凝胶层析的原理
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凝胶层析的原理
凝胶层析是一种色谱分离技术,其原理基于分子在凝胶基质中的分布差异。
凝胶层析通常使用高分子化合物(例如琼脂)作为固定相,将其溶解在适当的缓冲液中形成凝胶状。
待凝胶固化后,待测样品被加入凝胶的顶端。
根据样品分子的大小、形状以及蓝移或红移的趋势,分子会在凝胶中以不同速率迁移。
当分子在凝胶层析中进行迁移时,其中较小的分子往往可以更快地穿越凝胶,因为它们能更容易地适应凝胶中更大的孔隙。
而较大的分子会受到凝胶孔隙的阻碍,导致迁移速度较慢。
因此,通过观察样品分子在凝胶中的迁移位置,可以推断出它们的大小或分子量。
凝胶层析的选择性可以通过改变凝胶材料的性质来调节。
例如,聚丙烯酰胺凝胶通常用于较小分子的分离,而琼脂糖凝胶则常用于分离较大的DNA分子。
此外,通过选择合适的缓冲液
pH值和离子强度,也可以调节分子之间的电荷作用,从而影
响其在凝胶中的迁移行为。
凝胶层析在生物化学、生物医学和药物研究等领域广泛应用。
它可以用于分离和纯化蛋白质、核酸以及其他生物分子,也可用于测定样品中特定分子的相对含量。
凝胶层析是一种简单、经济且可靠的分离技术,因此在实验室中得到广泛应用。