浅谈高效液相色谱仪原理与应用 液相色谱工作原理

浅谈高效液相色谱仪原理与应用液相色谱工
作原理
在试验中，高效液相色谱仪常被用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物，那么今日我们就来看看高效液相色谱仪结构原理与其应用。

高效液相色谱仪
高效液相色谱仪（HPLC）是应用高效液相色谱原理，紧要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。

它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进
样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的调配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的调配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

HPLC广泛应用于生命科学、食品科学、药物讨论以及环境讨论中。

高效液相色谱仪结构与工作原理
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的调配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的调配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱仪应用特别广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。

例如环境气体分析、药物分析、茶叶的成分分析、食品分析、生物制药、化工化工、脂肪酸分析、氨基酸分析等方面。

而高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分别热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。

与试样预处理技术相搭配，HPLC所达到的高辨别率和高灵敏度，使分别和同时测定性质上特别相近的物质成为可能，能够分别多而杂相体中的微量成分。

随着固定相的进展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分别。

HPLC成为解决生化分析问题特别有前途的方法。

由于HPLC具有高辨别率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药讨论、环境分析、无机分析等各种领域。

高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个紧要的进展方向。

液相色谱—质谱联用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等；液相色谱—红外光谱联用也进展很快，如在环境污染分析测定水中的烃类，海水中的不挥发烃类，使环境污染分析得到新的进展。

液相色谱仪维护应当注意的事项
液相色谱仪依据固定相是液体或是固体，又分为液—液色谱及液—固色谱。

现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度掌控系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分构成。

与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。

1、泵。

泵是液相色谱仪的心脏。

处于良好工作状态的泵，基线平稳，保留时间重现性好，梯度洗脱时压力变化缓慢而且平稳。

1）选择优质的溶剂和试剂，在进入仪器前用 0.45um 膜过滤，并进行脱气处理。

2）泵开始使用时，确定要用合适的流动相彻底清洗干净。

3）定期检查并更换在线过滤片及有关的垫圈，常常清洗进液处的微孔滤头。

4）更改流动相时，应注意沉淀的产生，以防止泵堵塞。

2、色谱柱。

色谱柱是化合物分别的关键。

保养良好的色谱柱具有很高的塔板数，基线平稳。

1）色谱柱比较娇气不能够碰撞、弯曲或猛烈震荡；安装时要保证阀件或管路的清洁。

2）流动相在使用前必需进行脱气处理，尽量不使用或少使用高粘度的流动相。

3）在充分灵敏度的前提下，尽可能的使用小进样量。

假如样品比较脏，要进行净化或提纯处理。

4）分析结束后要清洗掉进样阀中残留的样品，并用流动相或适当的溶剂清洗色谱柱。

5）如长期不用，用适当的有机溶剂保存并封闭或定期补充合适的流动相。

3 、检测器分析完成后，立刻关闭检测器。

4 、进样器分析结束后反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染或堵塞。