基因组dna的提取与电泳鉴定

基因组DNA的提取与电泳鉴定
一. 【实验目的】
掌握基因组DNA的提取原理和方法
二. 【实验仪器与试剂】
实验仪器：琼脂糖凝胶电泳系统、紫外反射透射分析仪、离心机、恒温水浴锅
实验试剂：氯仿、巯基乙醇、植物基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）
三. 【实验原理】
实验中有两种提取DNA的方法，即试剂盒提取法和普通手提法，本次试验采用试剂盒提取法。

试剂盒方法：试剂盒中有特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，离心吸附柱是一种硅基质材料，可以高效、专一吸附DNA，最大限度去除植物细胞中杂质蛋白及其他有机化合物。

普通手提方法：用机械的方法使组织和细胞破碎，加入SDS等离子型活性剂，溶解细胞膜和核膜蛋白。

加入酚氯仿等表面活性剂使蛋白变性。

离心，除去组织和变性蛋白，上清液中加入冰冻的无水乙醇使DNA沉淀，离心，弃上清，用70%乙醇漂洗DNA，倒掉上清，风干，溶于灭菌的双蒸水中。

四. 【实验内容与步骤】
1.取出处理过的新鲜藻体0.1g，用液氮研磨至粉状。

2.将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700μl 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴中加热20分钟，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。

3、加入700μl氯仿，充分混匀，12000rpm 离心5min。

4、小心将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入700μl缓冲液GP2，充分混匀。

5、将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12000rpm离心30s，弃掉废液（吸附柱容积为700l左右，可以分次加入离心）。

6、向吸附柱CB3中加入500μl去蛋白液GD（使用前确认是否加入无水乙醇），12000rpm 离心30s，弃掉废液。

7、向吸附柱CB3中加入700μl漂洗液PW（使用前确认是否加入无水乙醇），12000rpm 离心30s，弃掉废液。

8、向吸附柱CB3中加入500μl漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃掉废液。

9、将吸附柱CB3放入废液回收管中，12000rpm 离心2min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。

10、将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

11、将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50μl洗脱缓冲液TE，室温放置2min，12，000rpm 离心2min；离心得到的溶液再加入吸附柱C3中，室温放置2min，12，000rpm 离心2min；取出1/10体积提取物进行电泳检测，其余 -20℃保存备用。

五. 【实验结果与讨论】
现象描述及分析
1.根据电泳结果可以看出DNA条带亮度较高，说明提取出的DNA含量较高。

且拖尾现象较轻，
说明可能有部分DNA降解，但是降解程度较小，DNA的完整性保存较好。

2.由电泳结果看出条带位于marker2000bp条带上方，说明提取出的DNA质量大于2000bp，但
具体大小不能确定。

附图
C2
六.【思考题】
1.简述DNA提取过程中需要注意哪些问题。

①使用液氮进行研磨时要戴手套，防止冻伤，并保持室内通风。

②研磨时要保证材料始终处于液氮环境中，不可使液氮完全挥发。

研磨要充分，尽量不要外溅，因为收集细胞的多少是实验成功与否的关键。

③每人所取材料量不能太多,氯仿的加入量不能太少,且要充分摇匀,否则蛋白质变性不完全。

2.查阅资料简单介绍通过紫外分光光度计给核酸定量的原理。

分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。

样品的吸光值与样品的浓度成正比。