霉菌形态观察实验

霉菌的形态观察实验
一．实验目的
1．掌握配制合成马铃薯培养基（PDA）的一般方法。

2．学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。

3．了解并掌握四类霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形态特征。

二．实验原理
1．霉菌
霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。

霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约 3-10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。

观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本节课用载玻片培养观察法。

2．载玻片培养法（小培养法）
用无菌操作将培养基琼脂薄层小块（约1cm2）置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。

培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。

这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。

三．实验器材
1．菌种：曲霉 ( Aspergillus sp. ) ，青霉（Penicillium sp.），根霉( Rhizopus sp. ) 和毛霉（Mucor sp. ）培养 2-5d 的斜面
培养物。

2. 培养基：马铃薯培养基（PDA）
3. 仪器或其他用具：超净台，无菌吸管，接种环，酒精灯，平皿，载玻片，
盖玻片， U 型玻棒，解剖刀，镊子， 50% 乙醇， 20%
的甘油，滤纸片，以及显微镜等。

四．实验步骤
载玻片培养观察法（小培养法）
1．培养小室的准备及灭菌
在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一 U 形玻棒，其上放一块洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后于 110 ℃ 灭菌
20-30min ，不烘干，备用。

2．琼脂块的制作
取已灭菌的马铃薯培养基（PDA）无菌操作注入两个已灭菌平皿中，使之凝固成薄层。

用解剖刀切成 0.5-1cm2的琼脂块，并用镊子将其移
至上述培养小室中的载玻片上（每片放两块 )。

3．接种
无菌操作，用尖细的接种针挑取很少量的菌接种于琼脂块的边上， 用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。

（注：接种量要少，尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察 。

） 4．培养
无菌操作，先在平皿的滤纸上加 3 ～ 5ml 灭菌的 20 ％甘油（用 于保持平皿内的湿度 ) ，盖上皿盖， 28℃ 培养一周（实验条件所限）。

5．镜检
取出培养皿中的载玻片先置于低倍镜下观察，后换高倍镜观察。

五．实验结果记录 1．绘图
毛霉菌 10×10
毛霉菌局部放大图
曲霉菌 10×40 孢囊梗
孢囊孢子
足细胞 分生孢子梗
曲霉菌 10×40
球状顶囊
分生孢子梗
青霉菌 10×10
2．结果记录
表一 实验结果记录表
匍匐菌丝
孢子囊梗
根霉菌 10×10 假根
根霉菌10×40
扫帚状分生孢子
六．思考题
1．黑曲霉和黑根霉在形态特征上有什么区别？
答：根霉菌丝无隔，有匍匐菌丝和假根，曲霉菌丝有隔，且菌丝体分枝，顶囊表面辐射出状生出一层或两层小梗，小梗上有一串串分生孢子。

附：马铃薯培养基（PDA）配方
汁），再加糖和琼脂，溶化后补足水至300ml，pH自然。

110℃下灭菌20-30min。