实验室微生物菌种分离方法!

实验室微生物菌种分离方法！
纯种分别从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物
的过程称为微生物分别与纯化。

在分子生物学的讨论及应用中，不
仅需要通过分别纯化技术从混杂的自然微生物群中分别出特定的
微生物，而且还必需随时留意保持微生物纯培育物的"纯净'，防止
其他微生物的混入。

纯种分别的目的是将目的菌从混杂的微生物中分别出来，获得纯
培育。

假如样品没有经增殖培育而直接进行分别，那么要得到具有某一
特性的纯种，就更该细致、谨慎的操作。

纯种分别的常用方法有4种：倾注平板分别法、涂布平板分别法、平板划线分别法和组织分别法。

1、倾注平板分别法：培育后，在培育基内部及表面形成单菌落。

倾注平板法:将无自生理盐水稀释后的样品加入无茵培育基混合匀称。

待凝固后倒置培育，内部及表面形成单自落。

2、涂布平板分别法：培育后，在培育基表面形成单菌落。

由于将
微生物悬液先加到较烫的培育基中再倒平板易造成某些热敏感菌的
死亡，且采纳稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂
中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学讨论中常用的纯种分
别方法是涂布平板法。

用途：一般多用于菌种的纯化；
优点：可以观看菌落特征，对混合菌进行分别；
缺点：不能计数；
掌握每个平板中微生物的菌落数在肯定的范围可获得抱负的分别
效果，对于细菌和酵母，以每平板10~200菌落为佳，对于丝状菌，
则应掌握每平板菌落数30~50或更少。

假如分别菌丝呈扩散性生长的丝状菌如根霉、毛霉等，则可以在
培育基中添加0.1%左右的去氧胆酸钠（去氧胆酸钠在低PH下灭菌
过程中易形成絮状沉淀，可以通过分别灭菌、倾注平板前混合的方
法避开）或山梨糖（在察氏培育基中加山梨糖0.1%，蔗糖0.01%），这样可防止菌丝扩散，便于挑取。

3、平板划线分别法：能达到纯种分别的目的。

经培育后会得到呈
分散状态的单菌落纯培育。

最简洁的分别微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样
品在固体培育基表面多次作"由点到线'稀释而达到分别目的的。

划
线的方法许多，常见的比较简单消失单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途：一般多用于筛选菌株；用于平板培育基的回收率计数。

优点：可以计数，可以观看菌落特征。

缺点：汲取量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，简单扩散。

假如菌液密度大的话，长不出单菌落。

4、组织分别法：适用于从子实体或罹病的植株上分别高等真菌或植
物致病菌。

分别时，切取小块受病组织，用10%漂白粉水或0.1%升汞液进行表面消毒，并用无菌水洗涤数次后，移置于培育皿中的琼脂培育基表面上，在相宜的温度条件（25℃~26℃）培育。

受病组织内埋伏的微生物开头生长，经3~5天后，就可以看到从受病组织四周长出菌丝，并向外扩展。

经菌落特征的观看和镜检，确认是所需分别的菌种时，即用火焰灭菌的接种针从边缘挑取少量菌体，移到斜面培育基中培育。

与增殖培育一样，在纯种分别时同样也要依据实际状况对培育基的养分成分和培育条件进行适当的掌握，以获得良好的分别效果。