纸层析法分离鉴定氨基酸PPT资料(正式版)
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(1) 氨基酸溶液：0. 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这6个位置上，点样点干后再点一次。 由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。 4、展层：将点好样的滤纸(点样面朝外)卷成筒状，用透明胶纸粘接或用线缝好，纸的两边不能接触。
Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 准备滤纸: 戴上手套，取层析滤纸（长22 cm、宽14 cm）一张，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作 一记号，为点样位置（即原点），如图。 Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这6个位置上，点样点干后再点一次。 纸层析法分离鉴定氨基酸 然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常数，因此可作为定性依据。 5、显色： 用喷雾器均匀喷上％水合茚三酮正丁醇溶液，然后用电吹风吹干即可显出各层析斑点。 5% (m/V)的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液 (各组分的浓度均为％)。 (1) 氨基酸溶液：0. (3) 显色剂：％ (m/V)水合茚三酮正丁醇溶液 。 注意事项：手不能直接接触滤纸； 然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。 (2) 展层剂：正丁醇∶冰醋酸∶水＝4∶1∶3 (V/V)。 由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。 准备滤纸: 戴上手套，取层析滤纸（长22 cm、宽14 cm）一张，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作 一记号，为点样位置（即原点），如图。 将滤纸直立于层析缸中（注意：点样的一端在下，展层剂的液面需低于点样线1cm ，滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展层。
5、显色： 用喷雾器均匀喷上％水合茚三酮正 丁醇溶液，然后用电吹风吹干即可显出各层析 斑点。
溶剂前沿
Y X
卷成筒状的滤纸
氨基酸显色后的图谱
四、计算：
用直尺测量并计算出各种氨基酸的Rf值。
Rf 原原点点到到层溶析剂点前中沿心的离 的距距离 YX
样品aa 赖氨酸 甘氨酸 脯氨酸 缬氨酸 亮氨酸
标准aaRf 混合aaRf
Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 5% (m/V)的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液 (各组分的浓度均为％)。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。 将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点； 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。 Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 将滤纸直立于层析缸中（注意：点样的一端在下，展层剂的液面需低于点样线1cm ，滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展层。 四、计算：
试剂和器材：
1. 试剂：
(1) 氨基酸溶液：0.5% (m/V)的赖氨酸、脯氨酸、缬氨 酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液 (各组分的浓 度均为％)。
(2) 展层剂：正丁醇∶冰醋酸∶水＝4∶1∶3 (V/V)。 (3) 显色剂：％ (m/V)水合茚三酮正丁醇溶液 。
2. 器材：
层析缸；层析滤纸（新华一号）；毛细管;喷雾器；电 吹风；直尺；铅笔；针线或透明胶带 ；一次性手套 。
用直尺测量并计算出各种氨基酸的Rf值。 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这6个位置上，点样点干后再点一次。 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常数，因此可作为定性依据。 注意事项：手不能直接接触滤纸；
纸层析法分离鉴定氨基酸
将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处， 该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂 沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基 酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd） 不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用 比移值（Rf）来表示。 所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸 停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与 原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图
Rf 原原点点到到层溶析剂点前中沿心的离 的距距离 YX
在一定条件下（如温度、展层剂的组成、 层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常 数，因此可作为定性依据。
由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使 氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本 实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、操作
1. 在层析缸中装入展层剂，其高度约～2cm。
2. 准备滤纸: 戴上手套，取层析滤纸（长22 cm、 宽14 cm）一张，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画 一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号，为点 样位置（即原点），如图。注意事项：手不能直接 接触滤纸；直线与底边平行。
3. 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这 6个位置上，点样点干后再点一次。注意Val Leu 混合样品
纸层析点样标准图
4、展层：将点好样的滤纸(点样面朝外)卷成筒 状，用透明胶纸粘接或用线缝好，纸的两边不 能接触。将滤纸直立于层析缸中（注意：点样 的一端在下，展层剂的液面需低于点样线1cm ， 滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展 层。待溶剂上升15～20 cm时，取出滤纸，用铅 笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干。
Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 准备滤纸: 戴上手套，取层析滤纸（长22 cm、宽14 cm）一张，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作 一记号，为点样位置（即原点），如图。 Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这6个位置上，点样点干后再点一次。 纸层析法分离鉴定氨基酸 然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常数，因此可作为定性依据。 5、显色： 用喷雾器均匀喷上％水合茚三酮正丁醇溶液，然后用电吹风吹干即可显出各层析斑点。 5% (m/V)的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液 (各组分的浓度均为％)。 (1) 氨基酸溶液：0. (3) 显色剂：％ (m/V)水合茚三酮正丁醇溶液 。 注意事项：手不能直接接触滤纸； 然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。 (2) 展层剂：正丁醇∶冰醋酸∶水＝4∶1∶3 (V/V)。 由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。 准备滤纸: 戴上手套，取层析滤纸（长22 cm、宽14 cm）一张，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每间隔2cm作 一记号，为点样位置（即原点），如图。 将滤纸直立于层析缸中（注意：点样的一端在下，展层剂的液面需低于点样线1cm ，滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展层。
5、显色： 用喷雾器均匀喷上％水合茚三酮正 丁醇溶液，然后用电吹风吹干即可显出各层析 斑点。
溶剂前沿
Y X
卷成筒状的滤纸
氨基酸显色后的图谱
四、计算：
用直尺测量并计算出各种氨基酸的Rf值。
Rf 原原点点到到层溶析剂点前中沿心的离 的距距离 YX
样品aa 赖氨酸 甘氨酸 脯氨酸 缬氨酸 亮氨酸
标准aaRf 混合aaRf
Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 5% (m/V)的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液 (各组分的浓度均为％)。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。 将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点； 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。 Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 Lys Gly Pro Val Leu 混合样品 将滤纸直立于层析缸中（注意：点样的一端在下，展层剂的液面需低于点样线1cm ，滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展层。 四、计算：
试剂和器材：
1. 试剂：
(1) 氨基酸溶液：0.5% (m/V)的赖氨酸、脯氨酸、缬氨 酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液 (各组分的浓 度均为％)。
(2) 展层剂：正丁醇∶冰醋酸∶水＝4∶1∶3 (V/V)。 (3) 显色剂：％ (m/V)水合茚三酮正丁醇溶液 。
2. 器材：
层析缸；层析滤纸（新华一号）；毛细管;喷雾器；电 吹风；直尺；铅笔；针线或透明胶带 ；一次性手套 。
用直尺测量并计算出各种氨基酸的Rf值。 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这6个位置上，点样点干后再点一次。 在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常数，因此可作为定性依据。 注意事项：手不能直接接触滤纸；
纸层析法分离鉴定氨基酸
将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处， 该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂 沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基 酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd） 不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用 比移值（Rf）来表示。 所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸 停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与 原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图
Rf 原原点点到到层溶析剂点前中沿心的离 的距距离 YX
在一定条件下（如温度、展层剂的组成、 层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常 数，因此可作为定性依据。
由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使 氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本 实验利用纸层析法分离氨基酸。
三、操作
1. 在层析缸中装入展层剂，其高度约～2cm。
2. 准备滤纸: 戴上手套，取层析滤纸（长22 cm、 宽14 cm）一张，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画 一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号，为点 样位置（即原点），如图。注意事项：手不能直接 接触滤纸；直线与底边平行。
3. 点样：用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这 6个位置上，点样点干后再点一次。注意Val Leu 混合样品
纸层析点样标准图
4、展层：将点好样的滤纸(点样面朝外)卷成筒 状，用透明胶纸粘接或用线缝好，纸的两边不 能接触。将滤纸直立于层析缸中（注意：点样 的一端在下，展层剂的液面需低于点样线1cm ， 滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展 层。待溶剂上升15～20 cm时，取出滤纸，用铅 笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干。