酸氨基转移酶(ALT)测定(速率丙氨法)标准化操作程序文件

酸氨基转移酶(ALT)测定（速率丙氨法）标准化操作程序文
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1概述
肝脏内含有丰富的酶系统，以维持机体的正常生理代谢过程。

不少酶是由肝脏合成并由肝胆系统排泄，当肝脏有病时，可由于酶生成亢进或释出异常，引起血清内酶的活性改变。

这些改变在一定程度内反映了肝脏的功能状况。

人体转氨酶的种类甚多，而以血清丙氨酸氨基转移酶，血清天门冬氨酸转换酶活性最强。

此两种酶广泛在于机体组织细胞内，以肝脏，心脏，肾脏及骨骼肌中较多。

在肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量最多，AST以心肌含量最多，此两种转氨酶较多地释放在血液中，使血清中两种酶活性增高。

2 样本收集
新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。

血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。

样本在4摄氏度可稳定7天。

采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。

3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。

不建议采用血浆标本。

3 方法原理
L-丙氨酸+α-酮戊二酸—————→丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸+NADH—————→L-乳酸+NAD﹢
4剂来源，配置及储存
试剂来源：迪瑞
试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。

启用后在2-8度可稳定30天。

若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在340nm处的光吸收值低于1.0A,应予丢弃。

试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。

5分析仪器
CS-600B全自动生化分析仪
分析参数：样品量15 u/l 试剂量：第一试剂240 u/l（R1）；第二试剂60 u/l
测光点23—38 测定模式：速率法负反应
分析波长：340nm/405nm(主波长/副波长)
6计算方法
样本浓度（U/L）=样本管吸光度的变化×校准液浓度（U/L）
校正管吸光度的变化
7 线性范围：本实验的线性范围：4----1000U/L
8 参考范围：男性；：5—40U/L 女性：5---35 U/L
9 失控控理
1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。

2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。

3：进行仪器维护，重测失控项目。

检查仪器状态，查明光源是否更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护。

另外还要检查试剂，此时可更换试剂已查明原因。

如果结果仍不再允许范围内，则进行下一步。

4：重新校准。

重测失控项目。

用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。

5：请专家帮助。

如果前五步都为能得到在控结果，那可能是仪器或试剂已查明原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援。

10 注意事项
1:试剂和样本用量可根据不同仪器要求按比例改变。

2：如测试结果超出线性范围，样本应稀释后测试，调整因子数或将结果乘以稀释倍数。

3：结果的准确性仪器校正和测定温度，时间的控制。

4：高血脂或黄疸样本在340nm处有较高的吸光度值。

这类样本的高值ALT耗尽底物后，在340nm处仍维持较高的吸光度值，此时样本应稀释后在进行测定。

5：由医生根据临床症状和其他实验结果做出临床诊断。

11 临床意义
ALT活性高
1)肝胆疾病传染性肝炎、中毒性肝炎、脂肪肝和胆管炎等。

2)心血管疾病心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时肝淤血和脑
出血等。

3)药物和毒物氯丙嗪，异肼、奎宁、水杨酸制剂及乙醇，
铅、
ALT活性降低磷酸吡多醛缺乏症。