PDQ PLus糖化血红蛋白标准操作程序

1 目的
PDQ PLus TM用于体外诊断，定量检测全血中糖化血红蛋白含量。

2 范围
糖化血红蛋白的含量检测。

3 职责
3.1 生化实验室的检测人员负责糖化血红蛋白含量检测。

3.2质量监督员负责监督检测是否按照程序文件和作业指导书中检验过程的要求进行。

4 原理
高压液相亲和层析：
PDQ PLusTM采用了高压液相亲和层析将糖化血红蛋白分离出来，然后根据415nm 波长的吸光度的变化生成层析图，并记录和保存在内置的计算机里，仪器内置的软件程序会自动分析层析图并通过打印机输出结果。

5 标本采集、运输、保存
静脉血或末梢血，推荐使用EDTA钾盐或肝素氨做抗凝剂。

在-20℃保存稳定6个月，5℃保存稳定2周，25℃保存稳定1周。

冷藏标本应放置至室温，混匀后操作，避免反复冻融。

注意：所有全血标本在分析前要完全混匀。

6 标本拒收标准
6.1 不合格标签，包括没有标签，或标本信息不全，或编号错误。

6.2 未使用正确的容器。

6.3 凝结（如EDTA采血管）。

6.4 容量不足。

6.5 未能正确运送。

6.6 受污染。

6.7 检测申请不完全。

7 试剂及仪器设备
普莱默斯糖化血红蛋白检测试剂，PDQ PLus TM糖化血红蛋白检测仪。

7.1 包装规格
7.2 试剂成份
试剂成份：5%酒精、磷酸盐缓冲液、蒸馏水、清洗液、0.001%叠氮化钠、羟基盐等。

7.3 试剂准备
标本预处理：稀释模式：30μl的全血与3000μl稀释液混合（1：100），避免起泡沫。

室温孵育5分钟。

全血模式：标本不凝血、足量
7.4 试剂储藏和稳定期
未处理的标本：密闭保存2-4℃，稳定7天
7.5 仪器设备
PDQ PLus TM糖化血红蛋白检测仪
8 操作步骤
按仪器操作说明书输入正确的实验参数和试剂使用通道代号。

具体操作步骤参照PDQ 日常操作规程。

9 结果判断与分析
对超出可报告范围的结果,可用稀释液稀释样品，再重新测定，结果乘以稀释倍数。

报告发出时必须经过双重审核，一人测试结果，另一人负责复核结果。

10 质量控制
10.1 质控品来源：BIO-RAD质控血清LOT 33800 。

10.2 质控品的处理：按使用要求小心开启质控品瓶盖，避免冻干粉末撒落。

每瓶质控品加入0.5ml蒸馏水。

小心盖紧瓶盖，室温下平衡15分钟使其充分溶解后混匀备用。

质控品预处理：20μl的质控品与2000μl稀释液混匀（1：100），避
免起泡沫。

室温孵育5分钟。

10.3 稳定性
稀释处理后的质控品密闭保存，2-8℃稳定7天，-20℃稳定30天， -70℃稳定1年
稀释液处理后的质控品2-8℃稳定24小时。

10.4 参数设置
按质控品使用说明书，参照对应方法学的质控值。

10.5 偏差调整
质控结果应该落在特定的范围内。

如果结果偏离控制范围，按以下步骤查找原因：检查参数设置是否正确。

检查仪器状态是否正常。

检查分析用水是否合格或污染。

检查反应温度是否正常。

检查试剂盒的效期、外观颜色及是否污染。

10.6 操作
将质控品与未知样本同时进行检测，作为内部质量控制的参考依据。

每个质控应标注其批号和开盖、复溶日期。

10.7 结果分析及判断
参照全自动生化分析仪作业指导书中的室内质量控制。

11 参考范围
12 临床意义
糖化血红蛋白是美国糖尿病协会，英国糖尿病研究计划和糖尿病控制和临床实验室推荐的一项重要检测项目。

目前，糖化血红蛋白实验反映糖尿病病人近2－3个月的平均血糖水平，用于糖尿病病人的监测管理。

糖化血红蛋白是血红蛋白与葡萄糖非酶促反应的产物，是指葡萄糖在血红蛋白β链N-末端缬氨酸残基特异性地修饰血红蛋白A。

糖化血红蛋白含量与红细胞生命
周期的血糖平均水平有关。

因此，糖化血红蛋白是反映病人2－3个月的血糖平均水平的一个很好的指标。

13 性能参数
13.1 线性:
总血红蛋白线性范围7-23g/dl，
HbA1c:检测范围大约为0.25-2.4g/l
13.2 准确度
日间重复性均值与靶值（N＝20）
13.3 精密度：
13.4 溯源性，方法学对比：
本方法（Y）与其它市场上可接受的方法(X)比较，得到以下的线性回归方程：
Y =0.96X 相关系数r-0.98
检测40份样本，浓度范围覆盖6.16-13.03％
13.5 干扰性:
这项检测的准确性基于血红蛋白在7-23g/dl范围内，如果病人血红蛋白超过这个范围，不能使用这个方法。

任何红细胞缺少性疾病如溶血性贫血或溶血性疾病，
怀孕，近期大量失血等可导致糖化血红蛋白降低。

标本中含有S和C基的血红蛋白使糖化血红蛋白检测含量升高40%左右。

含有F基的血红蛋白（＞10%）使结果偏低。

14 注意事项
14.1 试剂含有叠氮化钠，误入眼、口中或沾染到皮肤上请立即用清水彻底冲洗，必要时到医院就诊。

14.2 试剂含有叠氮化钠，可以和铜、铅等金属发生强烈的反应生成叠氮化金属，故废弃时请充分稀释废液和冲洗排水管，以免在排水管中有残留。

14.3 在检测的过程中，请不要混合或者交换使用批号不同的试剂。

14.4 开封的试剂应按指定方法密闭储存，过期请勿使用。

14.5 请根据相关医疗废弃物的处理规定处置接触过检测标本的试管等器具。

15 参考文献
15.1 Cohen P .M. Perspective: measurement of Circulating Glycated Protein to Monitor Intermediate –Term Changes in Glycaemic Control Eur Clin Clin Chem. Clin. Biochem .1992:30(12):851-859.
15.2 Mayer T .K. and Freedman Z .R.:Protein glycosylation in diabetes mellitus: A review of their clinical utility .Clin .Chem .Acta 127:147-184(1983).
15.3 Larsen M.L,.Horder .M and Mogensen E .F.:Effect of long-term monitoring of glycolsylated hemoglobin levels in insulin-dependent diabetes mellitus.NE J Med.323.1021-1025(1990).。