大肠杆菌的培养
大肠杆菌培养教学课件ppt
将发酵罐放入恒温振荡器中培养，控制温度和湿度适宜，观察细菌的生长情况。
收获
当细菌生长到一定阶段时，进行收获，提取所需产物。
04
大肠杆菌培养过程中的问题与解决策略
杂菌污染及其防治
杂菌污染
大肠杆菌培养过程中经常出现 杂菌污染，导致培养失败。
污染来源
杂菌污染通常来自培养基、设 备、空气等。
防治策略
THANKS
感谢观看
肠道益生菌
大肠杆菌被认为是肠道益生菌之一，可促进肠道蠕动、增强免疫力、降低胆固醇等。
人类健康
大肠杆菌在肠道内的数量和种类对人类健康有着重要影响，可通过补充益生菌来维持肠道微生态平衡 。
06
大肠杆菌培养的教学实践建议
实验方案的设计与优化建议
确定实验目标
01
明确实验所要达到的目标，如分离、鉴定、纯化大肠杆菌等。
肠道微生物
大肠杆菌是肠道微生物群落中的一 种，对肠道健康和功能具有重要作 用。
促消化
大肠杆菌能够促进肠道蠕动和消化 ，有助于营养物质的吸收。
免疫刺激
大肠杆菌能够刺激肠道免疫系统的 发育和功能，增强机体对病原菌的 抵抗力。
生物拮抗
大肠杆菌具有生物拮抗作用，能够 抑制病原菌的生长和繁殖。
02
大肠杆菌培养的基本原理
将菌种接种到培养基中，放入恒温振荡器中 培养。
发酵罐的灭菌与清洗
准备所需材料
包括发酵罐、不锈钢筛网、清 洗剂等。
灭菌
将发酵罐用高压蒸汽灭菌法灭菌 ，确保无菌状态。
清洗
用清洗剂清洗发酵罐内外部，去除 污垢和残留物。
接种、发酵与收获
准备所需材料
包括发酵罐、接种器、恒温振荡器等。
鉴别大肠杆菌的方法
鉴别大肠杆菌的方法
首先，鉴别大肠杆菌的方法之一是通过培养基培养。
大肠杆菌在营养富集的培养基上生长迅速，因此可以通过在特定培养基上进行培养来鉴别大肠杆菌。
常用的培养基包括大肠埃希菌选择性培养基和大肠埃希菌选择性富集培养基。
在这些培养基上，大肠杆菌会表现出特定的形态和生长特征，有助于鉴别。
其次，大肠杆菌的鉴别方法还包括生化试验。
大肠杆菌具有一些特殊的生化特性，如产气、发酵葡萄糖和乳糖等。
因此，可以通过进行气体产生试验、糖发酵试验等生化试验来鉴别大肠杆菌。
这些试验可以通过观察细菌在特定条件下的反应来确定其是否为大肠杆菌。
另外，分子生物学方法也被广泛应用于大肠杆菌的鉴别。
通过PCR扩增特定基因序列，再通过电泳分析等技术手段来鉴别大肠杆菌。
这种方法具有高度的特异性和准确性，能够快速鉴别出大肠杆菌。
除了上述方法，还可以利用质谱分析、免疫学方法等现代技术手段来鉴别大肠杆菌。
这些方法在鉴别大肠杆菌中起着重要作用，为食品安全和公共卫生提供了有力的支持。
综上所述，鉴别大肠杆菌的方法多种多样，可以根据实际情况选择合适的方法进行鉴别。
在食品生产和公共卫生领域，及时准确地鉴别大肠杆菌对于预防食源性疾病和保障公共健康至关重要。
希望通过不断的研究和实践，能够提高大肠杆菌鉴别的准确性和效率，为食品安全和公共卫生工作做出更大的贡献。
大肠杆菌菌落培养形态描述
大肠杆菌菌落培养形态描述
大肠杆菌菌落形态一般是乳白色，且表面光滑的圆形菌落，菌落的边缘也比较整齐，表面和背面的菌落是一致的。
是呈深紫色的，并且还有金属光泽。
大肠杆菌菌落是中等大小，有运动功能，无芽孢。
染色之后是红色的。
大肠杆菌菌落的合成代谢能力是非常强的，比较适合在37度的生长环境生存，但是在42到44摄氏度的温度下也可以生存。
大肠杆菌在EMB上：紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色，菌落中心呈深紫或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽。
大肠杆菌在麦康凯上：鲜桃红或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。
沙门在SS上：无色至淡红色，半透明或不透明，菌落中心有时带黑褐色。
沙门在EMB上：无色至浅橙色，透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落。
菌落形态一般都是用肉眼观察的，菌体形态才是用显微镜观察在普通琼脂培养基上面都是一样的,圆形边缘整齐，表面光滑，半透明，小凸起典型的大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上的特征为：深紫黑色、光滑、湿润、带有金属光泽的圆形菌落。
大肠杆菌培养生长条件
大肠杆菌培养生长条件大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中。
它具有很强的适应能力，可以在各种环境中生存和繁殖。
为了获得最佳的大肠杆菌培养生长条件，科学家们进行了大量的研究和实验。
大肠杆菌的生长需要提供适宜的营养物质和环境条件。
首先，大肠杆菌需要碳源来提供能量和碳元素。
常见的碳源包括葡萄糖、乳糖等单糖，以及淀粉、纤维素等复合糖。
此外，大肠杆菌还需要氮源来合成蛋白质和核酸等生物大分子。
常见的氮源包括氨基酸、尿素等。
此外，大肠杆菌还需要矿物质、维生素和其他微量元素来维持正常的生长。
大肠杆菌的生长还需要适宜的温度和pH值。
一般来说，大肠杆菌的最适生长温度在37摄氏度左右，这也是人体内的温度。
在这个温度下，大肠杆菌的生长速度最快。
当温度过高或过低时，大肠杆菌的生长速度会受到限制。
此外，大肠杆菌对pH值也有一定的要求。
大肠杆菌的最适生长pH值在6.5-7.5之间，略偏碱性。
当pH 值过高或过低时，大肠杆菌的生长也会受到影响。
除了营养物质和环境条件外，大肠杆菌的生长还受到其他因素的影响。
例如，氧气浓度对大肠杆菌的生长有重要影响。
大肠杆菌可以根据氧气浓度分为厌氧菌和好氧菌。
厌氧菌在缺氧或低氧条件下生长，而好氧菌则需要充足的氧气供应。
此外，大肠杆菌的生长还受到周围环境的微生物和竞争菌的影响。
如果培养基中存在其他细菌或真菌等竞争菌，可能会影响到大肠杆菌的生长。
为了提供最适合大肠杆菌生长的条件，科学家们通常会制备含有适宜营养物质的培养基。
常用的培养基包括LB培养基、M9培养基等。
在制备培养基时，需要根据具体实验目的和大肠杆菌的特点进行调整。
此外，科学家们还会通过控制温度、pH值和氧气浓度等环境因素，来优化大肠杆菌的生长条件。
大肠杆菌的生长需要适宜的营养物质和环境条件。
科学家们通过研究和实验，不断优化大肠杆菌的培养生长条件，以满足不同实验的需求。
这些研究不仅有助于我们更好地了解大肠杆菌的生长特性，也为其他相关领域的研究提供了重要的基础。
大肠杆菌的培养
大肠杆菌的培养1、大肠杆菌（1）特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌（2）用途：基因工程技术中被广泛采用的工具2、培养：LB液体培养基——扩大培养LB固体培养基——分离培养基的配制：基础培养基（LB培养基）:含有一般细菌生长繁殖需要的基本的营养物质。
最常用的基础培养基是天然培养基中的牛肉膏蛋白胨培养基。
细菌培养基的特殊成分：蛋白胨、酵母提取液、氯化钠，酸碱度：中性偏碱a.固体培养基通常加琼脂，作为凝固剂（凝固剂的要求：不被微生物利用，又可使培养基固化，且不影响培养基中的其他营养物被细菌吸收）作用：分离（纯化）细菌、计数、保留菌种等b.液体培养基不加琼脂等凝固剂其它成分与固体培养基相同作用：培养细菌高压蒸气灭菌：条件： 1kg/cm2压力、121℃、15min可灭菌培养皿、试管、三角瓶、取样器的头、移液管、三角刮刀、接种环、镊子、无菌水、培养基（高压蒸汽灭菌不会破坏培养基的营养成分）分离细菌方法一、划线分离法1）灼烧接种环；2）接种环冷却后，蘸取带菌培养物3）在近火焰处，让带菌接种环在固体培养基上划线。
划线的方法很多，但无论采用那种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。
二、涂布分离法1) 稀释菌液（10-5 ~ 10-7倍）用无菌吸管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液。
……3) 涂布用无菌吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。
再将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。
将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48h液态LB培养基的配制：1L溶液的制备：在950ml的去离子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取液5g、氯化钠10g。
调节pHLB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。
碳源和能源：酵母提取物，氮源：磷酸盐、蛋白胨，无机盐：NaCl。
大肠杆菌如何培养
大肠杆菌如何培养
一、大肠杆菌如何培养1. 大肠杆菌如何培养2. 大肠杆菌的保存方法 3. 大肠杆菌菌种的复苏二、大肠杆菌对人体益处和危害三、什么是大肠杆菌
大肠杆菌如何培养
1、大肠杆菌如何培养1.1、称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
1.2、加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分。
1.3、调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。
若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
1.4、过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基,这步可省略。
1.5、分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
2、大肠杆菌的保存方法
2.1、常用的长期保存法有:液体石蜡法、硅胶保存法、加入甘油或二甲基亚砜(DMSD)等保护剂。
大肠杆菌培养步骤方法
大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。
下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。
2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。
3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。
4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。
5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。
6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。
7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。
8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。
9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。
10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。
11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。
12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。
13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。
14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。
15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。
16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。
17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。
18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。
19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。
20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。
大肠杆菌的保存和培养
大肠杆菌的保存和培养大肠杆菌, 培养, 保存一．菌种的保存重组DNA 分子(质粒、噬菌体、粘性质粒)必须导入宿主菌中，通过细菌培养来扩增所需的重组DNA。
通常采用宿主菌是大肠杆菌，根据不同载体需求，选用不同品系大肠杆菌1. 概述：大肠杆菌其它微生物一样，都具有稳定遗传性和变异性、遗传性，保证微生物本身特征的相对稳定，即无性繁殖过程中能够保持原有的性状，为菌种保藏提供了有利因此，而变异性，使微生物的性状在繁殖过程中出现某些改变，给菌种保藏带来了困难。
由于存在变异，即菌种常出现所谓的退化，主要指理想性状的丧失，从而导致发育缓慢，存活率和产质量降低等现象，菌种保藏工作就是使菌种的变异降低至最小水平，使菌种在较长期的保藏之后仍然保持着原有的生命力、优良生产性能、形态特征以及不污染杂菌。
能够长期在研究上应用。
2. 微生物的变异速度，通常情况下，与其新陈代谢速度有关，微生物代谢活力旺盛，它的变异速度快，代谢活动微弱，变异速度就慢。
并且在多次的无性繁殖过程中可能会有突变的积累。
人们利用这一规律，可以创造各种条件，使微生物活动处于微弱活动或不活动状态，以减少变异的发生。
3. 菌种保藏的原理是：通过低温、干燥、隔绝空气和断绝营养等手段，以达最大限度地降低菌种的代谢强度，抑制细菌的生长和繁殖。
由于菌种的代谢相对静止，生命活动将处休眠状态，从而可以保藏较长时间。
要求保存的菌种在复苏后vf fv 的生活与繁殖能力、不发生形态特征、生理状态及遗传性状的改变外，还不允许污染任何杂菌。
此外，在保存前应确保菌种的单纯性，先分离单菌落后进行鉴定，然后再繁殖保存。
4. 常用的长期保存法有：液体石蜡法、硅胶保存法、加入甘油或二甲基亚砜（DMSD）等保护剂。
5. 甘油低温保存法(－70℃—－196℃)的特点i.甘油菌低温保存的基本原理是：在-70℃或液氮中冻存，细菌内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。
在0℃—-70℃温度范围内，水晶呈针状，极易招致细菌的严重损伤。
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特殊营养物质
混合显色剂
琼脂
pH±25℃
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，再加入一层培养基进行履盖。或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h。
典型特征
大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色，大肠菌群为粉红色菌落，其它细菌为无色菌落。
大肠杆菌的培养：
37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。
菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致。
大肠杆菌/大肠菌群显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌和大肠菌群的快速检测。大肠杆菌显蓝色至紫色，大肠菌群显红色。
总大肠菌群=蓝色菌落+紫色菌落+粉红色菌落
大肠杆菌=蓝色菌落+紫色菌落
4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装20支x3种)
质量控制
1、外观
此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈淡红色。制备好的平板呈透明粉红色固体培养基。
（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期。
（6）灭菌将上述培养基以,121℃,15min高压蒸气灭菌。
（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基，冷却。
（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
2、微生物试验
在36±1℃培养18～24h小时：
质控菌株
ATCC
生长情况
菌落颜色
单增李氏菌
27853
-/+
无色
金黄色葡萄球菌
25923
-/+
无色
大肠杆菌
25922
+++
蓝色
沙门氏菌
++ƻ++
粉红色
方法的局限性
本培养基鉴定大肠菌群/大肠杆菌，少数情况下可能会出现假阳性，但不会出现假阴性，有时可能需做其它补充试验。
（12）次日，挑取生长状态好，特征明显的单个菌落，接种于新鲜灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基中37℃，170r/min恒温振荡培养18h作种子培养液。
其后的实验中，每次实验前从种子培养液中吸取2ml菌液接种于新鲜灭菌的液体培养基中，37℃，170r/min恒温振荡培养
使用牛肉膏蛋白胨培养基
组成成分：牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl 5g,琼脂15～20g,水1000mL,～。
5.分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染.
分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6.加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.
贮存
制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处，保存温度2-8℃，注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液
2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃显色培养基中混匀或涂布于平板上
3、36±1℃培养18～24h，选用有30～200个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠菌群和大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝色至紫色，大肠菌群为粉红色菌落，其它细菌为无色或黄色菌落。
7.包扎加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.
8.灭菌将上述培养基于℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故入冰箱内暂存.
9.无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用.
2接种大肠杆菌斜面种子
(1)取实验室储备的大肠杆菌BL21种子，在酒精灯附近，用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。
(2)将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h。
3制备平板种子
(1)在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为1倍，10倍，100倍和1000倍，用移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液100ul)，然后在37℃培养箱中过夜。
大肠杆菌的培养
大肠杆菌种子液的制备
牛肉膏蛋白胨培养基的配方：
液体培养基
牛肉膏3.0g
蛋白胨10.0g
氯化钠5.0g
水1000ml
pH固体培养基在液体培养基的基础上再加入％－％的琼脂
1试管斜面与平板的制备
（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中。
（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。将称量好的％琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。
具体配置步骤：
1.称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.
2.加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.
（3）调PH在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用PH试纸测基PH直到PH达到。反之用1mol/L HCl进行调节。
（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。其试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过1/2加塞培养基分装完毕后，在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞。
3.调pH检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.
4.过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.