培养基的配制
培养基的配制
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基：乳糖＝5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数，使分装装量为1.0g，分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下，把准备好的无菌培养基用无菌注射器（规格为5ml）分装到各管制瓶中，每瓶分装5ml，然后加塞，轧盖。
8.2.3阴性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养，作为阴性对照。
8.2.4阳性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支分装有培养基的管制瓶，其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液，另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液，作为阳性对照。
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基：乳糖＝5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数，使分装装量为1.0g，分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下，把准备好的无菌培养基用无菌注射器（规格为5ml）分装到各管制瓶中，每瓶分装5ml，然后加塞，轧盖。
8.2.3阴性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养，作为阴性对照。
8.2.4阳性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支分装有培养基的管制瓶，其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液，另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液，作为阳性对照。
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基配方
1. LB培养基：10 g/L胰蛋白胨(进口)，5 g/L酵母提取物(进口)，10 g/L NaCl。
若配制固体培养基，加入15 g琼脂粉；
2. YPD培养基：22 g/L的一水合葡萄糖，20 g/L胰蛋白胨(进口)，10 g/L酵母提取物(进口)。
若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
3. SC-Ura培养基：22 g/L含一水合葡萄糖，6.7 g/L YNB（无氨基酸酵母氮源），1.224g/L 氨基酸粉末（除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的），配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。
4. YPX 培养基：蛋白胨，20 g/L；酵母粉，10 g/L；木糖，20 g/L或50 g/L。
5. YPD+G418：G418：1ml/L
Leu（亮氨酸）0.38 g/L，
Ura（尿嘧啶）0.076 g/L，
100xHis（组氨酸）7.6g/L，加入10mL/L
100xTrp（色氨酸）7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde（鸟嘌呤）7.6g/L 加入10mL/L
100xLys（赖氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
100xMet（甲硫氨酸、蛋氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。
若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
全部氨基酸：。
培养基配方
1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）：马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 µ g/ml，用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）：牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50µg/ml，用于抑制真菌生长。
115℃，20min 灭菌。
3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0；5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 µM，FeCl3 50 µM，ZnCl2 1 µM，VB1 2 µM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 µg/mL，苯丙氨酸50 µg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g，8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。
第三节培养基的配制
n
三、母液的配制和保存
经常使用的培养基，可先将各种药品配成 浓缩一定倍数的母液，放入冰箱内保存， 用时再按比例稀释。母液要根据药剂的化 学性质分别配制。一般配成大量元素、微 量元素、铁盐、维生素、氨基酸等母液， 其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也 可以混在一起。配制成的母液，放入冰箱 内保存。
1.大量元素 原则上可以混在一起，但硫酸镁 （MgSO42H2O）和氯化钙（CaCl22H2O） 要 分别单独配制，因为高浓度的Ca2+和Mg2+ 与 磷酸盐混合，会产生不溶性沉淀。Ca2+和 PO43-一起混合易发生沉淀。但定容后，沉 淀即会消失。
5.植物生长调节物质 也可以分别配制成 溶液，储存于冰箱。一般浓度为0.5-1 mg/ml。 IAA、NAA、IBA、2,4-D之类生长 素，可先用少量0.1N氢氧化钠或乙醇溶解， 然后再定容到所需要的体积。KT、BA等细 胞分裂素则可用少量0.1N盐酸加热溶解， 然后加水定容。
四、培养基的配制及其灭菌
第三节
培养基的配制
包括水和药品的准备、器皿和用具的准备、母 液的配制和保存等。 一、水和药品的准备 配制培养基用的水最好用纯水，一般用蒸馏水 即可，但精细的试验须用重蒸馏水。化学药品 须用分析纯或化学纯，称量要准确，每称一种 药品都必须准确记载，以便事后查对。
n n n
二、器皿和用具的准备 种类：不同型号的烧杯、容量瓶、移液管、滴管、
4.金属器械的灭菌
金属器械一般用火焰灭菌法，即把金属器械放在 95%的酒精中浸一下，然后放在火焰上燃烧灭菌。 这一步骤应当在无菌操作过程中反复进行。金属 器械也可以用干热灭菌法灭菌，即将拭净或烘干 的金属器械用纸包好，盛在金属盒内，放在烘箱 中灭菌。
培养基的配制
培养基的配制培养基是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
1. 成分配方转换—在容器中加入少量水(蒸馏水、天然水)—按配方称各种药物(依次添加)—加入足够的水(一药一勺，服完药后立即盖上瓶子)。
2. 解散淀粉溶解:少量的冷水进粘贴琼脂融化温度为95-97℃，加热时需搅拌以防烧焦。
3.调整pH值用1n盐酸或1n氢氧化钠将培养基调至所需值。
4. 过滤滤纸或棉。
(有时可以省略)5. 分装一般在烧瓶或试管中灭菌。
(1)三角瓶静态培养时，100ml培养基/ 250ml烧瓶的最大值不应超过150ml 培养基/ 250ml否则，在灭菌过程中，培养基的煮沸极易污染棉塞，造成细菌污染;如果进行瓶培养，15-20ml培养基/ 250ml三角瓶应通风良好。
(2)试管包装液体培养基通常填充4-5ml，约为试管高度的1 / 4;一般固体斜培养基为3-4ml，约为试管高度的1 / 5。
6. 用绷带包扎包装完毕后，塞好棉塞，用牛皮纸包好棉塞，防止灭菌时湿气进入，弄湿棉塞。
7. 灭菌高压蒸汽灭菌按照配方中要求的温度和压力进行。
如果灭菌温度过高，营养成分就会被破坏培养基中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8. 斜灭菌后，需要倾斜的试管应在加热过程中倾斜放置，使其固化成一个斜坡，约占试管长度的1 / 2。
9. 存储中可以使用不污染被放置在30℃后一天。
通常用牛皮纸包好，置于2-8℃冰箱中保存。
培养基配方及配置
培养基配方及配置
一般来说，培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分，包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分，如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分，如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置：
1.基础培养基成分：
- 水：900ml
-蛋白胨：10g
-酵母提取物：5g
-NaCl：5g
2.添加剂：（可根据实验需求进行必要的添加）
- 抗生素（如氨苄青霉素）：100μg/ml
- 抗菌剂（如氯霉素）：25μg/ml
3.配制方法：
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中，并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中，加水至1000ml，并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2（一般使用缓冲液进行调节）。
-用自制滤纸过滤器滤过，将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂，将相应的药物加入培养基中，并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌，或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程，不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时，需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度，并注意配制和保管过程中的无菌操作，以确保培养基的质量和有效性。
常用培养基配制方法
常用培养基配制方法：（1）基础盐培养基（MSM）：(NH4)2SO42.0g，MgSO4·7H2O0.2g，CaCl2·2H2O 0.01g，FeSO4·7H2O0.001g，Na2HPO4·12H2O1.5g，KH2PO41.5g，蒸馏水1000 mL。
（2）LB培养基：蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，蒸馏水1000 mL，pH7.5。
（3）高氏合成1号培养基：硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，硫酸亚铁0.01g，可溶性淀粉20g，蒸馏水1000mL。
（4）查彼氏培养基：硝酸钠2g，氯化钾0.5g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g，硫酸亚铁0.01g，蔗糖30g，蛋白胨0.5g，蒸馏水1000mL。
（5）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20 g，蒸馏水1000mL。
将无病马铃薯洗净去皮切碎，加蒸馏水1000mL，煮沸0.5 h，纱布过滤，滤液加蒸馏水补足1000mL，再加入葡萄糖，然后分装三角瓶灭菌备用。
（6）铵察氏琼脂培养基：氯化铵2g，氯化钾0.5g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g，硫酸亚铁0.01g，蔗糖30g，蛋白胨0.5g，琼脂20g，蒸馏水1000 mL。
（7）克氏合成1号琼脂培养基：磷酸氢二钾1g，碳酸镁0.3g，氯化钠0.2 g，硝酸钾1g，硫酸亚铁0.01g，碳酸钙0.5g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
（8）葡萄糖天门冬素琼脂培养基：葡萄糖10g，天门冬素0.5g，磷酸氢二钾0.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
（9）葡萄糖酵母膏琼脂培养基：葡萄糖10g，酵母膏10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
（10）瓦氏肉汁琼脂培养基：蛋白胨5g，葡萄糖10g，牛肉膏10g，氯化钠5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
（11）淀粉琼脂培养基：可溶性淀粉10g，碳酸镁1g，磷酸氢二钾0.3g，氯化钠0.5g，硝酸钠1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质，能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件，因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方：-蛋白胨或复合氮源：10g-酵母浸出物：5g-葡萄糖：1g-NaCl：5g-K2HPO4：2g-MgSO4：0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方：-牛心提取物：3g-高级琼脂糖：15g-葡萄糖：10g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方：-玉米浸出物：4g-高级琼脂糖：15g-酵母浸出物：1g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方：-液体LB培养基：10mL-高级琼脂糖：15g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方：-羊血：50mL-肉浸出物：3g-酵母浸出物：3g-肉汤培养基：1L-红细胞素：5g-高级琼脂糖：3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方：-肉浸出物：5g-酵母浸出物：5g-NaCl：5g-蒸馏水：900mL- 加入0.1%的L-cysteine：10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项：-培养基中的成分应严格按照配方比例加入，并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感，需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整，一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中，避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方，不同的微生物有不同的需求，可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中，还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法：1. LB培养基（Luria-Bertani）LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基，其配方包括：- 1% 蛋白胨（tryptone）: 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉（yeast extract）: 提供维生素和生长因子-1%NaCl（氯化钠）:调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法：将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基（Yeast extract-Peptone-Dextrose）YPD培养基常用于酵母菌的培养，其配方包括：- 1% 酵母提取物（yeast extract）: 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨（peptone）: 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖（dextrose）: 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法：将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基，其配方包括：-10%胎牛血清（FBS）:提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液（Penicillin-Streptomycin Solution）: 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺（L-Glutamine）: 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水：使混合液体稀释至所需体积配制方法：将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中，调整pH值至7.4，混合均匀即可。
培养基配方
培养基配方一、LB培养基：Yeast extract 5 g/LTryptone 10g/LNacl 10g/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
二、YEB培养基:Yeast extract1 g/LPeptone(或Tryptone) 5 g/LBeef extract 5 g/LSucrose 5 g/LMgSO4 2 mmol/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
三、N6D2培养基(2,4D浓度2mg/L)：① N6大量母液1：20×大量元素(1L)50ml KNO356.6g(NH4)2SO49.26gKH2PO48g②N6大量母液2：40×大量元素(500ml) 25ml2·2H2O 3.32g③N6大量母液3：40×大量元素(500ml) 25ml MgSO4?7H2O 3.7g④B5微量元素I：100×微量元素（1L） 10ml溶液A：MnSO4?H2O 781mgZnSO4?7H2O 200mg溶于400ml无菌水溶液B：H 3BO3300mgKI 75mg溶于400ml无菌水然后缓慢将溶液A和溶液B混合，定容至1L⑤B5微量元素II：1000×微量元素（500ml） 1ml Na2MoO42O 125mgCuSO4·5H2O 12.5mgCoCl2·6H2O 12.5mg⑥B5维生素I：100×维生素（500ml） 10ml盐酸硫胺素 500mg盐酸吡哆醇 50mg烟酸 50mg⑦B5维生素II：100×维生素（500ml）10ml甘氨酸 100mg⑧200×铁盐(500ml) 5mlNa2-EDTA 3730mgFeSO4·7H2O 2780mg⑨ 2,4 D：100×2,4 D10ml200mg 2,4 D，先溶于1ml 无水乙醇中，再定容到1L。
常用培养基的配制
常用培养基的配制常用培养基的配制〔一〕营养琼脂培养基【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基根底之用。
【成分】牛肉膏 3gNaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g±0.2℃ 30min高压灭菌备用。
〔二〕蛋白胨水培养基【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。
【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g℃ 20min高压灭菌备用。
〔三〕半固体培养基【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。
【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g【pH值】7.6℃ 20min高压灭菌备用。
〔四〕营养肉汤培养基【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。
【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g牛肉粉〔牛肉浸汁〕 3g±℃ 20min 高压灭菌备用。
〔五〕葡萄糖蛋白胨水培养基【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。
【成分】蛋白胨 5g葡萄糖 5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g)【pH值】7.0～7.2【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装试管，每管2～3ml，经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。
〔六〕伊红美蓝培养基〔EMB培养基〕【用途】弱选择性培养基,用于别离肠道致病菌,特别是大肠杆菌。
【成分】蛋白胨 10g乳糖 10g 伊红 0.4g美兰 0.065g 琼脂 14g K2HPO4 2g±0.4℃ 15min高压灭菌，待冷却至60℃左右倾注灭菌平皿备用。
〔七〕S-S琼脂培养基【用途】供沙门氏菌、志贺氏菌的选择性别离培养之用。
【成分】蛋白胨 5g 乳糖 10g 牛肉粉 5g三号胆盐 3.5g 琼脂 17g 柠檬酸钠 8.5g 柠檬酸铁 1g 硫代硫酸钠 8.5g 中性红 0.025g 煌绿 0.00033g±0.1【制法】上述成分称取60g加蒸馏水1000ml，加热煮沸至完全溶解，待冷却至60℃左右倾注灭菌平皿备用。
培养基的配制
一、用品的准备：
1、无菌物品：盐水瓶数个（能装1000ml液体），盐水胶塞数个，1000ml 超滤器。 2、培养基专用量筒1000ml 1个，三角烧瓶1个，手动压力表1个。 3、超纯水或三蒸水1L。 4、培养基1包/L，青霉素及链霉素各10万单位/L，HEPES、碳酸氢钠。
二、注意事项：
1、配制培养基前应紫外灯照射培养室及超净工作台30分钟。 2、抽负压时压力表不能超过-15KPa。 3、使用此批次培养基前，应吸取少量培养基放进培养箱进行培养，确定无 细菌生长后方可使用。 4、短时间内不）
• 氯化钠：8克；氯化钾：0.2克； • • • • Na2HPO4·12H2O:3.489克；KHPO:0.2克。 加入蒸馏水，定溶到1000ml。 调pH7.2～7.4。 分装、高压消毒。
培养基的配制
培养基是指通过组合用于微生物，植物或动物（或组织）的生长和繁殖的不同营养物而制备的营养物培养基。
通常，它包含碳水化合物，含氮物质，无机盐（包括微量元素），维生素和水。
培养基不仅是提供细胞营养和促进细胞增殖的基本物质，而且还是细胞生长和繁殖的生存环境。
培养基配制1.成分配方转换→向容器中添加少量水（蒸馏水，天然水）→根据配方称量各种药物（依次添加）→添加足够的水（每种药物一个勺子，盖上瓶盖服药后立即服用）。
2.解散淀粉溶解：将少量冷水混合成糊状必须煮沸加热溶解，特别是与琼脂混合的介质，琼脂的熔化温度为95-97℃，并且需要加热和搅拌以防止燃烧。
3.调整PH用1N盐酸或1N NaOH将培养基调节至所需值。
4.筛选用滤纸或棉布过滤。
（有时可以省略）5.分包装普通培养基在三角瓶或试管中灭菌。
（1）三角瓶如果是静态培养，则100ml培养基/ 250ml三角瓶的最大含量不应超过150ml培养基/ 250ml。
三角形的瓶子，否则，灭菌过程中培养基的沸腾将很容易污染卫生棉条并引起细菌污染。
如果使用摇瓶培养，则应使用15-20ml培养基/ 250ml三角瓶以确保良好的通风。
（2）试管被分装液体培养基通常填充4-5ml，约1/4试管高度；固体倾斜培养基通常填充3-4ml，大约是试管高度的1/5。
6.绷带包装后，塞上棉塞，并用牛皮纸包裹棉塞，以防止灭菌过程中水分进入并弄湿棉塞。
7.杀菌根据公式所需的温度和压力进行高压蒸汽灭菌。
如果灭菌温度过高，营养物质将被破坏和培养碱中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8.摆坡灭菌后，需要倾斜的试管应趁热时倾斜放置，以使其固化成倾斜的表面，约占试管长度的1/2。
9.储存将培养基置于30℃下一天后即可使用而无污染。
通常用牛皮纸包装，并保存在2-8℃的冰箱中以备后用。
146种常见培养基的配方
146种常见培养基的配方培养基是微生物学实验中常用的一种重要实验工具，通过调配合适的培养基，可以提供微生物生长所需的营养物质，从而促进微生物菌落的繁殖和生长。
下面将介绍一些常见的培养基配方，涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
1.琼脂肉汤培养基（NB）-牛肉脱脂粉5g-酵母提取物2.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml2.大肠杆菌复合培养基（LB）-液体培养基-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g- 蒸馏水 1000ml-琼脂板-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml3. 肠杆菌选择性琼脂培养基（MacConkey琼脂培养基）-蛋白胨17g-紫胆汁盐1.5g-普鲁士蓝盐1.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml4. 脱氧胆盐琼脂培养基（Deoxycholate Agar）-脱氧胆酸钠20g-普鲁士蓝盐0.8g-蛋白胨7.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml5.阿米巴选择性琼脂培养基（KV培养基）- 鸡蛋清 20ml- 中性红溶液 12ml-NaCl0.5g-纤维素0.25g- 盐酸 1ml-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml6. 革兰氏阳性菌选择性琼脂培养基（Mannitol Salt Agar）-蔗糖10g-氯化钠75g-酵母提取物5g-麦芽提取物1g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml7. 维生素富集琼脂培养基（Burkholder's Basal Salt Medium）-NaNO31g-KCl0.5g-MgSO4·7H2O0.2g-CaCl2·2H2O0.02g-FeSO4·7H2O0.01g-琼脂14g- 蒸馏水 1000ml8. 三氯化铁琼脂培养基（Cetrimide Agar）-硫酸镁0.8g-氯化钴0.05g-氯化锌0.01g-氯化亚铁0.03g-三氯化铁0.03g-比色琼脂糖15g- 过滤蒸馏水 1000ml9. 库氏四甲基铵琼脂培养基（Chapman Agar）-高氯酸钠5g-脲7.5g-酵母提取物2g-海藻酸钠20g-紫胆汁盐0.25g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml10. 还原格兰氏琼脂培养基（Reduced Gram-negative Broth）-蛋氨酸0.5g-异亮氨酸0.5g-半胱氨酸0.5g-菜碱0.5g-胀氨酸0.5g-琼脂7g- 蒸馏水 1000ml这些是其中的一部分常见的培养基配方，涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
培养基的配制
一. 细胞培养所需基本器皿、试剂等1.玻璃器皿培养瓶、培养皿、称量瓶、小烧杯、青霉素瓶、盐水瓶（100、250、500）毫升、吸管刻度离心管2.试剂Hanks液. D-Hanks液. 培养基小牛血清、胎牛血清、胰蛋白酶（0.125%、0.25%）、7.5%碳酸氢钠10%醋酸、青霉素、链霉素3.器械.眼科剪（直头、弯头）、眼科镊（直头、弯头）、中号剪刀、中号镊子、金属滤网、小毛笔4.其他Zeiss滤器滤膜微量加样器、枪头、滤纸、饭盒吸管筒酒精棉球75%酒精新洁尔灭‰三蒸水双蒸水血球记数板盖片(20×20、24×24) 载玻片PBS二.试剂配方1.Hanks液称量NaCl 8.0gKCl 0.4gMgSO • 7H2O 0.2gCaCl2 0.14gNa2HPO4 •1 2H2O 0.06gKH2PO4 0.06gGlukose 1.0gAqua dest 1000.0ml先将（1）CaCl2溶解在100ml三蒸水中，（2）其他成分于750ml三蒸水中（应待前一种试剂完全溶解后，再溶解下一种试剂）；.再将（1）缓慢倒入（2）中，并边加边搅动。
最后补足水到1000ml。
分装盐水瓶中，8磅10分钟高压蒸汽灭菌。
冷却后用75%碳酸氢钠调整pH7.2-7.4,4℃保存。
2．D-Hanks液只需从Hanks液配法中去掉MgSO4 CaCl2的量，其他步骤同上。
2.不完全培养基先将1000ml粉剂培养基完全溶解于少许水中，然后加水至1000ml。
抽滤消毒并分装于250ml 盐水瓶中，4℃或低温保存。
（注如果粉剂培养基没有碳酸氢钠则需按要求加上）25%胰蛋白酶（多用于传代）胰蛋白酶0.25gD—Hanks100ml先称取0.25克胰蛋白酶，用少许.D—Hanks液溶解，然后补足D—Hanks到100ml。
PH7.2~7.4，抽滤消毒。
分装于青霉素小瓶，低温保存。
4.0.125%胰蛋白酶（本实验室多用于原代）胰蛋白酶0.125gD—Hanks100ml配制方法同上。
培养基的配制
培养基的配制一、原理大多数微生物均可用人工方法培养。
以人工方法配制成的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，称为培养基，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外, 培养基还应具有适宜的ph值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
二、培养基的种类培养基按物理状态分为固体、半固体和液体培养基；按组成成分分为天然、合成和半合成培养基；按其作用分为基础、加富、选择、鉴别、厌氧和活体培养基等。
1、基础培养基：含有微生物所需要的基本营养成分，如肉汤培养基。
2、加富培养基：在基础培养基中再加入葡萄糖。
血液、血清或酵母浸膏等物质，可供营养要求较高的微生物生长，如血平板、血清肉汤等。
3、选择培养基：是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对—些物理。
化学条件的抗性而设计的培养基。
利用这种培养基可以把所需要的微生物从混杂的其他微生物中分离出来。
4、鉴别培养基：在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后发生某种化学变化从而鉴别不同类型的微生物。
如伊红■美蓝;EMB ）培养基、糖发酵管、醋酸铅培养基等。
5、厌氧培养基：专性厌氧菌不能在有氧的条件下生长，所以必须将培养基与环境中的空气隔绝，或降低培养基中的氧化还原电位，如在液体培养基的表面加盖凡士林或醋，或在液体培养基中加入碎肉快制成庖肉培养基等。
此外，也可以利用物理或化学的方法除去培养环境中的氧，以保证厌氧环境。
&活体培养基：有一些微生物可以在活的动植物体或离体的活组织细胞内生长繁殖，因此，某些活的动植物体或离体的活组织细胞对这些微生物来说，是很好的培养基。
三、培养基的主要成分1、营养物质：有蛋白月东、肉浸汁和牛肉膏、糖（醇）类、血液、鸡蛋与动物血清、生长因子、无机盐类。
2、水分:制备培养基常用蒸馆水（因蒸催水中不含杂质）,也可用自来水、井水等，但需先经煮沸，使部分盐类沉淀，再经过滤方可使用。
3、凝固物质：配制固体培养基的凝固物质有琼脂、明胶和卵白蛋白及血清等。
培养基的配制
培养基配制一、配制用水培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。
按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。
二、培养基培养基有天然、人工两种。
一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。
NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。
RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。
三、血清培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。
血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。
配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。
由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。
四、抗菌素为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。
五、植物血凝素（PHA）非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。
经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。
PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。
粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。
PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。
制备基本方法培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。
因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。
培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源．和各种成份的牌号。
最终pH值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。
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实验一培养基的配制
实验目的
1.明确培养基的配制原理。
2.掌握配制培养基的一般方法和步骤。
实验内容
学习细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物培养基的配制。
实验原理
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。
培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用高氏 I 号培养基，培养霉菌常用蔡氏培养基或马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基或马铃薯葡萄糖培养基。
另外还有固体、液体、加富、选择、鉴别等培养基之分。
在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。
琼脂只是固体培养基的支持物，一般不为微生物所利用。
它在96 C
以上熔化成液体，而在 45 C左右开始凝固成固体。
在配制培养基时，根据各类微生物的特点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。
培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。
霉菌和酵母菌的pH 偏酸；细菌、放线菌的 pH 为微碱性。
所以每次配制培养基时，都要将培养基的 pH 值调到一定的范围。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏 3.0 g
蛋白胨10.0g
NaCl 5.0g
水1000mL
pH
高氏
7.4~7.6
I 号培养基配方
可溶性淀粉 20g
NaCl 0.5g
KNO 3 1g
K 2HPO 4 • 3H2O0.5g MgS04 7H20 0.5g FeS04 • 7H20 0.01g 琼脂15—25g
水1000mL
pH 7.4~7.6
马铃薯培养基配方
马铃薯(去皮) 葡萄糖(或蔗糖) 琼脂水
自然 pH
200g 20g 15~25g 1000ml
察氏培养基配方
蔗糖30g
NaNO3 2g
K2HPO4 1g
KCl 0.5g
MgS04 7H2O FeS04 7H2O 0.5g 0.01g
琼脂15~25g
蒸馏水自然 pH
1000ml
实验器材
牛肉膏，蛋白胨， NaCl ，琼脂，1mol/LNaOH, 1mol/LHCI , KNO 3, K2HPO4• 3H2O,
MgS04 • 7H2O, FeS04 • 7出0,马铃薯，蔗糖等。
试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙， pH 试纸 (pH
5.5~9.0) ，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
实验步骤
1．牛肉膏蛋白胨培养基配制方法
(1) 称量：按培养基配方比例依次推确地称取牛肉膏、蛋白胨、 NaCL 放人烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，也可按在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。
瓶盖也不要盖错。
(2) 溶化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入己溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。
在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。
同时．需不断搅拌．以防琼脂糊底烧焦。
配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影晌细菌生长。
⑶调pH
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始 pH ,如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入
1mol/LNaOH,边加边搅拌，并随时用 pH试纸测其pH，直至pH达7.6。
反之，用 mol/LHCL进行调节。
对于有些要求pH较精确的微生物，其 pH的调节可用酸度计进行。
pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。
配制pH低的琼脂培养基
时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。
因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整PH。
（4）过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察。
一般无特殊要求的情况下可以省去（本实验勿需过滤）。
（5）分装
按实验要求，可将配制的培养基分装人试管内或三角烧瓶内。
1）液体分装：分装高度以试管高度的I/4左右为宜。
分装三角瓶的量则根据需要而定，一
般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准
确。
2）固体分装：分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。
分装三角烧瓶的量以
不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
3）半固体分装：试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
图1-1培养基的分装
A漏斗分装装置；B自动分装装置
1铁架；2漏斗；3孔胶管；4弹簧夹；5玻璃；6流速调节；7装量调节；8开关分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。
（6）加塞
图1-2棉塞的制作
培养基分装完毕后，在试管口或三角烷瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞及试管帽等)，棉塞的作用有二：一方面阻止外界微生物进入培养基，防止由此而引起的污染；另一方面保
证有良好的通气性能，使培养在里面的微生物能够从外界源源不断地获得新鲜无菌空气。
因此棉塞质量的好坏对实验的结果有着很大的影响。
一只好的棉塞，外形应象一只蘑菇，大小、
松紧都应适当。
加塞时的棉塞的总长度的3/5应在口内，2/5在口外。
⑺包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿
棉塞，其外再用一道麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、
组别、配制日期。
(8)灭菌
将上述培养基以 0.103MPa , 121 C, 20min高压蒸气灭菌。
(9)搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50 C左右〔以防斜面上冷凝水太多〕，将试管口端捆在玻棒
或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
(10)无菌捡查
将灭菌培养基放人 37C的温室中培养 24—48h，以检查灭菌是否彻底。
2.高氏I号培养基配制方法
(1)称量和溶化
按配方先称取可溶性淀粉、放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于
所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。
然后再称取其他各成分依次逐一溶
化。
对微量成分 FeS04 • 7H2O可先配成高浓度的贮备液按比例换算后再加入，方法是先在 100mL水中加入1g的FeS04 • 7出0配成0.01g/ml，再在1000mL培养基中加1mL的0.01 g/ m1的贮备液即可。
待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如要配制固体培养基，其溶化过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制方法。
(2)pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基配制方法。
3.马铃薯培养基配制方法
取去皮马铃薯200g,切成小块，放入1500mL的烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底。
然后用双层纱布过滤，取滤液加糖（酵母菌用葡萄糖，霉菌用蔗糖），加热煮沸后加入琼脂，继续加热融化并补足失水。
再按前所述，进行分装、加塞、包扎、 0.1MPa 灭菌 20 min 。
4．察氏培养基配制方法方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。
实验结果及讨论针对实验原理、步骤、现象进行讨论。
实验作业（选做 3 题） 1．牛肉膏应置于何种容器中称量为宜 ?
2．配制高氏合成一号培养基时，可溶性淀粉需经什么处理后才能倒入到沸水中?
3．何谓培养基的自然 pH? 4．培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的
5．在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么 ?
6．配制合成培养基加入微量元素时最好用什么方法加入?天然培养基为什么不需要另加微量7．有人认为自然环境中微生物是生长在不按比例的基质中，为什么在配制培养基时要注意各种营养成分的比例 ?
8．你配制的高氏 I 号培养基有沉淀产生吗 ?说明产生或未产生的原因。
9．细菌能在高氏 I 号培养基上生长吗 ?为了分离放线菌，你认为应该采取什么措施。