霉菌形态及菌落特征的观察山东大学

霉菌的培养与形态观察
一．实验目的
1、掌握霉菌的观察法——小室观察法。

2、了解四种常见霉菌形态。

二．实验原理
1、霉菌
霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。

霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3~10μm ），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。

2、观察方法
观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。

3、载玻片培养观察法（小室培养法）
用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。

培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。

这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。

三．实验器材
2、菌种：曲霉 ( Aspergillus sp. ) ，青霉，根霉 ( Rhizopus
sp. ) ，毛霉（ Mucor sp. ），培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物
3、培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表）
4、仪器或其他用具：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U 型玻棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%甘油，显微镜，接种环，酒精灯等
四．实验内容
a) 配置150ml的PDA（霉菌）培养基，然后高温灭菌。

b) 培养小室的灭菌：在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一Ｕ形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，包扎后于110℃灭菌20~30分钟，烘干备用。

c) 倒平板：取已灭菌的马铃薯琼脂培养基各6~7ml 注入另两个灭菌平皿中，使之凝固成薄层。

用解剖刀切培养基：在无菌操作的情况下，利用解剖刀将培养基切成
d) 1cmx1cm的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上（每片放两
块 )。

e) 在培养基边缘接种：通过无菌操作，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的孢子，接种于培养小室中琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。

f) 培养：通过无菌操作，在培养小室中的圆滤纸上加 3ml 灭菌的20 %的甘油（用于保持平皿内的湿度 ) ，盖上皿盖，28 ℃ 正置培养一周。

g) 镜检：取出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。

五．实验结果
1、实验绘图
四种霉菌：
A曲霉 B曲霉局部放大图
A青霉 B青霉局部放大图
毛霉毛霉分析图根霉：
根霉整体装片根霉放大图2、实验结果描述
3、实验结果分析及感悟
本次试验学会了霉菌的基本培养方法，对霉菌的形态特征也有了一定的了解，并学会了从形态上如何区分四种霉菌的方法。