大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
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• （3）洗脱 将色谱柱活塞打开，洗脱剂为石油醚 （沸程60-90℃）-乙酸乙酯（15∶1）混合液。
• （4）收集 洗脱液25ml一份，分别收集，回收溶 剂至小体积，放置，即可析出结晶，合并相同晶 形部分。先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下 的化合物为大黄素甲醚。
• 三、鉴定
• 1、蒽醌类成分化学鉴定
• 仪器：回流装置一套、蒸发皿、层析槽、试管、梨 形分液漏斗、水浴锅、电炉、薄层板、点样毛细管 等
• 实验内容与方法：
• 一、游离蒽醌的提取
• 称取大黄粗粉50g，加20%硫酸溶液50ml， 充分搅拌混匀，加氯仿200ml，热水浴上回 流提取1小时，过滤得氯仿滤液。药渣继用 氯仿200ml回流1小时，过滤，合并两次氯 仿提取液于圆底烧瓶中，加沸石数粒，水 浴上蒸馏回收氯仿至200毫升（可减压抽干 氯仿）。
• 2. 大黄素的分离和精制：用碳酸氢钠液萃 取后的氯仿液加5%碳酸钠溶液萃取数次 （每次20～30m1），（方法同上述碳酸氢 钠溶液的处理）。萃取液经酸化后析出棕 黄色沉淀，过滤，水洗沉淀物至洗出液呈 中性，沉淀经干燥后，用15ml丙酮热溶， 趁热过滤，滤液静置，析出橙色针状结晶， 过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
• 5.柱层析法分离大黄酚和大黄素甲醚
• （1）装柱 取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台 上，在管的下端垫入少量棉花，装入100～200目 硅胶（约1/3高，湿法装柱）。
• （2）上样 将样品置于小蒸发皿中，用少量石油 醚分散，另加用3倍量硅胶拌和均匀，并于水浴上 缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱 柱的上端，并盖一圆形滤纸。
• 3. 芦荟大黄素的分离和精制：用碳酸钠液 萃取后的氯仿液加0.25%氢氧化钠溶液萃取 数次（每次20～30m1），（方法同上述碳 酸氢钠溶液的处理）。萃取液经酸化后析
出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥， 用10ml乙酸乙酯精制，得黄色针晶的芦荟 大黄素。
• 4.大黄酚和大黄素甲醚的分离和精制：萃取 除去芦荟大黄素后余下的氯仿层，再用5% 氢氧化钠溶液200ml分两次萃取，至碱水液 呈无色为止，合并碱水层，加盐酸至呈酸 性（PH2～3），析出黄色沉淀，过滤，水 洗至中性，干燥，为大黄酚和大黄素甲醚 的混合物。将此混合物溶于乙酸乙酯，用 硅胶柱色谱分离。
• 二、PH梯度萃取分离
• 1.大黄酸的分离和精制：将含有总蒽醌的氯 仿液放入分液漏斗中，加5%碳酸氢钠溶液 萃取数次（每次20～30m1），至萃取碱水 液呈淡红色为止。合并萃取碱液，加盐酸 至呈酸性（PH2～3），析出黄色沉淀。过 滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性。 干燥后加冰醋酸10ml加热溶解，趁热过滤， 滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗 结晶，得黄色针状结晶为大黄酸。
• 对照品的处理：取牛黄上清丸制剂（含大黄）3克,切碎,加 甲醇50m1冷浸24小时,过滤,取滤液5 m1蒸干,残渣加水 10m1使溶解,加盐酸1m1,置水浴上加热30分钟,冷却,用乙 醚20 m1分两次萃取,合并乙醚液,蒸干,残渣加乙酸乙酯使 溶解成1m1,为供试品溶液。
• 吸附剂：硅胶G-CMC-Na板
OH O OH
R1
R2
O
大黄酸 大黄素 芦荟大黄素 大黄素甲醚 大黄酚
R1=H R1=CH3 R1=CH2OH R1=CH3 R1=CH3
R2=COOH R2=OH R2=H R2=OCH3 R2=H
• 实验器材：
• 试药：大黄粗粉、牛黄上清丸、含水氯仿（水饱 和）、甲醇、乙醚、20%硫酸溶液、冰醋酸、5% 碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、0.25%氢氧化钠 溶液、5%氢氧化钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、 醋酸镁、柱层析用硅胶（100～200目）、硅胶CMC硬板、石油醚（沸程60-90℃）-乙酸乙酯 （15∶1）、石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸（15∶5∶1） 等
萃取除去芦荟大黄素后余下的氯仿层再用5氢氧化钠溶液200ml分两次萃取至碱水液呈无色为止合并碱水层加盐酸至呈酸性ph23析出黄色沉淀过滤水洗至中性干燥为大黄酚和大黄素甲醚洗至中性干燥为大黄酚和大黄素甲醚的混合物
大黄中蒽醌类成分的提取、 分离和鉴定
• 实验原理：
• 本实验根据大黄中的蒽醌苷类在酸性条件 下加热，可水解成游离羟基蒽醌和糖，而 游离羟基蒽醌不溶于水，可溶于乙醚、氯 仿等亲脂性有机溶剂的性质，从水解物中 将游离羟基蒽醌提出。再利用游离羟基蒽 醌的酸性不同，采用PH梯度萃取法将其分 离。
• （1）碱液试验 分别取各蒽醌结晶数毫克置于小 试管中，加2%氢氧化钠溶液1ml，观察颜色变化。 凡有互为邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色， 其它羟基蒽醌呈红色。
• （2）醋酸镁试验 分别取蒽醌结晶数毫克，置于 小试管中，各加乙醇1ml使溶解，滴加0.5%醋酸 镁乙醇溶液，观察颜色变化。
• 2、薄层层析检识
谢谢大家聆听！酸（15∶5∶1）上层溶液
• 点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大 黄素甲醚的醇溶液及处理后的牛黄上清丸的醇溶液
• 显色剂：自然光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后 再用浓氨气熏或喷5%醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。
• 观察记录：记录图谱并计算Rf值。
结束语
• （4）收集 洗脱液25ml一份，分别收集，回收溶 剂至小体积，放置，即可析出结晶，合并相同晶 形部分。先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下 的化合物为大黄素甲醚。
• 三、鉴定
• 1、蒽醌类成分化学鉴定
• 仪器：回流装置一套、蒸发皿、层析槽、试管、梨 形分液漏斗、水浴锅、电炉、薄层板、点样毛细管 等
• 实验内容与方法：
• 一、游离蒽醌的提取
• 称取大黄粗粉50g，加20%硫酸溶液50ml， 充分搅拌混匀，加氯仿200ml，热水浴上回 流提取1小时，过滤得氯仿滤液。药渣继用 氯仿200ml回流1小时，过滤，合并两次氯 仿提取液于圆底烧瓶中，加沸石数粒，水 浴上蒸馏回收氯仿至200毫升（可减压抽干 氯仿）。
• 2. 大黄素的分离和精制：用碳酸氢钠液萃 取后的氯仿液加5%碳酸钠溶液萃取数次 （每次20～30m1），（方法同上述碳酸氢 钠溶液的处理）。萃取液经酸化后析出棕 黄色沉淀，过滤，水洗沉淀物至洗出液呈 中性，沉淀经干燥后，用15ml丙酮热溶， 趁热过滤，滤液静置，析出橙色针状结晶， 过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。
• 5.柱层析法分离大黄酚和大黄素甲醚
• （1）装柱 取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台 上，在管的下端垫入少量棉花，装入100～200目 硅胶（约1/3高，湿法装柱）。
• （2）上样 将样品置于小蒸发皿中，用少量石油 醚分散，另加用3倍量硅胶拌和均匀，并于水浴上 缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱 柱的上端，并盖一圆形滤纸。
• 3. 芦荟大黄素的分离和精制：用碳酸钠液 萃取后的氯仿液加0.25%氢氧化钠溶液萃取 数次（每次20～30m1），（方法同上述碳 酸氢钠溶液的处理）。萃取液经酸化后析
出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥， 用10ml乙酸乙酯精制，得黄色针晶的芦荟 大黄素。
• 4.大黄酚和大黄素甲醚的分离和精制：萃取 除去芦荟大黄素后余下的氯仿层，再用5% 氢氧化钠溶液200ml分两次萃取，至碱水液 呈无色为止，合并碱水层，加盐酸至呈酸 性（PH2～3），析出黄色沉淀，过滤，水 洗至中性，干燥，为大黄酚和大黄素甲醚 的混合物。将此混合物溶于乙酸乙酯，用 硅胶柱色谱分离。
• 二、PH梯度萃取分离
• 1.大黄酸的分离和精制：将含有总蒽醌的氯 仿液放入分液漏斗中，加5%碳酸氢钠溶液 萃取数次（每次20～30m1），至萃取碱水 液呈淡红色为止。合并萃取碱液，加盐酸 至呈酸性（PH2～3），析出黄色沉淀。过 滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性。 干燥后加冰醋酸10ml加热溶解，趁热过滤， 滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗 结晶，得黄色针状结晶为大黄酸。
• 对照品的处理：取牛黄上清丸制剂（含大黄）3克,切碎,加 甲醇50m1冷浸24小时,过滤,取滤液5 m1蒸干,残渣加水 10m1使溶解,加盐酸1m1,置水浴上加热30分钟,冷却,用乙 醚20 m1分两次萃取,合并乙醚液,蒸干,残渣加乙酸乙酯使 溶解成1m1,为供试品溶液。
• 吸附剂：硅胶G-CMC-Na板
OH O OH
R1
R2
O
大黄酸 大黄素 芦荟大黄素 大黄素甲醚 大黄酚
R1=H R1=CH3 R1=CH2OH R1=CH3 R1=CH3
R2=COOH R2=OH R2=H R2=OCH3 R2=H
• 实验器材：
• 试药：大黄粗粉、牛黄上清丸、含水氯仿（水饱 和）、甲醇、乙醚、20%硫酸溶液、冰醋酸、5% 碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、0.25%氢氧化钠 溶液、5%氢氧化钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、 醋酸镁、柱层析用硅胶（100～200目）、硅胶CMC硬板、石油醚（沸程60-90℃）-乙酸乙酯 （15∶1）、石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸（15∶5∶1） 等
萃取除去芦荟大黄素后余下的氯仿层再用5氢氧化钠溶液200ml分两次萃取至碱水液呈无色为止合并碱水层加盐酸至呈酸性ph23析出黄色沉淀过滤水洗至中性干燥为大黄酚和大黄素甲醚洗至中性干燥为大黄酚和大黄素甲醚的混合物
大黄中蒽醌类成分的提取、 分离和鉴定
• 实验原理：
• 本实验根据大黄中的蒽醌苷类在酸性条件 下加热，可水解成游离羟基蒽醌和糖，而 游离羟基蒽醌不溶于水，可溶于乙醚、氯 仿等亲脂性有机溶剂的性质，从水解物中 将游离羟基蒽醌提出。再利用游离羟基蒽 醌的酸性不同，采用PH梯度萃取法将其分 离。
• （1）碱液试验 分别取各蒽醌结晶数毫克置于小 试管中，加2%氢氧化钠溶液1ml，观察颜色变化。 凡有互为邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色， 其它羟基蒽醌呈红色。
• （2）醋酸镁试验 分别取蒽醌结晶数毫克，置于 小试管中，各加乙醇1ml使溶解，滴加0.5%醋酸 镁乙醇溶液，观察颜色变化。
• 2、薄层层析检识
谢谢大家聆听！酸（15∶5∶1）上层溶液
• 点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大 黄素甲醚的醇溶液及处理后的牛黄上清丸的醇溶液
• 显色剂：自然光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后 再用浓氨气熏或喷5%醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。
• 观察记录：记录图谱并计算Rf值。
结束语