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实验二DNA的原位显色——Feulgen染色法
1. 实验目的
学习和掌握植物细胞DNA的Feulgen染色方法;了解Feulgen反应原理;观察DNA原位显色形态特征。

2. 实验原理
DNA经酸水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。

紫红色的产生,是由于反应产物的分子内含有醌基,醌基是一个发色团,所以具有颜色。

该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。

并且在一定的浓度范围内,在550~570nm光波的吸收值与DNA含量成正比关系,既符合化学计量学关系。

此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应,观察DNA的分布,又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。

3. 实验用品
3.1 材料
洋葱
3.2 器材
显微镜,水浴锅,50mL烧杯,玻璃滴管,容量瓶,试剂瓶,载玻片,盖玻片,尖镊子,擦镜纸与擦镜纸;
3.3 试剂
①. 1mol/L HCl
②. Schiff染液
③. SO2水(新鲜配制)
④. Carnoy固定液
⑤.蒸馏水
4. 实验步骤
4.1 取洋葱根尖或洋葱鳞叶内侧的表皮,Carnoy固定液中固定10~15min。

4.2用蒸馏水洗2次,每次2min。

4.2用1M 盐酸60℃水浴中水解8~15min。

4.3 Schiff液染色30~50min(加罩,避光)。

4.4立即用新配制的SO2水洗3次,每次2min,直至出现红色。

4.5 用蒸馏水洗2次,每次2min。

4.6将根尖或洋葱鳞叶内侧的表皮放于载玻片,进行压片,显微镜下观察。

5. 实验结果
细胞核呈紫红色。

6. 实验报告
绘图表示Feulgen反应的染色结果。

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