应用表面活性剂及磷脂酶制作猪脱细胞角膜基质的研究
生物表面活性剂磷脂及其应用
到生命 科 学 和脑科 学 的领 域 。磷脂 以它 的特 有功 能 和功 效被 誉 为 “ 大 的 营养师 ”“ 的食物 ” “ 管 伟 、脑 、血
的 清道夫 ” “ 、可食 用 的化妆 品” “ 、 细胞 的保 护神 ” 磷 。
本 文就磷 脂 的结构 、 质 、 性 功能及 大 豆磷脂 的改 性 和磷脂 类 产 品在 医药 、 妆 品 、 化 皮革 等 行业 的应用
国际社会 ２ ０世 纪 ９ ０年代 将磷 脂 的研究 和应 用 发展
用 。 天然皮 革 的加 工过 程 中 ， 在 由于磷脂 具有 天然 油
脂加 脂剂 的性能 ， 对皮 纤维 有润 滑作 用 、 蛋 白质 有 对 增 塑作用 、 皮革 有增 厚作 用 。 对 另外作 为 乳化 剂它 能 使 油脂 易于 渗入 皮 中 ，可 使油 在鞣 制后 的皮 革表 面 和纤 维 问均 匀分 布 ， 予皮 革柔 软 和 良好 的手 感等 ， 赋 作 为皮革 加 工 的基 本 材料磷 脂类 产 品得 到 了广 泛 的
・ ＲＡ ＤＣ Ｅ Ｃ Ｌ Ｅ Ｔ Ｅ Ｎ Ｈ ＭＩ Ａ Ｓ
第２ ９卷
１１ 甘油醇 磷 脂 ． 甘 油醇 磷 脂 酸 （ ｈｓｈｔ ｉＡ ｉ， 称 Ｐ 的衍 Ｐ ｏｐａｉ ｃ ｃｄ简 ｄ Ａ）
生物 。 构成 甘油 醇 磷脂 的醇 是甘 油 ， 的两个 羟 基 为 它 脂 肪 酸所代 替 ；另一 个 为磷 酸及 含 氮碱 类化 合 物 或 肌醇 所取 代 。 甘 油 醇磷脂 主要 有 如下 几种 。
磷 脂 的研 究始 于 ２ 纪 ３ 代 的德 国 ，０年 ０世 ０年 ６ 代 以来 在发 达 国家 已实 现工业 化 生产 ，广 泛应 用在 食品、 医药 、 化妆 品和 工业 助剂 领域 。随着对 磷脂 研 究 和应 用 的深入 发展 ，科 学 界 、实业 界对 磷脂 的 结 构 、 能 功效 和生 理 、 化作 用 的认 识 在逐 步 深 化 。 性 生
脱细胞角膜基质制备方法研究进展
之后 ， 其 改 进 了 方 效果 。 理 想 的 脱 细胞 方 法 的 目的 是 完 全 去 非 离 子 型去 污 剂 是Ｔｒ ｉ ｔ ｏ ｎ Ｘ—ｌ ０ ０ 。 陈 苹 等 】 角膜进 行脱 细胞 处理 。
织中细胞 的细胞膜损伤 ， 并 影 响 细 胞 内 酶 法 仍 有 待 改 进 。 ２． ３ 高渗 溶液 、低 渗 溶液 处理 法 利 用 高 渗 和 低 渗 溶 液 能 够 使 细 胞 内 的
用 的两性 离 子去 污剂 为 Ｃ ＨＡ Ｐ Ｓ 。 但Ｄ ｕ 等川 利 理 想 的 生 物 材 料 ， 具 有 优 良的 生 物 相 容性
要 获 得 比 较 理 想 的 脱 细 胞 用该去 污剂处理 猪角膜 ， 发 现 去 除 角 膜 细 和 组 织 相 容 性 。
碎片。
反 复 冻 融 法 是利 用 低 温 下 细 胞 内部 会 胞 的 效 果 较 差 ， 角 膜 基 质 中 常 会 残 留 细 胞 效 果 ， 同时 最 大 程 度 地 保 留原 有 组 织结 构 ， 通 常需 要 多 种 脱 细 胞 方 法 联 合 应 用 。 建 议 应用最温和 的方法进行处理 ， 从 而 将 脱 细 胞 过程 对 ＥＣ Ｍ的结构、 功能 产 生 的 影 响 降
破 坏 蛋 白一蛋 白之 间的 相 互 作用 ， 具 有 离子
型 及 非离 子 型去 污 剂 的双 重特 性 。 其 中最 常
５ 结语 脱 细 胞 角 膜 基 质是 构 建 组 织 工 程 角 膜
１ 物理制备 方法
１ ． １反 复冻 融法
产生冰 晶 ， 剩 余 的 细 胞 液 由于 盐 浓 度 增 高
脱细胞猪角膜的制备及其生物学性能观察
２． ａ，ｌｗ ｒｔ ａ ｈ ｅ ｓｌ ｔ ｎ ｈ ｏ Ｍ ａ ｕ ｅ ｓ３ ６ ｍＰ ｎ ｓ ． ａ ｈ ｌｓｉ ｄ ｌ ｓｆｒＤＰ ４ ｍＰ ｏ ｅ ｈ ｎ ｔ ｅ ｔｎ ｉ ｓｒ ｇ ｆＨＡ ｍｅ ｓ ｒ ｄ ａ ． ａａ ｄ ＲＣ ａ ５ ｍＰ ．Ｔ ｅｅ ａ ｔ ｍｏ ｕｕ Ｃ ｅ ｅｔ ４ ｃ ｏ Ｗ ． ａ ｎ ｈ ｔｏ Ｓ ａ ３ ８ ｍＰ ，ａ ｄ ｔ ａ ｆ ＨＡＭ ａ ． ８ ｍＰ ，ｂ ｔ ｏ ｅ ｈ ｎ ｔ ａ ｍｅ ｕ ｅ ｒＲＣ ａ ． ａ Ｃｏ ｃｕ ｉ ｎ ＤＰ ｗ ｓ０ ７ ａ ｏｈ ｌｗ ｒｔ ａ ｈ ｔ ａ ｒｄ ｆ ｓ５ ３ ｍＰ ． Ｓ ｏ ｎ ｌ ｓｏ Ｃ ｈ ｖ ｉ ｌ ｐ ｉａ ｒ ｐ ｒ ｅ ｏ ＨＡＭ ，ａ ｄ ｈ ｖ ｉ ｅ ｅ ｔ ｃ ａ ｉａ ｒ ｐ ￣ ｅ ｈ ｔ ｏ ｌ ｉ ｓａ ｄ ｓ ｔ ｒ ． ａ ｅｓ ｍｉ ｏ ｔ ｌ ｐ ｏ ｅ ｔ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｉ ｎ ａ ｅ ｄｆ ｒ ｎ ｍｅ ｈ ｎ ｃ ｐ ｏ ｅ ｉ ｓｔ ａ ｕ ｄ ｗ ｔ ｔｎ ｕ ｕ ｅ ｌ ｃ ｈ
ｗｅ ｅ ｄ ｔｒ ｎ ｄ ｏ ｎ Ｉ ｓｒｎ ｍｉｒ ｅ ｔｒ ｒ ｅｅ ｍｉ ｅ ｎ ａ ｎ ｔｏ ｃｏ ｔｓｅ ，Ｒｅ ｕ Ｉ Ｔ ｅ ＲＩ ｏ Ｐ ａ ． ３ ｓｌ ｓ ｈ ｆ Ｄ Ｃ Ｗ Ｓ １ ３ １ ３。ａ ｄ ｔ ａ ｆ ＨＡＭ ａ ａ ｕ ｅ ｓ ｎ ｈ ｔｏ ｗ ｓ ｍｅ ｓ ｒ ｄ ａ
１３ ２２ Ｒ ．３ 、 Ｃ为 １３ ４０ 透 射 率 Ｄ Ｃ 为 ７ ％ 、 Ｍ 为 ７ ％ 、 Ｃ为 ９ ％ ； 拉 强 度 Ｄ Ｃ 为 ２ ４ ｍ ａ Ｈ Ｍ 为 ３ ６ ．３ ； Ｐ ０ ＨＡ ２ Ｒ ２ 抗 Ｐ ． Ｐ 、 Ａ ． ｍ ａＲ Ｐ 、 Ｃ为 ４ ５ｍ ａ弹 性 模 量 Ｄ Ｃ为 ３ ８ｍ ａＨＡ 为 ０ ７ Ｐ 、 Ｃ 为 ５ ３ｍ ａ ． Ｐ ； Ｐ ． Ｐ 、 Ｍ ．８ｍ ａ Ｒ ． Ｐ 。三 种 材 料 的 折 射 率 相 比 ， Ｐ＞ ００ ；Ｐ ．５ Ｄ Ｃ与 Ｈ Ｍ 的透 射率 相 比 ， Ａ Ｐ＞００ ； 种材 料 的 抗 拉 强 度 和 弹 性 模 量 相 比 ， ．５ 三 Ｐ均 ＜ ．５ ０ ０ 。结 论 成 功 制 备
应用表面活性剂及磷脂酶制作猪脱细胞角膜基质的研究
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｔｏ ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ
ｓｃａｆｆｏｌｄ，ｔｈｅｉｒ ｐｈｙｓｉｃａｌ
ａｃｃｅｓｓ
ｔｈｅ ｂｉｏｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｃｒａｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｓ
ａｎｄ
ｏｆ
ＣＡＣＭ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ａｓｓｅｓｓｅｄ．Ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ａｌｓｏ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ａｖａｉｌａｂｉ！ｉｔｙ ａｎｄ ｄｅｔａｉｌｅｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
设为０．０５％、０．１％及０．５％，作用时问６４，时、１２ｄ，时、２４ｄ，时，亦分为９组：实验
网组一根据对上述实验三组结果的观察，选择浓度为０．Ｉ％ＳＤＳ在３７℃下分别作用
２－９ｄ，时，每ｌ小时作为１个观察点，共分为８组；组织学检查显示以浓度为０．１％ 的ＳＤＳ溶液在３７℃处理７ｄ，时后，角膜原有的三维显微空问结构保留良好，基质片 内无细胞成分残留；遂以此处理条件得到的脱细胞角膜片（ＳＤＳ弋ＡＣＭ组）进行后 续检测； ２．脱细胞角膜基质物理学特性的鉴定：从ＳＤＳ－ＣＡＣＭ，ＡＤＭ－ＣＡＣＭ，ＰＢＳ—ＣＡＣＭ三组 中，每组随机抽取相同厚度的１２只角膜基质片，分别将三组植片固定于紫外一 可见光谱仪密闭的样品仓中，选择２５０ｎｍ－８００ｎｍ作为观测的波长范围，连续测定 两组植片的透光率；每组随机抽取２４只角膜基质，置于５０℃烘箱里烘干２４小 时，电子天平测其恒重Ｇ，后浸入ＰＢＳ缓冲液，在角膜片吸水后的不同时段取出， 称重为Ｇ１；吸水率测量分为二组，每组１２只。第一组测量时间持续２小时，每 问隔ｌＯ分钟测量１次；第二组测量持续时间１２小时，每间隔ｌ小时测量１次， 计算吸水率；上述三组角膜片按ｌｃｍ２试样表面积加ｌＯｍＬ细胞培养液的比例在 ３７。Ｃ的培养箱内浸提２４小时，用ＭＴＴ法评价各组植片对细胞生长活性的影响。 ３．脱细胞基质力学特性的鉴定：模拟正常角膜的结构制作力学模具，从 ＳＤＳ—ＣＡＣＭ，ＡＤＭ—ＣＡＣＭ，ＰＢＳ。ＣＡＣＭ三组和空白组中每组随机抽取１２只角膜 基质，通过充气一破裂实验的结果，选择ＳＤＳ．ＣＡＣＭ，ＰＢＳ—ＣＡＣＭ和空白组角 膜片每组１２只进行应力一应变实验，将拍摄所得数据输入电脑，测量并计算逐渐
脱细胞猪角膜基质的生物相容性与组织工程化兔角膜上皮移植的研究
【Ａｈ咖ｃｔ】 ｏｂｊ∞６ｖｅ Ｔｂ ｅｖａｌｕ砒ｅ ｔＩｌｅ ｂｉｏｃ啪ｐａｔｉｂｉｌｉｔ），ｏｆ ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ ａｃｅｌｌｕｌ盯ｃｏｍｅａｌ ｓ仃ｍ眦，ｔＩＩｅ
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．论著．
脱细胞猪角膜基质的生物相容性与组织 工程化兔角膜上皮移植的研究
房兴峰赵靖史伟云谢立信
【摘要】 目的探讨脱细胞猪角膜基质的生物相容性，评价组织工程化角膜上皮组织作供体的 可行性，观察支架材料的细胞化情况和种子细胞的存活情况。方法实验研究。采用完全随机化设 计的方法，用Ｄｉｓｐ鹊ｅ—Ｔｒｉｔｏｎ．ｘ．１００处理猪角膜基质，脱去角膜细胞；以角膜基质囊袋内植入的方法，观 察异种角膜基质植入后的生物相容性，Ａ组：脱细胞猪角膜基质，Ｂ组：新鲜猪角膜基质，ｃ组：空白对 照组。以组织工程化雄性角膜上皮组织为供体，同种雌性为受体，作板层角膜移植，观察角膜的混浊、 水肿、新生血管等情况；组织病理学和免疫组化方法检测支架材料的细胞化情况：Ｙ染色体性别决定 基因（ＳＲＹ）．聚合酶链反应（ＰｃＲ）方法追踪种子细胞的存活情况。结果猪角膜基质植入兔角膜囊 袋后，角膜逐渐恢复透明，排斥反应指数＜６，组织病理学观察角膜结构完整，胶原纤维平行排列，少许 细胞长人脱细胞猪角膜基质边缘，各组免疫组化检测未见ＣＤ４＋、ｃＤ８＋Ｔ淋巴细胞浸润。组织工程 化角膜上皮作异体板层角膜移植后，３—４ ｄ上皮光滑，１０～２０ ｄ变为透明；１５ ｄ时角膜上皮、基质、内 皮完整，上皮细胞约４或５层结构，少许基质细胞长入支架，１个月时可见角膜上皮细胞约７或８层细 胞，基质纤维排列规则，多量细胞长入脱细胞角膜基质。上皮细胞表达ｃｌ（３，支架内新生细胞表达波 形蛋白。ｓＲＹ—ＰＣＲ结果显示种子细胞可以在受体内长期存活。结论脱细胞猪角膜基质生物相容 性良好，组织工程化角膜上皮可作为板层角膜移植的供体，脱细胞猪角膜基质细胞化良好，种子细胞 可以在受体内长期存活。ｆ中华腰群杂峦，２Ｄ０８，钳：９辫兽记）
从猪主动脉中制备脱细胞基质(ECM)的实验研究
地产 白猪 １ Ｏ头 ， Байду номын сангаас重 ３ ５ ±３ ． ９ ｋ ｇ ， 分为两组 ，
Ｅ Ｃ Ｍ 组 ５头 ， Ｓ Ｉ Ｓ组 ５头 。 肌 注 Ｋｅ ｔ ａ ｍｉ ｎ ｅ （ １ ｍｇ ／
存 活 到 一 个 月 的 ５例 动 物 ， 以 静 脉 注 射 氯 化 钾
膜 以防止 细胞 残 留 。将 主 动 脉 翻转 ， 以 眼科 剪 刀 剪 除 主动 脉外膜 ， 中层平 滑肌 上剪 开尽 可能 多 的小 口 ，
以有机 玻璃 板仔 细 刮 除平 滑 肌 层 ， 保 留完 整 的 猪 主 动脉 Ｅ Ｃ Ｍ。将猪 主动 脉 Ｅ Ｃ Ｍ 三 层折 叠 、 双 面 以玻
除 。肋 间动脉 开 口处 以 １ １ 号 手 术 刀 片仔 细 刮 除 内
Ｅ Ｃ Ｍ 组 ３例动 物顺 利完成 手术 并存 活一 个 月 ， １例术 中死 于 心 室纤 颤 ， 另一 例 术 后一 周死 于 心 力 衰竭 。Ｓ Ｉ Ｓ组 ２例顺 利 完成 手 术 ， ２例 于 术 中 出现 Ｓ Ｉ Ｓ补片缝 合缘 漏血 ， 死 于失血 性休 克 。１例存 活至 术后 ５天 ， 活动 中出现 Ｓ Ｉ Ｓ补片破 裂 而猝死 。
10074287201703048402从猪主动脉中制备脱细胞基质ecm的实验研究薛锦儒冯永刚王图慧韩春山吉林大学中日联谊医院吉林长春130033脱细胞基质亦名细胞外基质ecm是广泛存在于动物组织器官中的纤维组织主要由型胶原丝蛋白纤维素和壳聚集糖等物质构成包括取自小肠的sis和取自膀胱的ubm12
Ｃｈ ｉ ｎ Ｊ Ｌａ ｂ Ｄｉ ａ ｇ ｎ， Ｍａ ｒ ｃ ｈ， ２ ０１ ７， Ｖｏ ｌ ２ １， Ｎｏ ． ３
一种制备脱细胞基质的方法[发明专利]
![一种制备脱细胞基质的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/224c956ebceb19e8b9f6ba86.png)
专利名称：一种制备脱细胞基质的方法专利类型：发明专利
发明人：王智崇,陈冬,武征
申请号：CN200810026972.2
申请日：20080324
公开号：CN101274106A
公开日：
20081001
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种利用磷脂酶制备脱细胞基质的方法，其特征在于：待用组织器官预处理；待用组织器官加入到包含有磷脂酶的溶液中，在受控条件下制备脱细胞基质；洗涤制备的脱细胞基质。
本发明可获得具有良好物理学性状和生物学功能的脱细胞基质，不但是组织工程的重大突破，也直接为临床疾病的治疗开拓了新途径。
本发明原理可靠，工艺简易灵活，产品重现性好，极易实现产业化。
申请人：中山大学中山眼科中心
地址：510060 广东省广州市先烈南路54号
国籍：CN
代理机构：广州华进联合专利商标代理有限公司
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脱细胞角膜基质的制备及其超微结构
脱细胞角膜基质的制备及其超微结构
脱细胞角膜基质是一种由角膜细胞分泌的复杂的结构，它是角膜的主
要组成部分，主要由蛋白质、糖蛋白、细胞外基质和细胞内基质组成。
脱细胞角膜基质的制备是角膜研究的重要环节，它可以帮助我们更好
地了解角膜的结构和功能。
脱细胞角膜基质的制备主要包括两个步骤：细胞溶解和细胞悬液凝固。
首先，将角膜细胞悬液加入溶解剂，如溴化钠或溴化钾，使细胞膜破裂，释放出细胞内的蛋白质和糖蛋白，形成细胞悬液。
然后，将细胞
悬液加入凝固剂，如乙醇或乙醚，使其凝固，形成脱细胞角膜基质。
脱细胞角膜基质的超微结构可以通过显微镜观察。
它由蛋白质、糖蛋白、细胞外基质和细胞内基质组成，其中蛋白质和糖蛋白是角膜细胞
分泌的，细胞外基质是由细胞外基质分子组成的，而细胞内基质是由
细胞内基质分子组成的。
蛋白质和糖蛋白主要由多肽链组成，细胞外
基质主要由纤维素、凝胶蛋白、糖原和细胞外基质分子组成，而细胞
内基质主要由细胞内基质分子组成，如细胞膜蛋白、细胞膜糖蛋白、
细胞膜糖原和细胞膜脂质等。
脱细胞角膜基质的制备及其超微结构的研究对于更好地了解角膜的结
构和功能具有重要意义。
它可以帮助我们更好地了解角膜的结构和功能，从而为角膜疾病的治疗提供有效的指导。
此外，脱细胞角膜基质
的制备及其超微结构的研究还可以为角膜移植提供有效的指导，从而
改善角膜移植的成功率。
一种脱细胞角膜基质及其制备方法
（19）中华人民共和国国家知识产权局（12）发明专利申请（10）申请公布号CN104001215A（43）申请公布日 2014.08.27（21）申请号CN201410264542.X（22）申请日2014.06.13（71）申请人深圳艾尼尔角膜工程有限公司地址518000 广东省深圳市龙岗区布吉街道甘李工业园甘李六路12号中海信科技园厂房第1栋B座101-102（72）发明人王维博;张斌（74）专利代理机构深圳市世纪恒程知识产权代理事务所代理人胡海国（51）Int.CI权利要求说明书说明书幅图（54）发明名称一种脱细胞角膜基质及其制备方法（57）摘要本发明公开了一种脱细胞角膜基质及其制备方法，所述脱细胞角膜基质的制备方法包括以下步骤：A、将摘取的动物角膜放入水中，振荡处理，以使上皮层脱落；B、将水更换为脱细胞试剂，振荡处理，期间，所述脱细胞试剂和水交替使用，以使基质细胞和内皮细胞脱落；C、加入脱水剂，静置或振荡处理，得到脱细胞角膜；D、将所述脱细胞角膜进行削切，得到脱细胞角膜基质，所述脱细胞角膜基质只含有前弹力层和基质层；其中，所述脱细胞试剂含有NaCl和EDTA，所述脱水剂含有甘油。
本发明提供的脱细胞角膜基质的制备方法，能有效的去除容易引起免疫反应的角膜细胞成分和可溶性蛋白，得到完好的只含有前弹力层和基质层的脱细胞角膜基质。
法律状态法律状态公告日法律状态信息法律状态2014-08-27公开公开2014-09-24实质审查的生效实质审查的生效2015-07-08授权授权2016-11-16著录事项变更著录事项变更权利要求说明书一种脱细胞角膜基质及其制备方法的权利要求说明书内容是....请下载后查看说明书一种脱细胞角膜基质及其制备方法的说明书内容是....请下载后查看。
猪角膜脱细胞基质的制备及生物相容性的实验研究
猪角膜脱细胞基质的制备及生物相容性的实验研究陈苹;傅瑶;范先群【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2006(024)004【摘要】目的探讨猪角膜脱细胞基质(CACM)的制备方法,评价其组织学特性和生物相容性.方法应用1%TritonX-100去垢剂振洗,经冷冻干燥处理得到猪CACM,通过苏木精-伊红染色、扫描电镜观察行组织学检测.将猪CACM植入兔角膜板层间观察10周,取材做组织切片,评价其生物组织相容性.结果组织学检测证实角膜细胞完全脱净,胶原纤维排列疏松,板层结构同正常角膜;扫描电镜CACM表面未见细胞结构,纵切面上胶原板层间出现清晰的空穴状裂隙;CACM植入兔角膜层间后,观察期内未见明显排异反应.结论 TritonX-100可以有效地脱净角膜细胞,保存胶原排列的结构特征,经过冷冻干燥可形成多孔隙且胶原排列疏松的板层结构,适合作为载体材料,猪CACM与兔角膜生物相容性好.【总页数】4页(P367-370)【作者】陈苹;傅瑶;范先群【作者单位】上海仁济医院眼科;200011,上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科;200011,上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科【正文语种】中文【中图分类】R77【相关文献】1.猪脱细胞角膜基质组织结构特点与生物相容性研究 [J], 许永根;黄琛;李颖;冯云;曲洪强;王薇2.猪脱细胞角膜基质组织结构特点与生物相容性研究 [J], 许永根;黄琛;李颖;冯云;曲洪强;王薇3.以猪角膜脱细胞基质为载体培养猫骨髓内皮祖细胞构建角膜后板层的实验研究[J], 邵春益;傅瑶;陆雯娟;李瑾;范先群4.脱细胞猪角膜基质支架的制备及其生物相容性 [J], 霍银平;周利晓;孙成林5.脱细胞猪角膜基质支架的制备及其生物相容性 [J], 霍银平;周利晓;孙成林;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脱细胞猪角膜表面基底膜成分的检测
脱细胞猪角膜表面基底膜成分的检测林旭初;金岩;惠延年【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2012(016)025【摘要】BACKGROUND: The previous experiments have suggested that the acellular porcine cornea stroma (APCS) has a good compatibility and can support the growth of keratocytes and skin epithelial cellsOBJECTIVE:To detect whether the important structure for the grwth of corneal cells basement membrane canbe preserved on the surface of the APCSMETHODS: Fluorescent antibody was used to detect the basement membrane component (laminin and collagen IV) by immunohistochemistry Fluorescence microscopy was observed whether the basement membrane could be preserved on the surface oftheAPCS RESULTS AND CONCLUSION:Immunofluorescence staining showed that larnimn and collagen IV positively expressedthe APCS can preserve the natural basement membrane component of the cornea which is beneficial to the growth of comeal epithelial cells%背景:前期实验显示脱细胞猪角膜具有良好的组织相容性,可以支持角膜细胞和皮肤上皮细胞的生长.目的:检测脱细胞猪角膜是否保存了利于角膜上皮细胞生长的重要组织结构-基底膜.方法:利用荧光抗体对脱细胞猪角膜表面的基底膜成分(层粘蛋白和Ⅳ型胶原)进行免疫组织化学检测,荧光显微镜下观察脱细胞猪角膜表面是否保存了基底膜成分.结果与结论:免疫荧光染色显示脱细胞猪角膜前基质表面层粘蛋白和Ⅳ型胶原呈阳性表达,与新鲜猪角膜表面基底膜的荧光表达相同,表明脱细胞猪角膜保存了利于角膜上皮细胞生长的基底膜.【总页数】4页(P4682-4685)【作者】林旭初;金岩;惠延年【作者单位】解放军303,医院眼科,广西壮族自治区南宁市530021;解放军第四军医大学口腔医院组织工程研究中心,陕西省西安市710032;解放军第四军医大学西京医院眼科,陕西省西安市710032【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.使用猪角膜脱细胞基质的人板层角膜移植治疗真菌性角膜炎的临床观察 [J], 廖福红;余自忠;胡斌2.脱细胞猪角膜表面基底膜成分的检测 [J], 林旭初;金岩;惠延年3.猪脱细胞角膜基质人板层角膜移植术后植片上皮化的临床观察 [J], 段虎成;陈瑞;罗嘉婧4.利用猪角膜脱细胞基质行板层角膜移植手术治疗感染性角膜炎的临床研究 [J], 范祥雨;黄霏霏;张朝然;徐建江;项俊5.脱细胞猪角膜基质的基底膜在修复兔角膜损伤中的作用 [J], 林旭初;惠延年;孟浩;张勇杰;金岩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
磷脂酶a2脱细胞方法制备的组织工程角膜支架
磷脂酶a2脱细胞方法制备的组织工程角膜支架近年来，眼科技术及抗疾病干预在科学研究中取得了巨大进展。
组织工程角膜支架是一种具有良好生物耐受性、坚韧性和可靠性的人工角膜，用于修复角膜组织损伤所需的替代组织。
磷脂酶A2 (PLA2)的脱细胞方法具有简单、快速、无毒、绿色环保等特点，可以特异性地脱离细胞壁上的多糖类抗原，产生大量的磷脂酶A2，使组织工程的理论及研发有了新的突破。
角膜损伤由于其复杂多变的病因往往是眼科常见病，对患者造成残疾。
组织工程技术是眼科疾病治疗的一个新领域，它具有无痛、无副作用、无细菌感染、不引起免疫抗体的优势。
PLA2的脱细胞方法可以解决传统的植入组织工程角膜支架技术中的困难和不足，提高组织工程角膜支架的适用性、安全性和可靠性。
PLA2的脱细胞方法由以上述原理和细胞活性物质构成，可以脱离角膜组织特异性多糖类抗原，使角膜组织重新具备自主活性，从而恢复其原来的功能，为患者提供有效的治疗服务。
同时，PLA2的脱细胞方法可以明显改善角膜缺血、炎症及模仿功能疾病的病理症状，促进角膜组织的修复，并有效的改善角膜的生物力学功能，减少角膜的损伤。
PLA2的脱细胞方法可以显著提高角膜组织工程支架的力学和生物学特性，使得组织工程角膜支架能够更好地与角膜组织结合，并获得良好的生物耐受性。
此外，PLA2脱细胞方法还可以提高植入组织工程角膜支架的抗氧化能力，降低因外源的氧化作用而导致的大脑和眼睛疾病的发生，促进角膜组织的健康，有利于保护和改善眼睛的视力。
PLA2的脱细胞方法在组织工程角膜支架的研发中发挥了重要作用，它不仅可以加强角膜组织的生物学性能，而且可以改善其力学特性，为眼科损伤疗法提供了新的空间，使角膜更好地与组织支架结合，从而获得长期和持久的治疗效果。
PLA2脱细胞方法还可以促进植入组织工程的角膜支架的抗氧化能力和耐受性，使组织工程角膜支架能够更好地适应眼科损伤疗法，从而为患者带来更多的希望。
综上所述，PLA2的脱细胞方法能够改善角膜组织结构、增强其抗氧化能力，为组织工程角膜支架研发奠定了基础，它有望成为眼科技术和组织工程技术发展的有利方法。
脱细胞猪角膜的制备及其生物学性能观察
脱细胞猪角膜的制备及其生物学性能观察郭梁;刘源;张勇杰;赵宇【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2010(50)42【摘要】目的制备脱细胞猪角膜(DPC)并观察其生物学性能.方法用高渗盐溶液浸泡、低浓度酶消化、冻干的方法制备DPC.对比观察DPC、人羊膜(HAM)、兔角膜(RC)的光学特性和机械强度,阿贝折射仪测量折射率,PE分光光度计测量透射率,小型英斯特朗仪测量抗拉强度和弹性模量.结果折射率DPC为1.331 3、HAM为1.332 2、RC为1.334 0;透射率DPC为70%、HAM为72%、RC为92%;抗拉强度DPC为2.4 mPa、HAM为3.6 mPa、RC为4.5 mPa;弹性模量DPC为3.8 mPa、HAM为0.78 mPa、RC为5.3 mPa.三种材料的折射率相比,P＞0.05;DPC 与HAM的透射率相比,P＞0.05;三种材料的抗拉强度和弹性模量相比,P均＜0.05.结论成功制备了DPC,DPC具备与HAM相似的光学特性,DPC有其自身独特的力学特性,能耐受手术缝合.【总页数】2页(P4-5)【作者】郭梁;刘源;张勇杰;赵宇【作者单位】山东大学齐鲁医院,济南250012;中国人民解放军第四军医大学组织工程中心;中国人民解放军第四军医大学组织工程中心;中国人民解放军第四军医大学组织工程中心【正文语种】中文【中图分类】R312%R318.08%R772.2【相关文献】1.使用猪角膜脱细胞基质的人板层角膜移植治疗真菌性角膜炎的临床观察 [J], 廖福红;余自忠;胡斌2.猪脱细胞角膜基质的制备及组织学特征观察 [J], 林旭初;惠延年;孟浩;张勇杰;金岩3.脱细胞猪角膜基质支架的制备及其生物相容性 [J], 霍银平;周利晓;孙成林4.脱细胞猪角膜基质支架的制备及其生物相容性 [J], 霍银平;周利晓;孙成林;5.猪脱细胞角膜基质人板层角膜移植术后植片上皮化的临床观察 [J], 段虎成;陈瑞;罗嘉婧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脱细胞猪角膜基质治疗真菌性角膜炎患者的护理
脱细胞猪角膜基质治疗真菌性角膜炎患者的护理
洪欢;薛朝华;刘乔容
【期刊名称】《护理学杂志》
【年(卷),期】2016(031)006
【摘要】目的总结脱细胞猪角膜基质（APCS）治疗临床真菌性角膜炎患者的护理经验。
方法对13例真菌性角膜炎患者用APCS行板层角膜移植术,配合关怀护理,包括术前心理护理、安全护理;术后密切观察病情变化,加强眼部护理、心理护理、健康指导及出院随访等措施。
结果 13例患者术后眼部刺激症状得到缓解,角膜植片均在7d内全部上皮化且随术后时间推移逐渐变得透明;术后6个月,11例患者较术前视力提高了2行以上,2例视力保持不变;所有病例均无真菌感染复发征象。
结论精细的护理有利于促进APCS行板层角膜移植术的真菌性角膜炎患者的康复。
【总页数】3页(P39-41)
【作者】洪欢;薛朝华;刘乔容
【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科,湖北武汉430022
【正文语种】中文
【中图分类】R473.77
【相关文献】
1.脱细胞猪真皮基质治疗患者深二度烧伤的观察与护理 [J], 黄守春;冯祥生
2.脱细胞猪角膜基质治疗真菌性角膜炎患者的护理 [J], 洪欢;薛朝华;刘乔容
3.飞秒激光辅助脱细胞猪角膜移植术治疗真菌性角膜炎的护理 [J], 薛朝华;邢育珍
4.37例真菌性角膜炎患者行飞秒激光辅助脱细胞猪角膜基质移植术的护理 [J], 薛朝华;邢育珍
5.脱细胞猪真皮基质与自体刃厚皮复合移植治疗瘢痕畸形患者的护理分析 [J], 黄守春
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ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后，角膜内的细胞即使足作用２４ｄｘ时之后仍有残留：较高浓度
ＳＤＳ（０．１％和０．５％）在室温卜．处理的角膜虽在２４ｄ，时后细胞可完全脱去，但角膜 的胶原板层结构亦受到严重破坏，而低浓度０．０５９６的ＳＤＳ却无法将角膜内的细胞完 全脱去。 ２．提高处理溶液温度至３７℃作用７小时后，浓度为０．１９６的ＳＤＳ且Ｐ可将角膜基质片内
设为０．０５％、０．１％及０．５％，作用时问６４，时、１２ｄ，时、２４ｄ，时，亦分为９组：实验
网组一根据对上述实验三组结果的观察，选择浓度为０．Ｉ％ＳＤＳ在３７℃下分别作用
２－９ｄ，时，每ｌ小时作为１个观察点，共分为８组；组织学检查显示以浓度为０．１％ 的ＳＤＳ溶液在３７℃处理７ｄ，时后，角膜原有的三维显微空问结构保留良好，基质片 内无细胞成分残留；遂以此处理条件得到的脱细胞角膜片（ＳＤＳ弋ＡＣＭ组）进行后 续检测； ２．脱细胞角膜基质物理学特性的鉴定：从ＳＤＳ－ＣＡＣＭ，ＡＤＭ－ＣＡＣＭ，ＰＢＳ—ＣＡＣＭ三组 中，每组随机抽取相同厚度的１２只角膜基质片，分别将三组植片固定于紫外一 可见光谱仪密闭的样品仓中，选择２５０ｎｍ－８００ｎｍ作为观测的波长范围，连续测定 两组植片的透光率；每组随机抽取２４只角膜基质，置于５０℃烘箱里烘干２４小 时，电子天平测其恒重Ｇ，后浸入ＰＢＳ缓冲液，在角膜片吸水后的不同时段取出， 称重为Ｇ１；吸水率测量分为二组，每组１２只。第一组测量时间持续２小时，每 问隔ｌＯ分钟测量１次；第二组测量持续时间１２小时，每间隔ｌ小时测量１次， 计算吸水率；上述三组角膜片按ｌｃｍ２试样表面积加ｌＯｍＬ细胞培养液的比例在 ３７。Ｃ的培养箱内浸提２４小时，用ＭＴＴ法评价各组植片对细胞生长活性的影响。 ３．脱细胞基质力学特性的鉴定：模拟正常角膜的结构制作力学模具，从 ＳＤＳ—ＣＡＣＭ，ＡＤＭ—ＣＡＣＭ，ＰＢＳ。ＣＡＣＭ三组和空白组中每组随机抽取１２只角膜 基质，通过充气一破裂实验的结果，选择ＳＤＳ．ＣＡＣＭ，ＰＢＳ—ＣＡＣＭ和空白组角 膜片每组１２只进行应力一应变实验，将拍摄所得数据输入电脑，测量并计算逐渐
二烷基磺酸钠ＳＤＳ及ＴｒｉｔｏｎＸ—ｌｏｏ）和磷脂酶Ａ：（ＰＬＡ２）处理猪角膜组织，以不同
浓度和作用时间分组，确定能够脱去角膜各层内的细胞同时可以最大限度保持角 膜基质空间结构的处理条件作为合理的角膜脱细胞作用条件；通过对完成脱细胞 的角膜基质其物理学特性及生物学特性的检测，探讨脱细胞基质作为角膜组织工 程支架材料的可行性及安全性；将脱细胞基质植入兔角膜层间，观察术后角膜透
明性的恢复，探讨该种基质作为角膜修复材料的有效性及其具体的作用机制，最
终为眼表损伤的治疗提供科学的实验依据。
方
法
１．借助阴离子表面活性剂进行猪角膜脱细胞基质的制备及最佳处理方案的确定： 取新鲜猪角膜若干，分别用ＳＤＳ及ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理，共分为四组：实验一组（脱
细胞真皮ＡＤＭ—ＣＡＣＭ组）—借鉴真皮组织脱细胞的方法对角膜进行处理；实验二组
◇中山大学博士学位论文
应用表面活性剂及磷脂酶制作猪脱细胞角膜基质的研究
（ＴｒｉｔｏｎＸ－１００组）一单独使用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理角膜片，溶液浓度设定为０．１％、
０．２５％及０．５％，作用时间为６ｄ，Ｈ寸、１２ｄ＂时及２４ｄ，时；以不同的浓度及作用时间进
行组合，共分为９组；实验｛组（ＳＤＳ组）一室温．卜．使用ＳＤＳ处理角膜，溶液浓度
◇中山大学博士学位论文
应用表面活性剂及磷脂酶制作猪脱细胞角膜基质的研究
应用表面活性剂及磷脂酶制作猪脱细胞角 膜基质的研究
中山大学中山眼科中－心
专 业
眼 周
科学 杨
博士研究生
导 师
王智崇教授
摘
目
要
的
本研究旨在探索制作天然脱细胞角膜基质的方法和可行性，为组织工程提供 理想的载体材料和眼表组织修复提供理想的修复材料。通过应用表面活性剂（十
材料植入手术，阴性对照组３０只眼，右眼仅行角膜基质板层分离术。异种植片 植入术后每日以裂隙灯观察术眼眼表情况、切口处的恢复以及脱细胞植片和宿主
ＩＩ
◇中山大学博士学位论文
应用表面活性剂及磷脂酶制作猪脱细胞角膜基质的研究
角膜透明度的恢复。于术后Ｉ周、２周、３蒯、４周随机处死实验组及对照组每 组各２０只兔子，制成石蜡标本行光学显微镜观察，监测术后植片４ｊ宿辛的牛物 卡Ｈ容性及透明度变化。取上述两组石蜡标本制成６
液）。用含抗生素的碳酸盐缓冲液清洗角膜，后转移至纯水中浸泡ｌ小时。３７℃
水浴震荡卜，浸入脱细胞溶液Ｉ处理６小时。后经碳酸盐缓冲液冲洗，用脱细胞 溶液ＩＩ处理２小时。最后再以碳酸盐缓冲液清洗样本，４℃无菌条件＋Ｆ保存备用。
结
果
１．借助脱真皮细胞的方法处理猪角膜后，角膜高度水肿，透亮度显著降低，虽细 胞可被完全脱去，胶原板层结构却遭到很大程度的破坏；经不同浓度的
ｌａ
ｍ切片，行人狼犀红一箭味
酸染色，偏光显微镜’卜．观察术后卜４周宿丰角膜基质与植片角膜荩质内Ｉ型及ＩＩＩ 型胶原的数量变化，定性分析两种类型胶原在角膜创伤修复过程中的动态演变。 异种植片植入术后１月、４月、７月及１１月，处死动物实验组及对照组每组剩余 的１０只兔子，取其术眼行透射电子显微镜观察植入术后胶原纤维极层的排列情 况，计算移植术后胶原纤维的直径及纤维之问的间距变化。 ５．利用磷脂酶制作猪角膜脱细胞基质：制备碳酸盐缓冲液及脱细胞溶液Ｉ（含 ＰＬＡ２及脱氧胆酸钠的碳酸盐缓冲液）和脱细胞溶液ＩＩ（仅含ＰＩ。Ａ２的碳酸盐缓冲
加压后角膜中央区标记范围内的面积变化，计算在５、１５、３０、５０ｍｍｌｔｇ压力差（Ｐ’）
时角膜片面模量（Ｅ）的变化，分析并比较不同组别角膜植片的应力一应变关系的差 异。
４．异种角膜基质层问植入术后透明性的恢复：成年新西兰大白兔６０只，
ＳＤＳ—ＣＡＣＭ组脱细胞角膜片３０只，实验组３０只眼，右眼行角膜基质层间异种
的细胞完全脱除，而同时原有的三维显微空间结构仍保留良好，因此选取该实验
条件作为后续角膜脱细胞的方法，并对该方法制作的角膜片（ＳＤＳ＿ＣＡＣＭ组）进行 深入的检测；
３．与脱真皮细胞方法制作的角膜相比，通过ＳＤＳ处理的角膜水肿较轻，透亮度尚