布鲁氏杆菌病的检验方法
布鲁氏菌病鉴定方法
布鲁氏菌病鉴定方法
布鲁氏菌病的鉴定方法主要包括以下几种：
1. 血常规检查：布鲁氏杆菌病患者进行血常规检查时，通常会提示白细胞计数正常或者偏低，以及淋巴细胞相对或绝对增加的情况，还可能出现少数异型淋巴细胞。
2. 细菌培养：在对血液和骨髓进行细菌培养时，如果能从血液、骨髓中分离到布鲁氏杆菌，可以帮助明确诊断。
3. 初期平板凝集试验：如果在初期平板凝集试验中，化验结果为阳性，可作为布鲁氏杆菌病初期筛选的依据。
4. 其他：若存在接触家畜、家禽的情况，或者为生活在疫区的居民，出现持续数日乃至数周发热、多汗、肌肉肿痛、关节肿痛等症状，并且伴有肝、脾、淋巴结肿大、睾丸肿大等情况，应该高度怀疑布鲁氏杆菌病。
5. 标记抗体技术：包括间接ELISA、竞争性ELISA、双抗原夹心酶联免疫试验、斑点ELISA、免疫荧光抗体试验等。
标记抗体技术具有良好的特异性，较高的敏感性。
以上是布鲁氏菌病的鉴定方法，如果您有不适症状，建议及时就医并告知医生您的接触史和暴露史，以便医生更好地为您制定诊疗方案。
布鲁氏菌病防治技术规范
布鲁氏菌病防治技术规范布鲁氏菌病（B r u c e l l o s i s，以下简称布病），是由布鲁氏菌属细菌引起的以感染家畜为主的人兽共患的传染病。
世界动物卫生组织（O I E）将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。
为了预防、控制和净化布病，依据《中华人民共和国动物防疫法》及有关的法律法规，特制定本规范。
1、适用范围本规范规定了动物布病的诊断、疫情报告、疫情处理、防治措施、控制和净化标准。
本规范适用于中华人民共和国境内一切从事牛、羊、猪、鹿、犬等布病易感动物的饲养、经营和动物产品的生产、经营，以及从事动物防疫活动的单位和个人。
2、诊断本病依据流行病学、临床症状、病理变化可做出初步诊断，确诊需做血清学实验或细菌分离。
2.1流行特点人和多种动物对布鲁氏菌易感。
动物中羊、牛、猪的易感性最强。
母畜比公畜，成年畜比幼年畜发病多。
在母畜中，第一次妊娠母畜发病较多。
带菌动物，尤其是病畜、流产胎儿、胎衣是主要传染源。
消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途径，也可通过损伤的皮肤、粘膜等感染。
常呈地方性流行。
人主要通过皮肤、粘膜和呼吸道感染。
2.2临床症状潜伏期一般为14～180天。
最显著症状是怀孕母畜发生流产，流产后可能发生胎衣滞留和子宫内膜炎，从阴道流出污秽不洁、恶臭的分泌物。
新发病的畜群流产较多，老疫区畜群发生流产的较少，但发生子宫内膜炎、乳房炎、关节炎、胎衣滞留、久配不孕的较多。
公畜往往发生睾丸炎、附睾炎或关节炎。
2.3病理变化主要病变为生殖器官的炎性坏死，淋巴结、肝、肾、脾等器官形成特征性肉芽肿（布病结节）。
有的可见关节炎。
胎儿主要呈败血症病变，浆膜和粘膜有出血点和出血斑，皮下结缔组织发生浆液性、出血性炎症。
2.4实验室诊断2.4.1细菌学诊断2.4.1.1显微镜检查采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝、脾、淋巴结、胎儿胃内容物等组织，制成抹片，用柯兹罗夫斯基染色法染色，镜检，如果发现有红色球杆状小杆菌时，而其它菌为蓝色，即可确诊。
布鲁氏杆菌
可发生小的坏死、骨髓组织营养不良和出血性素质、再生障碍性贫血和纤维化等。有的急性和亚急性期病人 发现骨髓样细胞增殖，圆细胞的结节，多数浆液性水肿和渐进性细胞坏死。在慢性期见有髓样细胞増殖，某些病 例尚有圆细胞的病灶性浸润 。
急性期可见病灶性卡他样肺炎，炎症病灶通常局限于肺下叶。有时在肺内见到由类上皮细胞和巨噬细胞构成 的肉芽肿 。
诊断方法
畜间布病诊断标准
人间布病诊断标准
鉴别诊断
（1）流行病学 发病前病人与家畜或畜产品、布鲁菌培养物有密切接触史，或生活在疫区的居民，或与菌苗生产、使用和研 究有密切关系者 。 （2）临床表现 岀现持续数日乃至数周发热（包括低热）、多汗、肌肉和关节酸疼、乏力兼或肝、脾、淋巴结肿大和睾丸肿 大等可疑症状及体征 。 （3）实验室检查 布病玻片或虎红平板凝集反应阳性或可疑，或皮肤过敏试验后2448小时分别观察一次，皮肤红肿浸润范围有 一次在2.0cm×2.0cm及以上 。 （4）分离细菌 从病人血液、骨髓、其他体液及排泄物中分离到布鲁菌 。 （5）血清学检查
末梢神经受累较多见，经过较轻。中枢神经受累少见，但经过严重，表现为脑炎、脑膜炎、脊髓膜炎和脊髓 炎等。神经系统的主要病理变化为退行性、渗出性、增殖肉芽肿性和硬化性改变 。
运动系统的骨、关节、肌肉、韧带均可受累。骨髓病变表现为增殖性多形细胞的成骨性炎性反应，同时有骨 样组织形成，骨骼肌可有急性或慢性炎症反应。结缔组织内初期表现为浆液性出血性炎症，沿着血管走向，同时 发生圆细胞浸润。这种浸润或完全消散，或被肉芽组织所代替，然后纤维化。在临床上可经常见到关节炎，关节 周围炎、滑膜炎和腱鞘炎等 。
布鲁氏杆菌会引起布鲁氏杆菌病，简称布病，它是一种人畜共患的慢性传染性疾病，危害较大。在我国该疾 病的主要传染源为牛、羊、猪3种牲畜，其中以羊型布鲁氏杆菌对人体的传播性最强，致病率最高，危害最为严重。 布病主要损害人、畜的生殖系统和关节，对畜牧业的发展以及人类健康产生了较大的危害 。
布鲁氏菌病诊断的金标准
布鲁氏菌病诊断的金标准
布鲁氏菌病的金标准诊断方法是通过分离和鉴定布鲁氏菌。
具体诊断布鲁氏菌病的步骤包括：
1. 临床症状分析：布鲁氏菌病的典型症状包括发热、关节痛、乏力、头痛等，临床医生根据患者的症状进行初步判断。
2. 实验室检查：通过采集患者的血液、骨髓、尿液、淋巴组织或其他体液或组织进行培养。
3. 分离布鲁氏菌：将采集到的样本进行无菌条件下的培养处理，将培养基上的菌落进行进一步的鉴定。
4. 鉴定布鲁氏菌：通过对分离的菌落进行生理生化试验，如氧化酶试验、嗜碱性试验、免疫荧光试验、PCR等，判断菌株
是否为布鲁氏菌。
金标准诊断布鲁氏菌病的主要依据是从患者体液或组织样本中成功分离和鉴定出布鲁氏菌。
但由于布鲁氏菌的培养和鉴定过程较为复杂，诊断通常需要时间，并且技术要求高，因此常常需要结合临床症状、实验室检查及其他辅助诊断方法来综合判断。
布鲁氏杆菌病
及诊断根据流行学资料、职业及典型的临床表现即可拟诊。
血、骨髓、脓液等标本分离到布氏杆菌即可确诊。
急性期血培养阳性率可达60～80％，骨髓培养阳性率更高。
血清凝集试验是筛选本病最实用的方法，急性期阳性率达80％以上，慢性期约1/3病例阳性。
滴定效价在1:100以上有诊断意义，病程中逐周测定效价有成倍升高者意义更大。
接种霍乱菌苗或兔热病菌苗者，布氏杆菌素皮内试验后或既往曾感染本病者凝集效价均上升，应予注意。
补体结合试验检测特异性抗体，阳性反应出现较晚，但特异性较高;病程第3周效价可达1:16以上，慢性期阳性率可达85％以上。
布氏杆菌素皮内试验是Ⅳ型变态反应，起病6个月内阳性率很低，慢性期几乎100％阳性，阳性可持续数年至20年，故本试验常用于回顾性诊断及流行学调查。
检查1．血象：白细胞半数正常或轻度减少，淋巴细胞相对或绝对增多，分类可达60%以上。
血沉在各期均增速。
2．细菌学检查：患者血液、骨髓、乳汁、子宫分泌物均可做细菌培养。
急性期阳性率高，慢性期低。
骨髓标本较血液标本阳性率高。
3．免疫学检查。
（1）血清凝集试验。
（2）补体结合试验。
（3）抗人球蛋白试验。
（4）酶联免疫吸附试验。
治疗二、抗菌治疗：急性期要以抗菌治疗为主。
常用抗生素有链霉素、四环素族药物、磺胺类。
通常采用：链霉素加四环素族药物或氯霉素。
三、菌苗疗法：适用于慢性期患者。
急性期宜早期足量给与抗菌药物，若疗程不足，复发率可达10～40％。
四环素为首选药物，对急性病例和复发者均有效。
为提高疗效、防止耐药，目前多主张四环素、链霉素联合应用21天为1疗程。
复发病例可重复1～2个疗程，疗程间隔5～7天。
此外复方磺胺甲基异 唑（复方新诺明）亦有效。
中毒症状严重者可短期加用肾上腺皮质激素。
慢性期治疗较困难，除抗菌治疗外，尚可配合中医中药、针灸和理疗。
预防消灭和控制家畜中的布氏杆菌病是控制人布氏杆菌病的主要措施。
对牧区牲畜应定期检查，发现病畜及时隔离并对污染环境消毒处理，健康牲畜应进行预防接种。
布鲁氏菌病诊断方法、疫区判定和控制区考核标准
布鲁氏菌病诊断方法、疫区判定和控制区考核标准文章属性•【制定机关】卫生部(已撤销),农业部(已撤销)•【公布日期】1988.10.25•【文号】•【施行日期】1988.10.25•【效力等级】部门规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】免疫规划正文布鲁氏菌病诊断方法、疫区判定和控制区考核标准（１９８８年１０月２５日）一、诊断方法和标准（一）人间布病诊断方法和判定标准１．人的布病诊断是综合性的，主要依据：（１）流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物（包括观赏动物）、畜产品、布鲁氏菌培养物等或生活在疫区内的居民。
（２）临床症状和体征应排除其他疑似疾病。
（３）实验检查：病原分离、试管凝集试验、补体结合试验、抗人球蛋白试验。
（虎红平板凝集试验，皮内变态反应试验仅供初诊用）。
凡具备（１）、（２）项和第（３）项中的任何一项检查阳性即可确定为布病病人。
对已确诊的慢性布病病人和接种过菌苗的人，应以临床症状为主要依据，血清学试验效价高低，皮内变态反应强弱仅供参考。
２．实验检查阳性判定标准（１）病源分离：检出布鲁氏菌。
（２）试管凝集试验：１∶１００（＋＋）及以上，即１００国际单位／毫升及以上。
（３）补体结合试验：１∶１０（＋＋）及以上。
（４）抗人球蛋白试验：１∶４００（＋＋）及以上。
（５）虎红平板凝集试验：血清０．０３毫升，检查出现可见凝集。
（６）皮内变态反应：皮试后２４、４８小时分别各观察一次，皮肤红肿浸润范围有一次在２．５×２．５厘米及以上（或６．２５平方厘米及以上）。
（二）畜间布病检验方法和判定标准１．家畜布病的诊断是综合性的，主要依据：（１）流行病史（２）临床症状（３）实验检查：Ａ、病源分离Ｂ、血清学及其他试验ａ、初筛试验：虎红平板凝集试验、平板凝集试验、全乳环状试验（牛）、皮内变态反应（羊）、任选一种或多种进行初筛。
ｂ、正式试验：试管凝集试验、补体结合试验、任选１种或两种进行试验。
种畜和奶牛及其他价值较高的动物，应以分菌、补体结合试验为主要检验方法。
布病检测方法
布病检测方法布病，又称传染性淋巴结肿大病，是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病。
布鲁氏菌是一种革兰氏阴性杆菌，可引起牛、羊、猪等家畜的慢性全身性感染，同时也可感染人类。
由于其临床症状多样化，且易被其他传染病所掩盖，因此对布病的检测方法显得尤为重要。
目前，布病的检测方法主要包括实验室检测和临床诊断两种。
实验室检测方法主要包括细菌培养、血清学检测、分子生物学检测等，而临床诊断方法则主要依赖于患者的临床表现和流行病学史。
下面将分别介绍这些方法的具体内容。
首先是细菌培养方法。
这是一种最常用的实验室检测方法，通过将患者的血液、体液或组织样本接种到适当的培养基上，利用培养基中的营养物质培养布鲁氏菌，然后观察培养物中是否有细菌生长。
这种方法的优点是可以直接获得布鲁氏菌的培养物，便于进一步的鉴定和药敏试验，但缺点是培养时间长，一般需要3-4周才能得到结果。
其次是血清学检测方法。
这是一种通过检测患者血清中的抗体水平来诊断布病的方法。
目前常用的血清学检测方法包括凝集试验、间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验等。
这些方法可以检测出患者对布鲁氏菌的特异性抗体，对于早期感染和慢性感染的诊断具有较高的敏感性和特异性。
另外，分子生物学检测方法也逐渐应用于布病的检测中。
这种方法通过检测患者的体液或组织样本中的布鲁氏菌的DNA或RNA来进行诊断。
与传统的细菌培养和血清学检测相比，分子生物学检测方法具有快速、敏感、特异性高等优点，尤其适用于早期感染和难以培养的情况。
除了实验室检测方法外，临床诊断方法也是布病检测的重要手段。
临床医生通常会结合患者的临床表现和流行病学史来进行初步判断，如发热、关节痛、淋巴结肿大等症状，以及接触过疑似感染动物或其产品的情况。
这些信息对于布病的早期诊断和治疗具有重要意义。
综上所述，布病的检测方法主要包括实验室检测和临床诊断两种。
实验室检测方法包括细菌培养、血清学检测和分子生物学检测，而临床诊断方法则主要依赖于患者的临床表现和流行病学史。
布鲁氏菌的实验室检测方法
布鲁氏菌的实验室检测方法布鲁氏菌（Brucella）是一种革兰氏阴性的细菌，可以引起布鲁氏病，一种人畜共患传染病。
布鲁氏病在世界范围内广泛分布，对人类和动物的生命健康和经济造成了重大影响。
因此，对布鲁氏菌进行实验室检测具有重要意义。
下面将详细介绍布鲁氏菌的实验室检测方法。
1.细菌培养：2.形态特性鉴定：使用显微镜观察培养出来的菌落形态特征，如形状、色素、大小、透明度等。
布鲁氏菌菌落呈灰白色或乳白色，呈球形或卵圆形。
3.血清学方法：由于布鲁氏菌引起的感染会产生特异性抗体，可以通过血清学方法进行检测。
包括流行病学调查、血球沉降反应（Widal试验）等。
Widal试验是通过实验室诊断布鲁氏菌感染的常规试验方法之一4.分子生物学方法：分子生物学方法是目前检测布鲁氏菌最常用的方法之一、包括PCR、核酸杂交、扩增酶联反应（LAMP）等。
PCR是一种特异、灵敏、高效的检测方法，可以通过扩增目标序列进行检测。
核酸杂交可以使用特异性探针与目标序列进行杂交，然后利用放射性或非放射性的标记物进行检测。
LAMP是一种新型的核酸扩增技术，通过特异性引物和酶在等温条件下扩增目标序列，可以快速检测布鲁氏菌。
5.免疫学方法：免疫学方法主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术等。
ELISA是一种高灵敏度和高特异性的免疫分析方法，可以通过检测患者体液中的特异抗体来诊断布鲁氏菌感染。
流式细胞术可以通过检测细胞表面标记物的表达来分析布鲁氏菌感染的免疫反应。
6.细胞培养方法：布鲁氏菌可以在特定的培养基中感染和繁殖宿主细胞，在细胞培养方法中利用显微镜观察和记录细胞内布鲁氏菌的形态和分布情况。
这种方法对于布鲁氏菌的生物学及宿主细胞的代谢和免疫反应研究非常有用。
综上所述，布鲁氏菌的实验室检测方法主要包括细菌培养、形态特性鉴定、血清学方法、分子生物学方法、免疫学方法和细胞培养方法等。
不同的检测方法具有不同的优势和适用范围，综合应用可以提高布鲁氏菌感染的诊断准确性和效率。
布鲁氏杆菌诊断标准
布鲁氏杆菌诊断标准
布鲁氏杆菌病的诊断标准主要包括临床症状、实验室检查和确诊病例。
1. 临床症状：患者通常会出现肌肉酸痛、多汗、乏力、发热、关节痛等症状。
若患者有过疫区生活接触史，出现上述症状，可以作为诊断标准。
2. 实验室检查：通常进行血常规检查、血生化检查、血细胞沉降率检查。
如果在检查的过程当中发现白细胞降低、淋巴细胞相对增加、红细胞沉降率明显增快，也可以作为诊断依据。
3. 确诊病例：通常是进行布鲁氏菌病抗-人免疫球蛋白试验、补体结合试验、试管凝集试验等检测，当患者符合上述之一者，即可以作为诊断标准。
此外，也可以通过免疫学检查、分子生物学检查、电生理检查、影像学检查等方式来诊断。
以上信息仅供参考，如有需要，建议咨询专业医生。
布鲁氏菌病诊疗检测方法
布鲁氏菌病诊疗检测方法布鲁氏菌病（又称布鲁菌病，简称布病）是由布鲁氏菌感染引起的一种人畜共患疾病。
患病的羊、牛等疫畜是布病的主要传染源，布鲁氏菌可以通过破损的皮肤黏膜、消化道和呼吸道等途径传播。
急性期病例以发热、乏力、多汗、肌肉、关节疼痛和肝、脾、淋巴结肿大为主要表现。
慢性期病例多表现为关节损害等。
布病是我国《传染病防治法》规定的乙类传染病。
一、临床表现及分期潜伏期一般为『3周，平均为2周。
部分病例潜伏期更长。
（一）临床表现1.发热：典型病例表现为波状热，常伴有寒战、头痛等症状，可见于各期患者。
部分病例可表现为低热和不规则热型，且多发生在午后或夜间。
2.多汗：急性期病例出汗尤重，可湿透衣裤、被褥。
3.肌肉和关节疼痛：为全身肌肉和多发性、游走性大关节疼痛。
部分慢性期病例还可有脊柱（腰椎为主）受累，表现为疼痛、畸形和功能障碍等。
4.乏力：几乎全部病例都有此表现。
5.肝、脾及淋巴结肿大：多见于急性期病例。
6.其他：男性病例可伴有睾丸炎，女性病例可见卵巢炎；少数病例可有心、肾及神经系统受累表现。
（二）临床分期1.急性期：具有上述临床表现，病程在6个月以内。
2.慢性期：病程超过6个月仍未痊愈。
二、实验室检查（一）一般实验室检查1.血象：白细胞计数多正常或偏低，淋巴细胞相对增多，有时可出现异常淋巴细胞，少数病例红细胞、血小板减少。
2.血沉：急性期可出现血沉加快，慢性期多正常。
（二）免疫学检查1.平板凝集试验：虎红平板（RBPT）或平板凝集试验（PAT）结果为阳性，用于初筛。
2.试管凝集试验（SAT）:滴度为1：l00 ++及以上或病程一年以上滴度1： 50 ++及以上；或半年内有布鲁氏菌疫苗接种史，滴度达1：100 ++及以上者。
3.补体结合试验（CFT）：滴度1：10 ++及以上。
4.布病抗-人免疫球蛋白试验（Coomb' s）：滴度l：400 ++及以上。
（三）病原学检查血液、骨髓、关节液、脑脊液、尿液、淋巴组织等培养分离到布鲁氏菌。
布鲁氏菌病检测技术
布鲁氏菌病检测技术布鲁氏菌病检测技术1.概况布鲁氏菌病(简称布病)，是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患的传染病。
临床主要特征是母畜流产、乳腺炎、不育和各种组织(如睾丸、关节)的炎症。
人类感染布病后，病程长，反复发作，长期不愈。
布病几乎遍及世界各地。
凡有牲畜的地区都有布病流行。
据不完全统计，在160个国家和地区中就有123个国家和地区有布病发生。
我国多见于内蒙古、东北，西北等牧区。
在北方农区也有散发，常呈地地方性流行。
在不良环境，如抗生素的影响下，本菌易发生变异，通常变异形成的布鲁氏菌可在机体内长期存在。
该菌对热抵抗力不强，63℃经7～10 min可被杀死，在鲜乳中可存活2天到18个月，在冻肉中可存活14～47天，在干燥土壤和胎儿体内可分别存活37天和6个月。
对常用消毒药敏感，如0.1％升汞数分钟，1％来苏儿或2％福尔马林15 min可将其杀死。
日光下曝晒4 h 可杀死本菌。
人和多种动物对布鲁氏菌易感。
动物中羊、牛、猪的易感性最强。
母畜比公畜，成年畜比幼年畜发病多。
在母畜中，第一次妊娠母畜发病较多。
带菌动物，尤其是病畜、流产胎儿、胎衣是主要传染源。
消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途径，也可通过损伤的皮肤、粘膜等感染。
常呈地方性流行。
人主要通过皮肤、粘膜和呼吸道感染。
本病一年四季均可发病。
流行区在发病高峰季节(春末夏初)可呈点状暴发流行。
患病与职业有密切关系，如：兽医、畜牧工作者、屠宰工人、皮毛工等感染机会较高。
人类布鲁氏菌病的预防，首先要注意职业性感染，凡在动物养殖区、屠宰区、畜产品加工厂的工作者以及兽医、实验室工作人员等，必须严守防护制度(即穿着防护服装，做好消毒工作)，尤其在仔畜大批生产季节。
更要特别注意。
病畜乳肉食品必须灭菌后食用。
必要时可用疫苗接种，接种前应行变态反应试验。
阴性反应者才能接种。
2.实验室监测技术概述(据布鲁氏菌病防治技术规范)2.1检测方法血清学实验或细菌分离。
初筛试验选用虎红平板凝集试验(RBPT)或乳牛布病全乳环状试验(MRT)(见GB/T 18646)。
牛布鲁氏杆菌病的综合诊断及防治措施
设施农业2023-0867农业工程技术（设施农业）牛布鲁氏杆菌病的综合诊断及防治措施*摘要:布鲁氏杆菌病不仅影响养牛业健康发展，同时也威胁公共卫生安全。
该文着重对牛布鲁氏杆菌病的综合诊断要点及防治措施展开了深入探析，旨在为相关从业人员提供参考。
关键词: 牛；布鲁氏杆菌病；综合诊断；防治措施在畜牧业市场经济日益繁荣的大背景下，无论是社会层面还是个人层面，对畜产品质量安全都有了更高的要求。
近年来，受到频繁引种、养殖密度、卫生环境等诸多因素的影响，导致国内养殖场牛布鲁氏杆菌病呈现出高发趋势。
临床上，该病主要表现为母牛流产、产死胎、不孕和公牛睾丸发炎、配种能力下降等症状，严重影响着奶肉牛养殖场健康可持续发展，因此如何有效防治牛布鲁氏杆菌病成为当下广大畜牧兽医工作者和养殖场思考的关键问题。
1 病原及流行病学牛布鲁氏杆菌病是因革兰氏阴性属的布鲁氏杆菌所引发的一类慢性、消耗性、人畜共患性传染病，目前国内将该病暂列为二类动物疫病，简称“布病”。
布鲁氏杆菌为革兰氏阴性菌，呈小球杆状，无鞭毛、无芽孢，扩散性和感染性极强，可通过皮肤及黏膜侵入牛体并快速扩散至各个器官和组织中，进而使牛只发病。
布鲁氏杆菌对自然环境具有极强的抵抗力，在污水、土壤、粪便、肉制品以及乳制品当中均可长期存活。
布鲁氏杆菌对高温非常敏感，经紫外线照射或处于60℃的高温环境下可导致病菌快速失活并死亡。
布鲁氏杆菌对常用消毒剂均非常敏感，尤其是过氧乙酸、次氯酸钠、氯己定、新洁尔灭等消毒剂，能够将其快速杀灭[1]。
布鲁氏杆菌病可发生于任何生长阶段的牛只，该病主要传染源是已患病的牛和携带病菌的牛，母牛产下的死胎、排出的胎衣和羊水、分泌的乳汁以及公牛精液，均携带大量布鲁氏杆菌，会污染环境、饲料、饮水，其他牛接触被污染的环境或食用被污染的饲料、饮水后就极易感染发病。
母牛患病可经胎盘将病菌传播胡振鹏1，张学虎2，张小宁3（1.张掖市甘州区三闸镇农业农村综合服务中心，张掖 甘州 734000；2.张掖市动物卫生监督所，张掖 甘州 734000；3.甘肃省动物疫病预防控制中心，张掖 甘州 730046）给胎儿，导致胎儿发育异常，出现早产、产死胎等现象。
动物布病检测标准
动物布病检测标准
动物布病检测标准主要包括以下步骤：
1. 采集病料：从患病动物的血液、分泌物、器官和组织中采集病料。
2. 制作涂片：将采集的病料制成涂片，可以使用玻片或塑料片。
3. 染色镜检：将涂片进行染色处理，然后在显微镜下观察，查找布鲁氏杆菌。
4. 血清学试验：采用特异性抗体对病料中的布鲁氏杆菌进行检测。
5. 细菌分离培养：将病料接种在选择性培养基上，分离培养布鲁氏杆菌。
6. 鉴定试验：对分离培养的细菌进行生化试验、噬菌体试验、血清学试验等，以确定其是否为布鲁氏杆菌。
需要注意的是，在进行动物布病检测时，应遵循相关的生物安全防护措施，以避免感染和传播。
同时，检测结果应结合临床症状、流行病学调查和病理学检查结果进行综合分析，确定最终的诊断。
关于兽医实验室实用布鲁氏菌病检测方法
X u m u s h o u y i针对兽医实验室实用布鲁氏菌病检测方法进行分析，常规方式包含细菌分离培养、PCR技术及凝集试验等。
但是受到实验设施、检验成本等因素的影响，检验的结果不够理想。
随着现代兽医学的方法，酶联免疫吸附试验、荧光偏振分析技术及环介导等温扩增技术等开始在布鲁氏病菌检测中得到应用，可提升临床检测的准确度，为针对性治疗活动奠定基础。
布鲁氏菌病，也可以称之为布氏杆菌病、布鲁氏杆菌病等，是布鲁氏菌属细菌诱发的细菌感染性疾病，细菌可传播。
患病的母畜多具有流产、胎盘不下的症状特征，公畜则具有睾丸炎、附睾炎等临床症状，对畜牧业的持续发展会产生不利影响，甚至会危及公共卫生安全。
我国自2004年开始，将布鲁氏菌病纳入到重大动物疫病监测工作中，每年两次检验重点地区的牛羊病菌状态。
及时检出布鲁氏菌病，可预防细菌的传播。
一、布鲁氏菌病的常规检测方法1、细菌分离培养布鲁氏菌可通过细菌培养的方式，了解病菌情况，实验室检测率较高。
但是由于布鲁氏菌病属于二类动物病原微生物，为高致病性动物病原微生物，需要在国家生物安全三级（ABSL-3）或者四级（ABSL-4）实验室认可证书的实验室开展试验检测工作，通常难以在市级兽医实验室开展，临床检验受到限制。
2、PCR技术PCR技术主要是依据布鲁氏菌基因组内的特异保守序列进行分析，获取患病牲畜的血液、乳汁或者是分泌物等，根据扩增的情况进行临床判断。
PCR技术的应用方式简单，临床检测灵敏度、特异性均相对较强，且可以同时检测较多样本。
但是缺点在于仪器设备价格较高，检测成本较高。
3、凝集试验凝集试验为当前实验室检测布鲁氏菌病的主要方式，主要是应用虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）等进行检测。
细菌抗原和对应血清融合后，在电解质的影像系，抗原和抗体凝结。
凝集试验的操作方式简单，价格相对较低。
但是缺点在于难以分辨野毒感染抗体和弱毒疫苗感染抗体，可以将其作为筛检感染畜群的方式。
布鲁氏菌试管凝集试验
操作步骤
加入抗原:先以0.5%石碳酸生理盐水将抗原原液做 适当稀释（一般是作1:10稀释）,稀释后的抗原加 入各稀释的血清管（第一管不加，作为血清对 照）,每管0.5毫升,混匀。加入抗原后，第二管至 第五管每管总量为1毫升，从第二管起血清稀释度 分别为1:25 1:50 1:100 1:200，从第一管再吸出 0.5毫升，剩1毫升。 对照管的制作: 抗原对照（适当稀释的抗原加石碳酸盐水） 被检血清对照 阴性对照（阴性血清稀释后加抗原） 阳性对照（阳性血清稀释到原有滴度加抗原）
评价
此法简便、快速、容易操作，适于基层大面积检 疫； 此法有一定敏感性，检查牛的阳性率稍高于绵羊、 山羊。 因为在酸性环境下IgM活性受抑，该法主要是检 查IgG类凝集抗体，所以特异性较好，与补体结合 试验、二巯基乙醇（2-ME）试验和抗球蛋白 （Coomb’s0）试验有较高的吻合率。 该法受制备抗原时条件影响较大，所以每批制备 抗原应予以检查、标化方可应用。
然后将试验管和对照管充分 混匀后，放于37℃温箱中 20-22小时后取出，在室温 下放置2个小时，以比浊管 为标准判定结果。
结果的判定
判定比浊管的制备:每次试验须配制比浊
管作为判定的标准依据. 配制方法是:取本次试验用的抗原稀释液 （一般1:10）5-10毫升，加入等量的 0.5%石碳酸生理盐水作倍比稀释，按下 表配制比浊管 比浊管的配制
抗原抗体 结合的表面性
抗原抗体的结合仅仅是分子表面的结合， 虽然两者的结合相当稳定，但结合后的抗 原抗体，其本身的结构，生物学活性均未 遭到破坏,并且在一定条件下可解离.即抗原 抗体的结合是可逆的,所以,解离抗原抗体复 合物的方法可用于 提取,纯化抗原或抗体.
动物感染布鲁氏杆菌病的实验室检测诊断方法
畜 牧 兽 医2021年第11期新农民动物感染布鲁氏杆菌病的实验室检测诊断方法宁 霞（甘肃省陇南市两当县畜牧兽医站，甘肃 两当 742400）摘要：布鲁氏杆菌病是一种流行性动物疾病，具有一定的传染性和危害性。
这就需要相关人员结合布鲁氏杆菌的病原特点、病理特征等进行分析与研究，采用科学合理的实验室检测诊断方法进行诊断，进而制定出针对性的预防措施，最大程度上降低动物布鲁氏杆菌病的发病。
本文对此进行了简要介绍，希望在动物布鲁氏杆菌病的诊断与预防方面起到一定的帮助。
关键词：动物布鲁氏杆菌病；检测；诊断动物布鲁氏杆菌病是一种常见的二类动物疫病，主要是由布鲁氏杆菌引发，这种病具有较强的潜伏期和高度的传染性。
尤其是羊、牛等家畜类，对于布鲁氏杆菌病具有较差的抗病机能。
该病的临床表现主要体现在母畜易流产、易发生子宫内膜炎、睾丸炎、久配不孕等。
随着畜牧业的不断发展，动物布鲁氏菌病的发病几率显著增加。
这就需要相关人员加强检测诊断，积极预防，避免布鲁氏杆菌病的大范围传播。
1 布鲁氏杆菌病的发病特点布鲁氏杆菌是一种革兰氏阴性菌，其菌种主要包括六种，即羊、牛、猪、鼠、绵阳及犬布氏杆菌。
但是动物布鲁氏杆菌病主要以羊、牛、猪较为普遍，在这三种疾病中，以羊布鲁氏杆菌病最为常见[1]。
布鲁氏杆菌病具有较强的潜伏性，不仅能够在土壤、水、皮毛等存活，而且还能够存活于部分食品中。
但是高温或者消毒剂能够在一定程度上杀死布鲁氏杆菌。
常见的消毒剂有福尔马林、生石灰水等。
布鲁氏杆菌病的发生与季节变化无关，而是呈现出局域性的传染流行。
一旦牛、羊等感染布鲁氏杆菌，其流产胎儿、胎衣、羊水、粪便、精液等都会存在大量的病菌，这些病菌可以通过消化道、呼吸道等进行直接性的接触传感，也会进一步将所接触到的饲料、土壤或者水源等加以污染，进而传染给其它的动物群体。
布鲁氏杆菌的潜伏期或长或短，长则达到半年，短则表现为十几天。
大部分动物的感染均为隐性感染，其明显症状就是流产。
牛羊布鲁氏杆菌病的诊断及综合防治
技术推广牛羊布鲁氏杆菌病的诊断及综合防治张龙忠1秦明礼2余常文2(1.重庆市忠县畜牧兽医服务中心石黄镇站，重庆忠县404300；2.重庆市忠县畜牧兽医服务中心官坝镇站，重庆忠县404300)摘要：牛羊布鲁氏杆菌病是一种人畜共患疾病，主要是由布鲁氏杆菌感染牛羊后所致，若牛羊感染该疾病，对牛羊养殖场的正常发展产生较大的不良影响，因此需要及时进行准确诊断，并予以相应的防治。
本文将论述牛羊布鲁氏杆菌病的诊断及综合防治。
关键词：牛羊布鲁氏杆菌病;诊断；综合防治1牛羊布鲁氏杆菌病的实验室检测方法虎红平板凝集试验与细菌学检查方法是目前临床中检测布鲁氏杆菌最常用的实验室检测方法。
检验人员首先采集患病牛羊的血液，使用虎红平板凝集试验明确血液中是否存在布鲁氏杆菌抗原，之后对发病牛羊的组织病料进行细菌学检查，通过涂片染色镜检并分离培养，以明确组织病料中是否符合布鲁氏杆菌特征。
除此之外，临床检测人员也会使用PCR法进行检测，例如在杜琳等闪人的研究中，作者使用多重PCR检测法对布鲁氏杆菌进行检测，可用于检测生鲜乳中布鲁氏杆菌，通过临床分析显示，PCR法主要是依据布鲁氏杆菌保守抗原Omp31、Omp25序列设计特异性检测引物，预期扩增片段大小分别为472bp、140bp,通过实践可知，PCR法的灵敏度高达1 X105CFU/ml,因而能够用于生鲜乳中布鲁氏杆菌的快速检测。
在李秀梅等囚人的研究中，作者使用温扩增技术与横向流动试纸条法对布鲁氏杆菌实施快速检测，根据布鲁氏杆菌OMP25基因设计4条特异性引物和1条异硫氧酸荧光素(FITC)标记的探针，生物素标记LAMP扩增产物能够特异性地与FITC标记的探针杂交，优化后的扩增温度为63I,时间为50min,LAMP-LFD方法能够对布鲁氏杆菌进行特异性地检出，最低检测下限为5.4#102CFU/ml，可获得直观的判定结果，因而对于基层实验室、应急检测或现场检测情况而言，该种方式可对布鲁氏杆菌进行直接有效的监测囚。
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２ 试管凝集试验
试管凝集试验是一种定量试验 ，可排除玻片法 凝集试验的非特异凝集 ，是鉴定细菌更为准确可靠
判为可疑。可疑反应的家畜 ， 经３ ～ ４ 星期后再采血重 新检查 。 牛和羊仍为可疑判为阳性 ， 猪和马仍为可疑 ，
而畜群 中又没有病例和大批阳性病畜， 则判为阴性。
的凝集试验 ，用以检测待检血清 中是否存在相应抗 体和测定该抗体的含量 ，以协助临床诊断或供流行
瓯
４ 注意事项
待检血清必须新鲜 ， 无溶血现象和腐败 。 稀释血 清时 ， 要反复吹吸几次 、 完全混匀才能移入另 一管 ， 而且注意不要在 吹吸时产生气泡。每次需做 阳性血 清、 阴性血清和抗原三种对 照 ， 在结果判定时 ， 要先 检查 对 照管 ，只有 对 照管 均正 确 时才 能检 查 判 定试
病学 调查 。
３虎红平板凝集试 验
在清洁的玻片上加 ０ ． ０ ３ 毫升 的被检血清 ，然后 再加入虎红平板凝集抗原 ０ ． ０ ３ 毫升 ， 充分混合均匀 ， ４ 分钟 内观察结果 。以出现可见的凝集现象判定阳 性， 无凝集现象为阴性 ， 无可疑反应。
每份血清用 ４ 支试管 （ １ × ８ 厘米 ） ， 另取对照管 ３ 支 。如待检血清多时 ， 只设一份对照组 。用 ０ ． ５ ％ 石 炭酸生理盐水 ， 将被检血清稀释成四个稀释度。第五 管中不加血清 ， 设抗原对照。第六管中加 １： ２ ５ 稀释 的布鲁 氏杆菌阳性血清 ０ ． ５ 毫升作阳性对照。 第七管 中加 ｌ： ２ ５ 稀释 的布鲁氏杆菌阴性血清 ０ ． ５毫升作 阴性对照 。各管 中加入户 ０ ． ５ ％石 炭酸生 理盐 水稀 释 ２ Ｏ 倍 的布鲁 氏杆菌抗虞 ０ ． ５ 毫升 （ 每 毫升含菌 ８ 亿） 。
菌体 １ ０ ０ ％ 被凝集。“ ＋ ＋ ＋ ”， 液体稍有混浊 ， 菌体大部 分被凝集 沉于管底 ， 振荡时情况同上 ， 表示菌体 ７ ５ ％ 被凝集。 “ ＋ ＋ ”， 液体不甚透明 ， 呈淡乳 白色混浊 ， 管 底有明显的凝集沉淀 ， 振荡时有块状或小片絮状物 ，
表示’ 菌体 ５ ０ ％ 被凝集。“ ＋ ”， 液体透明度不 明显或不 透明 ， 管底有不甚显著的沉淀或仅有沉淀的痕迹 ， 表 示菌体 ２ ５ ％被凝集 。“ 一 ”， 液体完全混浊 ， 不透明， 有
检 疫 检 验
布 鲁 氏 杆 菌 病 的 检 验 方 法
赵 玉 康 罗鹏 飞 （ 新疆阿勒泰地区动物疾病控制与诊断 中心 ８ ３ ６ ５ ０ ０ ）
布鲁 氏杆菌是革兰氏阴性细胞 内寄生菌 ，容易 引起动物和人类 的慢性感染或急性感染 ，被感染 的
各试管加完抗原后 ， 充分振荡 ， 置于 ３ ７ ￣ （ ２ 温箱 中 ４ － １ ０ 小时， 取出置于室温 １ ８ ～ ２ ４ 小时 ， 然后观察并记 录结果 。 待检血清稀释度 ， 猪、 羊、 犬为 １ ： ２ ５ 、 １ ： ５ ０ 、 １： １ ０ ０和 １： ２ ０ ０ ，牛 、马和 骆驼 为 １： ５ ０ 、 １： １ ０ ０ 、
动物会表现出不孕不育或流产等症状 ， 危害很大。布 鲁 氏杆菌病一年 四季都有可能发生 ，其发病率 因各
个地 区的饲养条件和繁殖 习惯 以及经济条件 、气候 条件 、 自 然条件的不同而不 同。所以对其进行及时并 准确的检验非常重要。现将检验方法和操作步骤介
绍 如下 。
１平板凝集试验
验管 。
养殖技术顾 问 ２ ０ １ ４ ． ２
时管底中央有一部分 圆点状沉淀物 ，但振荡后立即
将抗原与血清充分混匀 ，每混匀一格需更换一根牙 签。于室温 （ １ ５ ￣ Ｃ 以上 ） 静置 ４ 分钟观察结果 ， 如室 温过低 ， 可适 当加温。在对照标准 阳性血清 （ ＋ ） 、 标
准 阴性血清 （ 一） 、 生理盐水 （ 一 ） 反应正常的前提下 ， 被检血清出现大 的凝集片或小的颗粒状物 、液体透 明判为阳性 （ ＋） ， 液体均匀混浊 ， 无任何凝集物判为
试验 目的是利用本试验对大量样本进行初步筛 选。筛选出的阳性反应血清 ， 再做试管凝集试验 ， 以
液体完全透明 ， 菌体完全被凝集呈伞状沉 于管底 ， 振荡时 ， 沉淀物呈片状、 块状或颗粒状 ， 表示
＋ ＋＋ ＋ ”
，
。
“
试管凝集的结果作为被检血清的最终结果。
取一长方形洁净玻璃板 ，用玻璃铅笔划成若干 方格 ， 每格约 ４ 平方厘米 ， 编号。分别吸取 ２ ５ 微升被 检血清 、 生理盐水 、 标 准阳性血清 、 标准 阴性血清加 于不同编号 的方格内， 每吸一种成分需换一个吸头 。 吸取 ２ ５ 微升抗原加到玻璃板的每一个格 内， 用牙签
阴性 （ 一） 。 Fra bibliotek散开呈均匀混浊 ， 表示菌体完全不凝集。确定血清凝 集价 （ 滴度 ） 时， 应 以出 现 “ ＋ ＋ ”以上 凝 集 现象 的最
高稀释度为准。 判定标准。牛、 马和骆驼凝集价为 １ ： １ ０ ０ 以上 ， 猪、 羊和犬的凝集价为 １： ５ ０ 均判为阳性。牛 、 马和 骆驼凝集价为 １： ５ ０ ， 猪、 羊和犬凝集价为 １： ２ ５ 均