Ki-67和p53在壶腹癌中的表达及预后意义

Ki-67和p53在壶腹癌中的表达及预后意义顾炽昌;林叶;金浩生;简志祥【摘要】目的研究壶腹癌中Ki-67和p53的表达及预后意义,探讨两者在壶腹癌发生和发展中的作用.方法应用全自动免疫组化方法分别检测Ki-67和p53在40例行胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy,PD)后壶腹癌患者中的表达,分析两者与患者临床病理资料的关系及预后.结果 40例患者纳入研究,患者1、3、5年累积生存率分别为98％、67％和44％.40例壶腹癌组织中Ki-67阳性率92.5％(37/40),p53阳性率67.5％ (27/40).Ki-67在不同浸润程度的壶腹癌中表达差异有统计学意义(P=0.011).单因素生存分析表明,Ki-67(P=0.006)和p53(P =0.021)的表达及肿瘤的浸润程度(P =0.024)与壶腹癌患者的生存时间相关,而肿瘤最大直径、分化程度、淋巴结转移、TNM分期、血清CA19-9等因素与壶腹癌预后无明显相关性;多因素生存分析显示,p53是影响壶腹癌患者长期生存的独立因素(OR=1.717,P=0.015).结论 Ki-67在壶腹癌的发生和发展中起重要作用,其表达有助于阐释壶腹癌浸润生长的机制;p53过表达可作为评估壶腹癌预后的参考指标.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2015(024)006【总页数】4页(P698-701)【关键词】壶腹癌;Ki-67;p53;预后【作者】顾炽昌;林叶;金浩生;简志祥【作者单位】汕头大学医学院,广东汕头515041;广东省人民医院(广东省医学科学院);广东省人民医院(广东省医学科学院);广东省人民医院(广东省医学科学院);广东省人民医院(广东省医学科学院)【正文语种】中文【中图分类】R735.3壶腹癌是一种相对罕见的恶性肿瘤，发病率约占消化道恶性肿瘤的0.2%，在手术切除的壶腹周围恶性肿瘤中，壶腹癌约占20%［1］。

壶腹癌的预后相对良好，术后5 年生存率30% ～70%［2］。

肿瘤的形成是多阶段、多因素综合的结果，细胞增殖的调控和癌基因的激活及抑癌基因的失活是研究的热点。

Ki-67 是反映细胞增殖活性的重要指标，多种恶性肿瘤中检测到其过表达现象，而p53 基因是目前发现的与人类肿瘤关系最为密切的抑癌基因，其缺失或突变可导致细胞向恶性转化。

Ki-67 和p53 在肿瘤的发生、发展过程中有相当重要意义。

本研究通过回顾性分析，应用免疫组化方法检测40 例壶腹癌中Ki-67 和p53 的表达情况，进一步探讨两者在壶腹癌发生、发展中的作用和预后意义。

1 材料与方法1.1 材料收集2004 年2 月-2011 年2 月在广东省人民医院行胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy，PD)且经病理诊断为壶腹癌的临床病理资料共64例，筛选出资料完整并随访时间达3 年以上的患者共40 例。

女17 例，男23 例，年龄24 ～73 岁，平均年龄(56.4 ±10.5)岁。

组织病理学高分化8 例，中分化23例，低分化9 例。

肿瘤浸润程度T1 +T2 有18 例，T3 +T4 有22 例。

淋巴结转移阳性14 例，淋巴结转移阴性26 例。

TNM 分期:Ⅰ期16 例，Ⅱ期20 例，Ⅲ期4 例(TNM 分期采用AJCC 癌症分期第七版标准)。

血清CA19-9 阳性31 例，阴性9 例。

手术标本经甲醛固定和石蜡包埋，4 μm 厚连续切片，分别进行HE 染色和免疫组织化学染色。

1.2 主要试剂和仪器鼠抗人Ki-67 单克隆抗体(MIB-1，1 ∶100)和鼠抗人p53 单克隆抗体(DO-7，1∶1 000)均为丹麦DAKO 公司产品;Ventana 全自动免疫组化染色仪;二抗及显色系统均为全自动染色仪自带封闭套盒。

1.3 方法 Ki-67 和p53 染色方法均采用Ventana 全自动免疫组化染色仪染色，减少人为操作引起的误差。

阳性细胞为细胞核出现棕黄色颗粒。

Ki-67 和p53 均以肿瘤细胞不着色或≤10%的肿瘤细胞着色为阴性(-)，＞10%的肿瘤细胞着色为阳性，并根据肿瘤阳性细胞数所占的比例分为:11% ～50 % 为弱阳性(+)，＞50%为强阳性(++)。

1.4 统计学处理采用SPSS 17.0 软件进行统计分析，采用χ2 检验和Fisher's 确切概率法分析Ki-67 和p53 在壶腹癌中的表达差异;Spearman 等级相关分析两者之间的相关性;Kaplan-Meier 方法单因素生存分析并绘制生存曲线，Log-rank 检验用来比较生存率的差异;COX 比例风险回归模型分析独立预后因素。

P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果2.1 Ki-67 和p53 在壶腹癌组织中的表达情况 Ki-67 和p53 阳性染色均呈棕黄色颗粒，定位于细胞核(见图1 ～2)。

40 例壶腹癌组织中Ki-67 表达阳性者37 例，阳性率92.5%，其中弱阳性者28 例，强阳性者9 例。

p53 表达阳性者27 例，阳性率67.5%，其中弱阳性13 例，强阳性14 例。

Spearman 等级相关分析两者在壶腹癌中的表达无相关性(P=0.293)。

图1 Ki-67 在壶腹癌中阳性表达(200 ×);图2 p53 在壶腹癌中阳性表达(200 ×)Fig 1 The positive expression of Ki-67 in ampullary carcinoma (200 ×);Fig 2 The positive expression of p53 in ampullary carcinoma (200 ×)2.2 壶腹癌中Ki-67 和p53 的表达与临床病理因素的关系 Ki-67 在不同浸润程度的壶腹癌中表达差异有统计学意义(P=0.011)，且随肿瘤浸润程度的加深而表达增加，与肿瘤最大直径、淋巴结转移、分化程度、TNM 分期、血清CA19-9 无明显相关性(P ＞0.05);p53 过表达与肿瘤浸润程度、最大直径、淋巴结转移、分化程度、TNM 分期、血清CA19-9 均无相关性(P ＞0.05，见表1)。

表1 Ki-67 和p53 与壶腹癌临床病理因素的关系Tab 1 The relationship of Ki-67 and p53 and clinicopathological characteristics in ampullary carcinoma临床病理因素例数Ki-67≤p53 10% 11% ～50% ＞50% χ2 值 P 值- + ++ χ2值 P值1.872 0.495 2.047 0.376女17 2 10 5 5 4 8男23 1 18 4 8 9 6年龄(岁) 2.782 0.210 0.496 0.784＜60 23 2 18 3 8 8 7≥60 17 1 10 6 5 5 7肿瘤直径(cm) 1.723 0.505 0.714 0.780＜2 16 1 13 2 6 4 6≥2 24 2 15 7 7 9 8淋巴结转移 3.387 0.212 1.261 0.598-26 3 19 4 8 10 8+14 0 9 5 5 3 6浸润程度 8.126 0.011 2.970 0.251 T1 +T2 18 3 14 1 8 6 4 T3 +T4 22 0 14 8 5 7 10分化程度4.612 0.452 1.486 0.867高分化性别8 0 7 1 3 3 2续表1临床病理因素例数Ki-67≤p53 10% 11% ～50% ＞50% χ2 值 P 值- +++ χ2 值 P值23 1 16 6 8 6 9低分化 9 2 5 2 2 4 3 TNM 分期 7.921 0.0792.220 0.715Ⅰ16 3 12 1 6 6 4Ⅱ20 0 13 7 6 5 9Ⅲ4 0 3 1 1 2 1 CA19-9 0.221 0.884 1.054 0.579-9 1 6 2 3 4 2中分化31 2 22 7 10 9 12+2.3 生存分析随访截止时间为2014 年2 月。

本组患者术后1、3、5 年累计生存率分别为98%、67%和44%，中位生存时间为51.14 个月，其中存活时间最长的患者达118 个月，至今仍然存活。

Kaplan-Meier 方法单因素生存分析表明，壶腹癌患者的生存率与Ki-67(P=0.006，见图3)和p53(P =0.021，见图4)的阳性表达及肿瘤的浸润程度(P=0.024，见图5)相关，而与肿瘤最大直径、分化程度、淋巴结转移、TNM 分期、血清CA19-9 等因素无相关性(P ＞0.05);COX 比例风险回归模型多因素生存分析显示，p53 是影响壶腹癌患者长期生存的独立因素(P=0.015，OR=1.717，见表2)。

图3 壶腹癌患者Ki-67 表达生存曲线图;图4 壶腹癌患者p53 表达生存曲线图;图5 壶腹癌患者肿瘤浸润程度生存曲线图Fig 3 The survival curves of Ki-67 expression of patients with ampullary carcinoma;Fig 4 The survival curves of p53 expression of patients with ampullary carcinoma;Fig 5 The survival curves of tumor invasion of patients with ampullary carcinoma表2 壶腹癌术后多因素生存分析Tab 2 Multivariate survival analysis of patients with ampullary carcinoma after operationP 值 OR 值 95%CI3 讨论Ki-67 基因定位于第10 号染色体，其蛋白产物定位于细胞核，由相对分子质量为345 kD 和395 kD 两条多肽组成，其在细胞有丝分裂G1 后期开始出现，在S 期和G2 期逐渐升高，M 期达到高峰，分裂结束后迅速降解消失，G0 期无表达［3］。

国内外相关研究已发现［4-6］，Ki-67 在结直肠癌、胃癌、乳腺癌等恶性肿瘤中均有过表达，并且与肿瘤的发生、发展、浸润、转移和预后有关。

检测Ki-67 的表达对评价细胞增殖活性和研究肿瘤的生物学行为以及预后具有重要意义。

本研究中，壶腹癌组织Ki-67 阳性率为92.5%，表明壶腹癌细胞广泛处于高增殖活性状态，这与壶腹癌浸润生长的生物学行为密切相关，随着浸润深度的增加，Ki-67 阳性率逐渐升高，这说明Ki-67 的阳性表达越高，其浸润、侵袭能力越强。