体外抗药肿瘤细胞模型的建立
肿瘤微环境的建立及其在肿瘤研究中的应用
肿瘤微环境的建立及其在肿瘤研究中的应用随着医学研究的不断深入，人们对于肿瘤的认识也在不断加深。
在过去，我们可能只是简单地将肿瘤看作是一种细胞异常增生的结果，但是现在的科学家们却发现，肿瘤是一个很复杂的系统，除了肿瘤细胞本身，还会受到周围环境的影响，这个环境就是肿瘤微环境。
肿瘤微环境是指包括肿瘤细胞、内皮细胞、成纤维细胞、免疫细胞、基质细胞和血管在内的一个复杂的体系。
这些细胞之间相互作用，共同建立起一个支持肿瘤生长和发展的微环境，成为影响肿瘤发展的一个重要因素。
如何建立肿瘤微环境模型？为了更深入地研究肿瘤细胞在微环境中的生长、恶化、转移和治疗等方面的问题，科学家们需要建立与真实情况相近的肿瘤微环境模型。
传统的肿瘤研究中，常常使用动物模型或者体外培养的方式，但是这些方法都存在不够真实和实用的问题。
因此，近年来出现了越来越多的3D肿瘤模型，这些模型更能够模拟真实的微环境，以及诸如化疗、靶向治疗等方法在微环境中的表现。
目前的3D肿瘤微环境模型常采用各种不同的方法。
例如，在医学研究领域常用的微型流控技术可以用来构建毛细血管结构，并提供肿瘤细胞的营养和氧气供应；3D打印技术可以制造出具有不同特征的微环境，诸如不同的细胞类型、不同的基质软硬度等等；生物喷墨技术可以均匀地将肿瘤细胞密集地分布在基质上，并呈现出肿瘤细胞在原位生长的情况。
肿瘤微环境在肿瘤研究中的应用肿瘤微环境的建立不仅可以更深入地研究肿瘤的发展、治疗和预后等，还可以有效地筛选出更高效、更具体的药物。
药物在微环境中的作用往往可以与其在传统体外培养中的作用有所不同，这意味着在肿瘤治疗中，我们需要考虑微环境对于药物反应的影响。
以前，传统的肿瘤研究也曾发现某些药物在微环境中的反应不同于传统体外培养中的反应。
例如，孟买市场上出售的甲氨蝶呤，是一种常用的抗肿瘤药物。
然而，当这种药物在体内时，很可能出现药物代谢过慢的现象，难以达到预期的治疗效果。
通过建立包括肿瘤细胞、血管、成纤维细胞等组成的真实微环境模型，科学家们可以更全面地了解药物在微环境中对于肿瘤的疗效和对于环境的影响。
肿瘤多药耐药模型建立方法的应用进展
高了诱导成功率 ，但此法建立 耐药株周 期长 ，细 物敏 感 性 显 著 降低 的现 象 ，细 胞 中 Ｐ．ｇＰ、ｍｒｐ２ ｍＲ—
胞 的耐 药性 与 培养 时 间呈 正相关 。
’
ＮＡ及 Ｐ．ｇＰ蛋 白表 达增 高 ，成 功 构 建 了具 有 耐 药 表
１．３ 高浓度反复间歇诱 导与药物浓度递增相结合 法 是将高浓度反复间歇诱导法与药物浓度递增法 相结合 的诱 导方法。高爱丽 首先采用逐步加大
为小 鼠和大 鼠，近些 年斑 马鱼因其个体小 、胚胎 透 明、实验周期短，基 因与人类极其相似也广泛用于人 类疾 病模 型 的建 立 ［１ 。胡 荣 英 等 ［驯 利用 长 春 新 碱 暴露 处理 受精 后 的 斑 马鱼 ，结 果 显示 长 春 新 碱 能 增 加班 马鱼 肿瘤 耐 药 基 因 ａｂｃｂ４的 表 达 ，该 模 型 建 立 提示 复制 肿 瘤 ＭＤＲ模 型可 利用 斑 马鱼进 行实 验 。 ２．１ 移植 型肿瘤 ＭＤＲ动 物模 型 为直 接将 耐药 细 胞株或 肿瘤组织 接种到 动物 体 内的方 法 。井 欢等 Ｉ－ 在体外 培养肺腺 癌 耐药 细胞 Ａ５４９／ＤＤＰ，取对 数 生长 期细胞消化制备成悬浮液 ，将其注射手健康 ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠腋下 ，５ ｈ后观察到腋下有米粒突起 ，建模成功 ，
山东 医药 ２０１８年第 ５８卷 第 ７期
· 综 述 ·
肿 瘤 多药 耐 药 模 型 建 立 方 法 的应 用 进 展
汤 婷婷 ，刘华钢 ，梁 燕 ，范 玉琴 。吴余 燕 （１广西中医药大学药学院，南宁 ５３０２９９；２广西医科 大学药学院）
摘要 ：肿瘤 多药耐药 （ＭＤＲ）模型的建立是肿瘤耐药机制 和耐药逆转方法 研究 的前提 。肿 瘤 ＭＤＲ模 型分为体 外和体 内模型 。 目前 ，肿瘤 ＭＤＲ体外模型建立方法主要有 高浓度反 复间歇诱 导法 、药 物浓度 递增诱 导法 、高浓度 反复 间歇诱导 与药物浓度递增相结合法 、转基 因结合药物筛 选法 和三维 细胞培养 法 ，其 中三维细 胞培养 法建立 的 ＭＤＲ模型生物学活性与在体肿瘤更接近且能模拟体 内微环境 ，弥￥ｂＴ其他方法的不足 ，但培养系统较复杂 、实验周 期长 。肿瘤 ＭＤＲ体内模 型主要 通过移植 和诱 导两种方法构建 ，两种方法制作 的 ＭＤＲ动物模型均能保 持动物原有 的组织学构造及原肿瘤 细胞 的各项特性 ，重现原始肿瘤结构 ，模拟体 内微环境 ，反映体 内肿瘤形成情况 。
细胞系来源的异体移植肿瘤模型
Doses of inoculated fluorescent cellsR a d a n ce ×105 (p /s e c /c m 2/s r )ACBDB12-Luc 皮下接种实体瘤模型B16-Luc 肿瘤转移模型BrightB r i g h tL u c i f e r a s eV e n t r a lD o r s a l12d15d18d12d15d18dThe days aftertumor inoculation 12123456724681012141518V e n t r a l l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108)D o r s a l l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108)R e l a t i v e l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108)Days after operationNS0.04U Bleomycin52图1. A–B.基于人结肠癌细胞系的颅内转移瘤模型。
向裸鼠颈动脉注射不同接种量的，带有Luciferase 荧光标记的人结肠癌细胞，并选取多个时间点通过活体成像术检测Luciferase 在颅内的表达水平。
C.基于A549Luc 细胞的原位CDX 肿瘤模型。
Balb/C 裸鼠提前经气管插管注射生理盐水（NS）或博来霉素（诱导肺纤维状损伤以促使外源细胞成瘤）处理，饲养两周后再经气管插管注射1×106个A549Luc 细胞，继续饲养一周后进行活体成像，检查肺部成瘤情况。
D.基于荧光标记B16Luc 黑色素瘤细胞的皮下/转移瘤模型。
细胞系来源的异体移植肿瘤模型细胞系来源的异体移植肿瘤模型(Cell●line-derived●xenograft,●CDX)是将体外培养的人源或鼠源的肿瘤细胞系移植到免疫缺陷小鼠体内而构建的肿瘤模型，其具有建模时间短，重复性好，成本低等特点。
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验的具体步骤及方法
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验的具体步骤及方法体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性，最终筛选出具有
一定抗性的细胞克隆。
培养条件
一、
用含10%小牛血清的DMEM培养液，5%CO2，37℃培养。
实验步骤
二、
1. 将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中，先用DOX（阿霉素）0.01
ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。
2. 然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml，接着进行DOX低浓度的筛选。
3. 随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC1作CHO和RC1对DOX的剂量-反应
曲线，求CHO和RC1的IC50值。
4. 抗性倍数即为RC1的IC50与CHO的IC50。
三、注意事项
1. 要具备培养细胞的实验室条件，谨防污染。
2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50值，以确定其实诱导浓度。
3. 采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株，对阿霉素等产生抗性的细胞株，
往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。
肿瘤动物模型的构建
肿瘤动物模型的构建第一类是皮下移植瘤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发，T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
肿瘤细胞移植时的简要步骤：首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106左右；肿瘤细胞可与基质胶1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒 3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，防止其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤 3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次，然后用眼科剪剪开约0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
抗肿瘤药物药效学指导原则规范
抗肿瘤药物药效学指导原则一、基本原则1. 抗肿瘤药物分类(1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等；(2) 生物反应调节剂(biological response modifier)；(3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reersal agent)；(4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)；(5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor)；分化诱导剂(differentiation inducing agent)；(7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor)；反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。
2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容2.1 包括体外抗肿瘤试验，体内抗肿瘤试验。
2.2 评价药物的抗癌活性时，以体内试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论。
2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。
二、体外抗肿瘤活性试验1. 试验目的1.1 对候选化合物进行初步筛选；1.2 了解候选化合物的抗瘤谱；1.3 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考，如剂量范围、肿瘤类别等。
2. 试验方法选用10-15株人癌细胞株，根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养；推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT 还原法、磺酰罗丹明B(SR染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。
药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。
试验应设阳性及阴性对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照。
3. 评价标准以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线，然后采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值或EC50值)。
如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定
如何进行小鼠肿瘤模型的建立及鉴定小鼠肿瘤模型的建立及鉴定是癌症研究中非常重要的一步，可以用于研究肿瘤的发生机制、治疗策略以及评估新的抗癌药物。
下面将详细介绍小鼠肿瘤模型的建立及鉴定的方法并提供一些实用的技巧。
肿瘤模型建立的方法主要包括人工移植方法、化学物质诱导方法和遗传工程方法。
一、人工移植方法：1.将人类肿瘤细胞、移植物肿瘤组织或细胞株移植到小鼠体内，可以通过裸鼠或免疫缺陷小鼠模型建立人类肿瘤模型。
当细胞或组织取出并经过相关处理后，通过给小鼠注射或将其移植到小鼠体内，研究人类肿瘤的生长和发展。
2.移植人体肿瘤片段。
3.使用免疫缺陷小鼠模型，如裸鼠、严重联合免疫缺陷小鼠等，可以接受外源组织移植而不会引发排斥反应。
二、化学物质诱导方法：1.化学物质诱导肿瘤模型是通过给予小鼠致癌物质或诱导剂来诱发肿瘤发生。
2.应遵循相关伦理原则使用易获得且时间成本低的致癌物质。
3.诱导剂可通过各种途径给予小鼠，如口服、皮下注射、腹腔注射等。
4.对于使用化学物质诱导的肿瘤模型，需要在给药期间和给药后对小鼠进行定期观察和血液检测，以评估肿瘤的发生和发展情况。
三、遗传工程方法：1.遗传工程方法可利用转基因技术将特定肿瘤相关基因引入小鼠体内，例如，通过敲除或激活肿瘤抑制基因或癌基因等，产生特定类型的肿瘤模型。
2.通过基因敲除、敲入或点突变技术，可改变小鼠体内特定基因的表达水平，以模拟人类肿瘤的发生和发展。
确定小鼠肿瘤模型建立成功后1.观察和检测小鼠是否出现明显的肿瘤体积增大和质地变硬等症状。
2.定期观察小鼠的体重变化，以评估肿瘤对小鼠健康状况的影响。
3.使用体重表、肿瘤质量表等测量工具定期测量肿瘤体积，以评估肿瘤生长速度。
4.进行组织学检测，通过活体组织活检或解剖后进行病理学检测，以确定肿瘤种类和分级。
5.对肿瘤样本进行免疫组织化学染色、分子生物学检测等，以确定肿瘤的分子特征。
总结：建立和鉴定小鼠肿瘤模型是一项复杂的工作，需要专业的知识和技术支持。
肿瘤细胞的培养
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1、取材
人肿瘤细胞来自外科手术或活检瘤组织。取材 部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变 或坏死区，取材时尽量避免，要挑选活力较好 的部位。 癌性转移淋巴结或胸腹水是很好的培养材料。
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取材后尽快将癌组织进行培养，一般4小时内 细胞存活最好。标本在4℃存放，不宜超过24 小时。
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人癌细胞建系必须要有完整的记录，包括组织 来源、病人姓名、住院号、年龄、性别、临床 诊断、病理诊断（应明确分类分期）、术前放 化疗情况，为细胞建系的重要材料。 为了鉴定建立的细胞系来源和生物学特性，最 好留有病人正常组织和血标本。
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② 肿瘤细胞的自分泌也会因分散培养而被稀释，达不到 肿瘤生长的需求，降低肿瘤细胞的生长增殖力。 ③ 并非所有肿瘤细胞都有强的生长活力和长的生命周 期，只有干细胞才有强的增殖生长能力，但这些细胞 数量很少。 ④ 离体培养肿瘤细胞可能需求与体内相似的特殊生存条 件。
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（一）癌细胞原代培养
癌细胞建系的方法和程序相似于正常细胞，包括 标本收集和处理、原代培养、传代、换液、冻 存、复苏等过程。 培养成功关键在于：取材、成纤维细胞的排除、 选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。
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⑤ 其它方法
聚丙烯酰胺抑制成纤维细胞生长 密度梯度离心等
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（2）选择性培养基
选择性培养基是针对特殊细胞生长的营养要求 设计的。 在癌细胞建系中，选择性培养基的应用是提高 癌细胞体外存活、抑制成纤维细胞生长的关键 技术改进。
HITES选择培养基是一种改良RPMI-1640培养基，含有氢化可
的松、胰岛素、转铁蛋白、雌激素、硒等成分。HITES培养基适 合用于人小细胞肺癌建系。
具体做法是：
1）收集培养的肿瘤细胞，用无血清培养液洗一遍；2）计数 后将0.2ml含2×106～2×107个细胞的细胞悬液注射到动物皮下。 约一个月左右（最短在3天后），可见注射局部有肿瘤出现，甚至 有转移瘤形成。经病理组织学检查可以确定肿瘤是否由接种的细 胞产生。也可接种到腹腔或通过鼠尾静脉注射。
中药抗肿瘤药理常用的技术和方法
中药抗肿瘤药理常用的技术和方法
中药抗肿瘤药理研究的常用技术和方法包括以下几个方面：
1. 体外细胞实验：通过体外培养的癌细胞株，使用中药提取物或纯化组分进行处理，评估其对肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等方面的影响。
常用的实验方法包括MTT法、流式细胞术、细胞凋亡检测等。
2. 动物模型研究：使用小鼠、大鼠等动物建立肿瘤模型，在给药后观察肿瘤生长的变化，并通过病理学、免疫组织化学等技术手段评估中药对肿瘤的治疗效果。
常用的动物模型包括移植瘤模型和转基因小鼠模型。
3. 分子生物学方法：通过PCR、Western blot、Real-time PCR等技术，研究中药对肿瘤细胞信号通路、基因表达、蛋白质水平的调控作用，以及对肿瘤相关的细胞周期、凋亡、血管生成等关键过程的影响。
4. 药物代谢动力学研究：通过药代动力学方法，评估中药在体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，揭示中药抗肿瘤作用的药理学基础。
常用的技术包括药物浓度测定、药物动力学参数计算等。
5. 分子影像学研究：利用核磁共振成像（MRI）、正电子发射断层扫描（PET）等分子影像学技术，观察中药对肿瘤的影响，如肿瘤体积、代谢活性的变化等。
6. 组织病理学分析：通过组织切片染色、免疫组织化学等技术手段，观察中药对肿瘤细胞形态学、组织结构的影响，以及对血管生成、免疫细胞浸润等指标的调节作用。
以上所述仅为中药抗肿瘤药理研究中的常见技术和方法，实际研究过程中还可根据具体需要选择其他适合的技术手段。
《基于生物3D打印技术的黑色素瘤细胞体外模型构建方法研究》范文
《基于生物3D打印技术的黑色素瘤细胞体外模型构建方法研究》篇一一、引言随着科技的发展，生物3D打印技术以其独特的优势，逐渐在生物医学领域得到广泛应用。
特别是在构建肿瘤细胞体外模型方面，3D打印技术以其高精度、可定制的特性，为研究肿瘤细胞的生长、迁移、药物反应等提供了新的可能。
本文将重点探讨基于生物3D打印技术的黑色素瘤细胞体外模型构建方法的研究。
二、黑色素瘤及其研究意义黑色素瘤是一种常见的皮肤肿瘤，具有高度的侵袭性和转移性。
由于黑色素瘤的发病机制复杂，对其治疗方法的研究一直是一个挑战。
通过构建黑色素瘤细胞体外模型，我们可以更好地理解其生长机制、迁移途径以及药物反应，为临床治疗提供理论依据。
三、生物3D打印技术在黑色素瘤细胞体外模型构建中的应用生物3D打印技术通过将生物材料和生物活性物质如细胞、生长因子等打印成具有特定结构和功能的结构体，可以模拟生物组织的生长和功能。
在黑色素瘤细胞体外模型的构建中，3D打印技术可以实现以下目标：1. 构建高度仿真的肿瘤微环境：通过打印含有不同生物活性物质的支架，可以模拟肿瘤细胞的生长环境和肿瘤微环境中的多种因子。
2. 精确控制细胞分布：通过3D打印技术，可以精确控制肿瘤细胞在模型中的分布，从而更好地模拟肿瘤的生长和扩散。
3. 定制化模型：根据研究需要，可以定制不同结构和功能的模型，以满足不同研究的需求。
四、黑色素瘤细胞体外模型的构建方法1. 材料准备：选择合适的生物材料和生物活性物质，如生物相容性好的聚合物、生长因子等。
2. 设计模型结构：根据研究需要，设计模型的结构和功能。
3. 细胞准备：培养一定数量的黑色素瘤细胞，并确保细胞的活力和纯度。
4. 3D打印：将生物材料和细胞混合后，通过3D打印机进行打印，形成具有特定结构和功能的模型。
5. 培养与观察：将模型置于适宜的环境中培养，并定期观察细胞的生长和模型的变化。
五、研究展望未来，随着生物3D打印技术的不断发展和完善，其在黑色素瘤细胞体外模型构建中的应用将更加广泛。
肿瘤类器官模型的建立及应用
doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2020.06.015•综述.肿瘤类器官模型的建立及应用罗宝花2,张永斌匚刘晓秋叫师长宏2#(1.广州中医药大学科技创新中心/实验动物中心，广州510405;2.空军军医大学实验动物中心，西安710032)［摘要］来源于特异性干细胞，经体外三维培养，形成与原器官相类似的空间形态结构，称为类器官(organoid)。
运用该培养技术形成的肿瘤类器官，可以较好地再现原发肿瘤的体内特征及异质性，而且所需形成时间短、传代稳定，弥补了传统肿瘤模型的缺陷，可用于肿瘤的发生和发展机制研究、药物筛选与个体化治疗、免疫治疗和液体活检等。
本文将从肿瘤类器官模型的发展简史、建立方法、应用前景及局限性等方面进行综述。
［关键词］类器官；肿瘤研究；三维培养；个体化治疗［中图分类号］Q95-33;R73-3［文献标志码］A［文章编号］1674-5817(2020)06-0540-07人体肿瘤研究常用的动物模型主要有人源肿瘤细胞系移植(cell-derived xenograft,CDX)模里和人源肿瘤组织异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模羽。
CDX模羽是将人体肿瘤细胞先在体外二维培养环境下进行培养，经过筛选、传代，形成稳定的肿瘤细胞系，然后注射到免疫缺陷小鼠体内建立的模型；该模型的建立操作简单，且肿瘤细胞可在体外无限增殖，便于进行基因编辑操作，但是肿瘤细胞在体外培养过程中，会被含血清培养基诱导发生转化，对培养环境进行适应和选择，从而失去原发肿瘤细胞［收稿日期］2020-04-20［基金项目］国家自然科学基金(31772546)［作者简介］罗宝花(1995—),女，硕上研究生,研究方向：中医肿瘤学。
E-mail:*****************张永斌(1973—),男，副研究员，研究方向：动物模型研究。
E-mail:**********************.cn*共同第一作者［通信作者］师长宏(1973—),男，博上生导师，教授，研究方向：肿瘤模型的制各与评价。
抗肿瘤药效实验报告
一、实验目的本实验旨在评估某新型抗肿瘤药物（以下简称“药物A”）在体外及体内对肿瘤细胞的抑制效果，并探讨其药效特点，为该药物的进一步研发和临床应用提供科学依据。
二、实验材料1. 体外实验材料：- 细胞株：人肺癌细胞株A549、人胃癌细胞株SGC-7901、人乳腺癌细胞株MCF-7等。
- 药物A：纯度≥98%，规格为100mg/mL。
- 实验试剂：胎牛血清、DMEM培养基、青霉素-链霉素双抗等。
2. 体内实验材料：- 小鼠：Balb/c小鼠，体重18-22g。
- 药物A：纯度≥98%，规格为100mg/mL。
- 实验试剂：生理盐水、脱纤维蛋白原等。
三、实验方法1. 体外实验：- 细胞培养：将细胞株接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
- 药物A作用：将细胞接种于96孔板中，加入不同浓度的药物A，培养24小时后检测细胞活性。
- 细胞活性检测：采用CCK-8法检测细胞活性，计算抑制率。
2. 体内实验：- 肿瘤模型建立：将小鼠随机分为实验组和对照组，实验组给予药物A灌胃，对照组给予等体积生理盐水灌胃。
- 肿瘤体积测量：每周测量肿瘤体积，计算肿瘤生长抑制率。
- 肿瘤重量测量：实验结束后，处死小鼠，取肿瘤组织称重，计算肿瘤重量抑制率。
四、实验结果1. 体外实验结果：- 药物A对人肺癌细胞株A549、人胃癌细胞株SGC-7901、人乳腺癌细胞株MCF-7等具有显著的抑制作用，IC50值分别为5.2μM、8.0μM、6.5μM。
2. 体内实验结果：- 药物A能够显著抑制肿瘤生长，实验组肿瘤体积抑制率为64.3%，肿瘤重量抑制率为63.5%。
五、讨论1. 药物A在体外及体内实验中均表现出良好的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞具有抑制作用。
2. 药物A的IC50值较低，表明其具有较好的抗肿瘤效果。
3. 药物A在体内实验中能够显著抑制肿瘤生长，具有良好的临床应用前景。
六、结论本实验结果表明，药物A具有良好的抗肿瘤活性，有望成为新型抗肿瘤药物。
肿瘤球模型构建流程
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药物筛选和评价的体外和体内模型研究
药物筛选和评价的体外和体内模型研究药物的研发从来都是一个复杂而漫长的过程。
在临床前阶段，药物的筛选和评价工作是至关重要的。
这一过程需要利用体外和体内模型对药物进行多个方面的研究，以确保其安全、有效，同时也可以降低后期临床研究的风险和成本。
体外模型是指在体外进行的研究，例如体外细胞实验、组织切片实验等。
在体外模型中，药物与生物体外的环境相对隔离，研究者可以更加精确地控制试验条件，尤其是药物浓度和作用时间等因素。
这就提供了一个相对可控的环境，使得药物的活性和毒副作用可以更加精确地被评价。
在体外细胞实验中，研究者通常会使用人类细胞、动物细胞或细菌等模型，在不同的细胞系中，研究者可以验证药物对于不同疾病的抑制作用。
例如，在研究新药物抗癌方面，体外细胞实验可以为研究者提供药物对肿瘤细胞生长的影响，从而评估其治疗效果；在心血管药物研究中，通过对血管平滑肌细胞的研究，可以评价药物作用于血管的扩张和收缩能力。
除了细胞实验外，组织切片实验也是一种常见的体外模型。
组织切片实验适用于研究针对特定疾病的药物，例如治疗瘤细胞的靶向药物。
在组织切片实验中，研究者将含有患者肿瘤样本的切片，置于特定的培养基中，然后加入不同的药物，评估不同药物对于肿瘤细胞的疗效和毒副作用。
除了体外模型外，体内模型也是药物筛选与评价的重要手段之一。
体内模型通常采用动物模型，如小鼠、大鼠、猪、猴等等。
在体内模型中，药物接受动物体内的复杂环境中的影响，药物代谢和药物作用的时间和剂量的监测也可以更加准确。
动物模型一般包括相关的生理指标和疾病的标志指标。
例如，在动物模型中进行心血管药物研究时，研究者可以测量大鼠的心肌收缩力、血管管腔直径、心房电位等生理指标来评价药物的效果；在研究治疗糖尿病的药物时，可以对小鼠进行进食和排尿数据的监测，评估药物对血糖控制的效果。
尽管体内模型比体外模型更接近人类生理环境，并且能够更真实地模拟药物的活性和毒副作用，但这种类型的模型也具有局限性。
小鼠抗肿瘤实验报告
肿瘤是当今世界严重的公共卫生问题之一，其发病率和死亡率逐年上升。
因此，寻找有效的抗肿瘤治疗方法对于提高人类健康水平具有重要意义。
本研究旨在通过构建小鼠抗肿瘤实验模型，探讨新型抗肿瘤药物的作用效果，为临床抗肿瘤治疗提供理论依据。
#### 二、实验材料与方法1. 实验动物：选取SPF级C57BL/6小鼠，体重18-22g，雌雄各半，由XX实验动物中心提供。
2. 实验药物：抗肿瘤药物XX，由XX制药公司提供。
3. 实验仪器：小鼠抗肿瘤实验模型、显微镜、细胞培养箱、CO2培养箱、酶标仪、凝胶成像系统等。
4. 实验方法：（1）构建肿瘤模型：采用皮下注射法，将S180肿瘤细胞悬液注入小鼠腋下，建立S180荷瘤小鼠模型。
（2）分组与给药：将荷瘤小鼠随机分为以下四组：A组：空白对照组，不给予任何处理；B组：模型组，给予等量生理盐水；C组：低剂量实验组，给予低剂量抗肿瘤药物；D组：高剂量实验组，给予高剂量抗肿瘤药物。
（3）观察指标：1）肿瘤体积：每周测量肿瘤直径，计算肿瘤体积；2）体重：每周测量小鼠体重；3）生存率：记录各组小鼠的存活天数；4）肿瘤细胞凋亡：采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况；5）肿瘤微环境：检测肿瘤组织中巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞浸润情况。
1. 肿瘤体积：经过4周实验，各实验组肿瘤体积均较模型组显著减小（P<0.05），且高剂量实验组肿瘤体积最小。
2. 体重：各实验组小鼠体重与模型组相比无显著差异（P>0.05）。
3. 生存率：高剂量实验组小鼠生存率最高，达80%，显著高于模型组（P<0.05）。
4. 肿瘤细胞凋亡：TUNEL法检测结果显示，高剂量实验组肿瘤细胞凋亡率显著高于模型组（P<0.05）。
5. 肿瘤微环境：高剂量实验组肿瘤组织中巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞浸润情况较模型组显著增加（P<0.05）。
#### 四、讨论本研究通过构建小鼠抗肿瘤实验模型，观察了新型抗肿瘤药物XX在不同剂量下的抗肿瘤效果。
抗肿瘤药物的研发及临床试验研究
抗肿瘤药物的研发及临床试验研究研究目标：抗肿瘤药物的研发及临床试验研究研究背景:肿瘤是世界范围内导致死亡的主要原因之一。
抗肿瘤药物的研发及临床试验研究是当前医药学界的热点和重点方向之一。
本研究旨在提出一种新的方法来解决肿瘤治疗中的挑战，以期能为实际问题的解决提供有价值的参考。
研究方法:1. 实验设计本研究将采用细胞实验和动物模型来评估抗肿瘤药物的疗效。
我们将选择多种常见的肿瘤细胞株，如乳腺癌、肺癌和结直肠癌等，作为研究对象。
我们将制备不同浓度的抗肿瘤药物溶液，并将其与肿瘤细胞共培养一段时间。
我们将使用细胞增殖和细胞凋亡分析等方法来评估抗肿瘤药物对肿瘤细胞的治疗效果。
2. 数据采集在细胞实验中，我们将定期观察和记录细胞的形态变化、增殖能力以及细胞凋亡情况。
我们还将测定抗肿瘤药物对关键信号通路的影响，如VEGF（血管内皮生长因子）、p53、Akt（蛋白激酶B）等。
在动物模型中，我们将注射肿瘤细胞到小鼠体内，然后分别给予不同浓度的抗肿瘤药物来观察肿瘤的生长情况和小鼠的生存率。
3. 数据分析我们将对采集到的数据进行统计学分析。
对于细胞实验数据，我们将使用t检验或方差分析等方法进行比较和分析。
对于动物模型数据，我们将使用生存分析和Kaplan-Meier曲线来评估不同组之间的差异。
创新和发展:1. 缺陷相关肿瘤模型在动物模型中，我们将尝试建立缺陷相关肿瘤模型，如p53基因缺陷或BRCA1/2基因缺陷等。
通过比较缺陷相关肿瘤与正常肿瘤对抗肿瘤药物的敏感性差异，我们可以更好地理解肿瘤发生和发展的机制，并为肿瘤治疗提供新的方法和靶点。
2. 靶向药物的研发在研究中，我们将尝试研发针对肿瘤特异性标志物的靶向药物。
通过结合肿瘤特异性标志物与化疗药物，我们可以提高药物的靶向性和疗效，并减少对正常细胞的损伤。
3. 临床试验研究在实验室阶段获得明确效果的抗肿瘤药物将进行临床试验研究。
我们将选择一定数量的肿瘤患者进行多中心、随机、双盲、安慰剂对照的临床试验。
一、肿瘤细胞体外培养的重要性
5．培养基
在癌细胞建系中，选择性培养基的应用 是提高癌细胞体外存活、抑制成纤维细 胞生长的关键技术改进。选择培养基是 针对特殊细胞生长的营养要求设计的。 针对癌细胞的特点，选择性培养基应含 少量血清。
血清对上皮细胞有抑制作用有利于成纤维细胞生长。因 此用低或无血清培养基为好。改良RPMI-1640培养基可 提高癌细胞存活。
在人类的脑部、肺部和胰腺等部位的肿瘤中 EGFR的含量极高，Artrazeneca公司的研究人员 于1998年率先提出通过开发阻断EGFR的药物，
可以抑制肿瘤的生长，这种全新的疗法就是现在
的靶向性疗法，它没有毒副作用，不会杀死正常
细胞，按照这种思路，基因技术公司开发出一种 治疗晚期乳腺癌的药物Herceptin，并于1998年 获准上市。Herceptin是一种单克隆抗体药物，靶 向HER-2，这种药物能使只有5个月寿命的晚期 乳腺癌病人继续生存。为什么Herceptin成功获准，
由于临床试验中没有同时对所有乳腺癌患者进行 试验，而是选择了其中的一小部分（大约占25℅） 的那些HER-2含量异常高的晚期乳腺癌患者。
Astrazeneca公司的肺癌药Iressa等都是靶 向 药 物 ， 靶 EGFR， 但 成 功 的 只 有 Herceptin。Iressa 只 在 1 0 ℅ 肺 癌 患 者 中 有 神奇作用，但在大规模的临床试验中90℅ 人无效。花3亿美元，10年时间，未获批准。
肿瘤发生发展结局的机理研究进入分子水平，人类 最终认识肿瘤才可以征服肿瘤。若癌变 的始发变化
是基因活动的调控失常，癌变就具有潜在的可逆行， 就可以为肿瘤治疗开辟一个完全新的途径—控制调 控机制；若癌变的本质是基因突变，那就意味着癌 变不可逆，只有了解其突变的部位，只有通过基因 治疗，而所有这种机理的研究，其中一个重要的手 段是通过肿瘤细胞的体外培养进行研究。虽然体外 培养不能完全反映体内情况，但为单因素、多因素 研究提供模型。
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体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验
标签：体外抗药肿瘤
体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性，最终筛选出具有一定抗性的细胞克隆。
细胞培养技术
实验方法原理
抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性，最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。
实验材料
小鼠
试剂、试剂盒
小牛血清DMEM DOX
仪器、耗材
CO2培养箱无菌钢圈
实验步骤
一、培养条件
用含10%小牛血清的DMEM培养液，5%CO2，37℃培养。
二、实验步骤
1. 将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中，先用DOX（阿霉素）0.01 ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。
2. 然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml，接着进行DOX低浓度的筛选。
3. 随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC1作CHO和RC1对DOX的剂量-反应曲线，求CHO和RC1的IC50值。
4. 抗性倍数即为RC1的IC50与CHO的IC50。
注意事项
1. 要具备培养细胞的实验室条件，谨防污染。
2. 通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50值，以确定其实诱导浓度。
3. 采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株，对阿霉素等产生抗性的细胞株，往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。
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最新实验心得
(共1个心得)
ludengjuan: 体外抗肿瘤药物筛选时候浓度没有抑制率，甚至出现负值
中药和西药的剂量设计有些差别，中药最高剂量一般为200 ug/ml，西药最高剂量一般为100 ug/ml，初筛药物分子量要求在200 g/mol 以上，即10 mmol。
另外，有些药物还原性很强，可以和MTT直接反应生成结晶紫，从而出现假阳性结果。
有些药物有颜色，可以在细胞内沉积，又能被最后的溶剂溶解，有些药物在490 nm 处有紫外吸收，如果有这种情况会出现越高剂量组OD值高出空白对照组，如果药物确实有作用，会出现U字形量效曲线。