家兔休克实验自主设计

糖皮质激素及人参皂甙对治疗失血性休克的实验观察08级八年制一大班一小班第1小组，丁家骏、吴炜、项杨威、张赟翔、张嘉惠、王一卉
【实验目的】
1. 学会家兔失血性休克的造模方法。

2. 观察失血性休克各阶段家兔的各项生理指标变化，从而进一步了解休克发生发展的机制及对机体的影响。

3. 观察休克过程中家兔肠系膜微循环变化特点。

4. 探讨糖皮质激素氢化可的松对治疗失血性休克发生，以及人参皂甙在急救治疗中疗效观察。

【实验原理】
失血可使有效循环血量减少。

失血的程度不同，对机体的影响也不同。

少量失血可通过机体的一系列抗损伤措施，使血压不出现明显的降低；当机体快速失血过多、过快时，可超出机体的抗损伤能力，导致休克的发生。

但积极的药物治疗措施和及时的补充循环血量可有效改善血流动力学变化和增强机体的抗休克能力。

休克的淤血缺氧期时微循环血液减慢，毛细血管静水压增高，加之血管壁通透性增加，水与低分子物质大量漏出血管外，使血液浓缩，血液粘稠度增加，红细胞聚集趋向性增加。

平衡盐溶液可补充血容量和稀释血液，使血流加速，从而改善微循环；同时，也能纠正酸中毒，有利于微循环改善和心功能的维持。

糖皮质激素对细胞器有保护作用，还有利于增强应激能力，进而提高了抗休克的能力。

人参皂甙（什么类型？）可抑制心肌膜的过氧化，抑制交感肾上腺髓质过度兴奋性，从而改善微循环，增强心肌收缩力，也能达到抗休克的目的。

【实验材料】
1．实验对象：家兔；
2．实验试剂：25％乌拉坦溶液，0.9％生理盐水，0.7%肝素，乳酸钠林格液1000ml，氢化可的松25mg（5ml），10%葡萄糖溶液，人参皂甙注射液10ml。

（人参皂甙是什么类型？能否静脉注射？注射剂量，请在周一下午告诉我，以便购买。

）
3．实验仪器：铁架台，电子秤，powerlab生物信号采集系统，i-STAT血气分析仪，微循环生物信号处理系统，心电图仪器，体温计1支，手术器械一套，兔手术台，50ml、10ml注射器各1支，5ml、2ml、1ml注射器各2支，及针头8个，血管插管，动脉夹2个，呼吸、血压换能器各1个，输液装置，棉线若干，纱布。

4．手术步骤和失血性实验前各观察指标的准备工作
4.1．称重与麻醉：家兔称重后，将25%乌拉坦溶液以3ml/kg 的体重剂量由兔耳缘静脉内缓慢注入，注射速度不得大于2ml/min，同时密切观察家兔的肌张力和反射等的变化估计合适的麻醉剂用量。

一般地说，当出现耳朵下垂，角膜反射和夹肢反射明显迟钝或消失，四肢瘫软时，即可停用麻醉剂。

4.2．固定：先用绳子系4个活扣，分别套在家兔的四肢上，上肢套在腕关节以上，下肢套在踝关节以上。

2个同学，1个抓住两上肢，1个抓住两下肢，把兔子翻过来，使它腹面朝上，将四肢固定在兔台的金属柱上，最后用粗线绳经兔前牙齿固定在兔台的金属柱上，使家兔的颈部保持平直，有利于手术操作。

4.3．剪毛：手术部位是颈部和腹部，先将两部位的兔毛剪干净。

剪毛的时候，用左手把皮肤绷紧，右手用粗剪刀贴近皮肤剪毛。

4.4．气管插管：颈部剪毛（8×10cm）区，正中切口，切口长约5-7cm，逐层钝性分离组织，暴露出气管并在其下穿一根粗结扎线，在甲状软骨下约1cm处的气管上剪一“┴”形切口，插入Y 形气管插管并结扎固定。

气管插管一端通过压力换能器与PowerLab 10T型生物信号处理系统连接，记录一段正常呼吸曲线。

4.5．分离血管：
4.5.1．双侧颈总动脉分离
在气管的背外侧找到左、右侧颈总动脉，它被包在血管神经鞘里，颈总动脉的特点是搏动明显、粉红色、壁韧，很容易分辨。

细心地分离掉周围组织，游离出一段长约3~4cm的左、右侧颈动脉，下面分别穿两根线备用。

4.5.2．颈外浅静脉分离
颈外浅静脉位于颈部两侧皮下，很容易分辨。

它的特点是壁薄，粗大，色暗，没有明显的搏动。

在左侧部位找到颈外浅静脉后，用血管钳夹钝性分离，尽量游离得长一些（长度约3～4cm），下面穿两根细线备用。

4.6．血管插管：
4.6.1．动脉插管：插管的时候三通管要关闭，该动脉导管已充满0.7％肝素溶液，动脉结扎线提前要湿润一下。

在右颈总动脉的近心端夹一动脉夹，然后结扎其远心端(保留此结扎线头)，在动脉夹与结扎之间一般应相距2cm以上。

在结扎端的下方用眼科剪作一斜口，向心脏方向插入动脉插管，用已穿好的丝线扎紧插入管尖嘴部分稍后处(注意此处务必扎紧)，并以远心端丝线将插管缚紧固定，以防插管从插入处滑出。

随后，打开三通开关与压力换能器相连接。

记录一段正常血压曲线。

用相同的方法在左颈总动脉上插管，完成后用动脉夹夹闭左颈总动脉。

其插管与放血装置相连接，备放血与回输血液之用。

4.6.2．静脉插管：用一丝线将右侧颈外静脉远心端提起，用眼科剪在其下方做一斜口，向心脏方向插入静脉插管，用已穿好的丝线扎紧插入管尖嘴部分稍后处，并以远心端丝线将插管缚紧固定，结扎血管同时防插管从插入处滑出，静脉插管成功后立即注射生理盐水进行充管，防止血
液凝固。

4.7．肠系膜微循环变化观察
在腹部剑突与耻骨之间的中央，沿腹白线作长约10cm的正中切口，打开腹腔。

将曲臂显微镜移至切口最近处，固定曲臂，并在微循环观察水槽内注入加温的生理盐水。

选一段游离度较大的小肠袢（常在左上腹部易于找见），轻轻将其拉出，放在微循环观察水槽内。

打开光源调节钮，调整光亮度，在4倍物镜下，选择微循环血管丰富，血流情况良好，并能观察清晰的部位后，用盖板固定肠系膜（注意肠系膜不可被过度牵拉或受压）。

微循环观察: 选择有代表性的1-3条血管，采用微循环显微镜摄像分析和文字记录微循环血液的流态。

4.8心电图描记操作
取针型电极三枚，分别在二前肢和一后肢远端，刺入皮下。

把心电图线的外屏蔽线（黑色地线）接在下肢，另外二根导线分别接在上肢，以红左黑右为序。

在微机屏幕上观察到心电图中R 波正立、波幅较高而干扰少，表示操作正确无误。

调整测量阈值线，读出心率次数。

5．失血性休克实验的操作与观察步骤
5.1．记录正常呼吸与血压，以及其他生理指标
完成以上步骤后，放开血压换能器侧的颈总动脉夹，观察血压曲线，应当有适当的收缩压和舒张压的差幅波动，如果不明显，应检查导管的畅通性，考察导管有无曲折或导管内有无气泡等情况。

记录一段正常的血压及呼吸（用抓屏方法记录曲线），计数正常的呼吸频率，以及皮肤、黏膜颜色，心电图记录。

5.2．第一次血气分析
打开左侧颈总动脉的动脉夹，弃去最先流出的2、3滴血液后，立即将插管口直接对准电极板芯片的注血口，注入全血到标准刻度，盖上小盖，插入i-STA T血气分析仪，进行血气分析
5.3．微循环观察：
用4倍物镜，观察屏幕上所显示的微循环的状态，选取有微动脉或微静脉存在部位，并有毛细血管网或直接通路开放的区域，用文字笔记来记录微循环血液的流态，红细胞聚集状态，以及选择有代表性的1～3条血管，用文字笔记来描记该血管中血液流速情况，如红细胞聚集状态（休克代偿期，微循环血液灌流量减少，血液流速减慢，轴流消失，血细胞出现齿轮状运动；休克失代偿期，血液流速显著减慢，红细胞聚集，微循环淤血；休克难治期，微循环血栓形成，血流停止）。

5.4．放血引起失血性休克及相关治疗
5.4.1．第1次放血（淤血缺氧期复制）与治疗
由左侧颈动脉缓慢放血（<2ml/min），观察平均动脉压降至原来血压2/3时（休克指数＝脉搏/收缩压>1.5），停止放血，记录失血量和失血时间。

然后，每10min记录动物的体征和各种指标的变化，并观察微循环的血流变化，以及机体是否出现代偿性变化。

当动物皮肤黏膜出现紫
绀，微循环出现血流缓慢、淤血，心电图出现R波压低后，立即进行第二次血气分析。

当确定动物进入淤血缺氧期后，将放出的血液经颈动脉全部回输入动物体内。

输血完成后每10min记录体征和各种指标变化。

当动物呼吸、血压恢复正常后，15min后进行第三次血气分析。

5.4.2．第2次放血后（淤血缺氧期复制）糖皮质激素干预与人参皂甙治疗
第2次放血，经左侧颈总动脉放血使血压水平维持在平静时期的2/3（休克指数＝脉搏/收缩压>1.5）, 记录失血量和失血时间，放血完成后于颈静脉内静脉滴注相当于失血量2倍量的平衡溶液（约55ml），氢化可的松（1.5mg/kg）（约2.25mg）混合溶液，并观察记录动物呼吸、血压、心率、心电图变化，以及微循环变化、皮肤黏膜变化等生理指标。

治疗10min后，在观察记录生理指标后，再从静脉推注入人参皂甙（0.15ml/kg）（约0.22ml）与10%葡萄糖溶液0.15ml。

，随后输入相当于失血量的70%全血（约19ml）。

输血完成10min后测上述各项生理指标。

比较动物复苏速度与第一次治疗有何差异。

当动物呼吸、血压恢复正常后，15min后进行第四次血气分析（如果血气检测片有多余，进行第四次测定）。

【试验结果纪录】
4.1 生理指标
【预期结果】
5.1第一次放血并维持低血压10min，交感-肾上腺髓质系统持续强烈兴奋，血容量持续降低，血压下降，组织器官灌流持续降低，组织持续缺血缺氧，局部代谢产物增多：
A：动脉血压下降，脉搏细数，表情淡漠，甚至昏迷
B：血液流变学变化，白细胞粘附，微循环淤血
C：代谢性酸中毒，血管扩张
D：体温下降
第一次输血后10min后，由于循环血量的及时补充，血压上升，缺血缺氧改善，以上症状ABCD四方面均有所改善，但微循环仍可能出现淤血
5.2第二次放血后，由于血压仍旧降至原来2/3，休克指数>1.5，动物可能出现与第一次放血相类似的症状。

第二次输液先输离子平衡液，可以有效补充细胞外液，维持晶体渗透压，改善微循环，预防休克向DIC发展；血气分析酸碱平衡不发生严重紊乱：糖皮质激素使动物心率减慢，心脏收缩力增强，血压可较第一次更快恢复。

输液后补充血液可补充胶体渗透压，防止水肿的发生。

动物的供氧也可因输血得到恢复，酸碱平衡更趋于正常
5.3治疗休克的主要原则是补充血容量，改善微循环。

根据资料报道，补液的原则应遵循“缺多少，补多少”，失血量2-3倍量的晶体液有助于改善微循环，降低血液粘稠度，但是过多的晶体液会导致胶体渗透压的降低，组织水肿，所以我们考虑再补充胶体液（采用新鲜血液）维持胶体渗透压，同时血液的补充也有利于组织获得氧气，从而达到治疗目的。

氢化可的松等糖皮质激素在分子水平上促进IκB-α基因转录使细胞内IκB-α增加，抑制NF-κB的激活，拮抗全身炎症反应综合症SIRS。

在细胞水平上可使淋巴细胞重分布，抑制花生四烯酸代谢产物、补体C3以及IL-1分泌，对细胞器有保护作用。

糖皮质激素还有利于增强应激能力，纠正酸中毒，抑制β内啡肽的释放，维持心脏功能，上调β肾上腺素能受体密度，提高心血管系统对儿茶酚胺敏感性。

生脉注
射液主要成分为人参和麦冬，具有益气固脱、养阴津、补心气和复脉作用。

现代药理研究表明生脉液具有β一受体激动剂效应，可抑制细胞膜上Na+-K+ -ATP酶活性，从而影响Na+-K+和Na+ -Ca2+交换，使Ca2+内流增多，促使Ca2+收缩蛋白接触浓度增加，增强心肌收缩力；能显著增加冠脉流量，减慢心率，降低肺血管阻力，消除氧自由基，增加心肌灌注，提高心肌抗缺氧能力，旺盛大小循环和冠状循环血行，调整提高血压；能降低血黏度，改善血液高凝倾向，抑制血栓形成，增强组织血液灌注，改善微循环；兴奋肾上腺皮质功能，中枢神经系统和免疫功能，提高机体自稳能力；加强糖皮质激素受体蛋白的合成速度，从而调整全身各脏器的功能。

【参考文献】
[1] 《医学功能学科试验原理与方法》，李稻，人民卫生出版社
[2] 《急诊内科学》，张文武，人民卫生出版社
[3] 《临床休克学》，邓普珍上海科学技术出版社
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[5] 失血性休克动物模型复制及抗休克药物作用观察，Dept. of Pathophysiology, N. Bethune College of Medicine
[6] 失血性休克中医药复合液体治疗的新进展，中国医药导刊，周洋，陈武荣，Volumn11，No10，2009
附
组员名单及联系方式
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