% 乙醇提取样品溶液，置于 25 ml 容量瓶中，并用无水甲醇定容，于 1 h 内测定其稳定性，计算 RSD。（ 4） 重复性试验。精密称取 1． 000 g 千里光药材 5 份， 按照“1． 2． 3”项下方法，制备 5 份浓度 95% 乙醇提取样品溶 液，分别于 50 ml 容量瓶中精密量取 0． 4 ml 置于 25 ml 容量 瓶中，并用无水甲醇定容，测定吸光度值，每份测定 3 次，并 计算 RSD。（ 5） 加样回收试验。取已知总生物碱含量的千里 光药材 0． 500 g，再精密加入 105 ℃ 干燥至恒重的苦参碱对照 品适量，按“1． 2． 2”的方法制备供试品浓度 95% 乙醇提取溶 液，共 9 份，在 207 nm 处测定，由回归方程计算回收率，并计 算 RSD。 1． 2． 6 千里光不同溶剂提取物样品测定。精密称取适量黔 产千里光样品置圆底烧瓶中，分别加入 30 ml 浓度 60% 乙 醇、浓度 95% 乙醇和水进行回流提取，依法测定不同溶剂提 取物总生物碱含量。 1． 2． 7 千里光不同溶剂提取物抗菌作用。吸取经熔化的营 养琼脂 20． 0 ml 加到无菌平皿中，用水平放置使其凝固，作为 底层，取细菌营养肉汤培养物 1． 0 ml，加入到 50 ml 冷却至 50 ℃ 的营养琼脂培养基内，迅速摇匀，取 4． 0 ml 覆盖底层培养 基，使其均匀分布，作为菌层，平放凝固后备用。在制作好的 含菌平板底部作好标记，在无菌操作下用灭菌镊子取牛津 杯，放置在相应的标记位置，使牛津杯底部与培养基表面紧 密接触。用无菌吸管分别吸取 290 μl 药液（ 浓度 60% 乙醇 提取液、浓度 95% 乙醇提取液和水提液） 注入各牛津杯，盖上 平皿盖，静置数分钟后，置 37 ℃ 培养箱内培养 16 ～ 18 h 后， 观察试验结果。 2 结果与分析 2． 1 最佳波长的测定 图 1 表明，千里光生物碱在波长 205 nm 左右有最大吸收，而浓度 95% 的乙醇提取液在波长 207 nm 有最大吸收，故选择最佳测定波长为 207 nm。 2． 2 方法学考察 （ 1） 线性关系的考察。计算得线性回归 方程为： Y = 23． 654X + 0． 021，R = 0． 999 9。试验结果表明，千 里光中总生物碱浓度在 0． 011 0 ～ 0． 055 0 mg / ml 范围内与吸