愈伤组织的诱导和培养

班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223
愈伤组织的诱导和培养
一、实验目的及意义
植物愈伤组织的诱导和培养在植物科学的基础研究和应用研究中都有重要的意义。

通过本次实验，可以初步掌握植物外植体材料消毒、接种的无菌操作技术，愈伤组织的诱导方法和愈伤组织继代培养的方法。

二、实验原理
植物组织与细胞培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。

如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择适当的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得植物组织培养，成功的基本前提和重要保证。

由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织（callus）。

植物生长调节剂如2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等是诱导外植体形成遇上组织的重要因素。

三、实验仪器与药品
超净工作台，酒精灯，镊子，剪刀，解剖刀，75%乙醇，酒精消毒棉
材料：烟草无菌苗，甘薯无菌苗
四、实验步骤
1.按下表分别配制培养基
将配置的四种培养基分别分装入20个培养瓶，高温灭菌后水平放置凝固
2.接种前，将实验所需器具放入超净工作台，打开紫外灯灭菌20~30min，关闭紫外灯，开启通风开关。

洗手后用酒精喷洒消毒手、手臂、实验材料及培养基外部等进入超净工作台的部分。

进入超净工作台，用酒精棉擦拭台面（手勿伸出工作台），台面完全风干后点燃酒精灯。

3.接种开始时，将镊子及手术刀在酒精中浸泡，并在酒精灯外焰上烧炽片刻，充分冷却。

取幼嫩的烟草（甘薯）叶片，用手术刀切割成小片，再用镊子将其接种至相应的培养基上，每瓶接种3~5片，封口后取出超净工作台，标注姓名、日期、培养基和接种材料。

4.将上述培养材料常温暗培养，每隔7天观察一次，并记录培养情况
五、实验结果
组织长芽，而当生长素含量大于细胞分裂素含量时，二者共同作用在室温下可诱导外植体生成不定根，也可形成愈伤组织，细胞色素沉淀情况严重；
NAA为植物生长素，6-BA为细胞分裂素，促进扦插生根，而当细胞分裂素含量大于生长素含量时，二者共同作用在室温下可诱导外植体生成不定芽，此次实验由于温度非形成愈伤组织的最适温度，所以未形成完整的愈伤组织细胞团。

七、思考题
⑪诱导率（2,4-D）=100%
诱导率（NAA）=100%
⑫除去植物表面菌类，同时不破坏植物的蛋白质结构
⑬防止消毒液在外植体表面残留，对外植体造成损伤
⑭在超净工作台上操作，工作台在使用前要紫外消毒，酒精消毒等应在酒精灯火焰前操作
取外植体前酒精浸泡并灼烧镊子和手术刀
镊子和手术刀稍事冷却再取外植体，以免烧死细胞
接种后应尽快封上铝箔
⑮实验前消毒不彻底
实验中操作不规范
⑯外植体本身产生愈伤组织的潜在能力
基本培养基对外植体的影响
激素组合是最重要的影响因素。