金黄色葡萄球菌噬菌体qdsa001内溶素的特性预测及克隆表达

金黄色葡萄球菌噬菌体qdsa001内溶素的特性预测及克隆表
达
吕晓倩;王静雪;林洪
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2018(039)018
【摘要】为获得噬菌体qdsa001的内溶素,本实验首先利用多种在线软件对内溶素lys56(GenBank:ARQ95812.1)的理化性质、信号肽、跨膜域和结构域等特性进行分析,然后选择克隆表达法制备目的蛋白.将合成的目的基因插入原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET-30a-lys56,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,获得表达稳定的基因工程菌,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,利用镍琼脂糖亲和层析纯化表达产物.经在线软件预测结果显示,该蛋白分子质量为35.1 kDa,无信号肽和跨膜域,仅含有一个Ami 2结构域.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示重组蛋白表达成功,且以可溶性蛋白的形式存在于细胞破碎上清液,分子质量约35 kDa,与预期蛋白大小一致.重组蛋白最佳表达条件为:IPTG浓度0.5 mmol/L,20℃过夜诱导.
【总页数】6页(P133-138)
【作者】吕晓倩;王静雪;林洪
【作者单位】中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛 266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛 266003;中国海洋大学食品科学与工程学院,山东青岛 266003
【正文语种】中文
【中图分类】Q786
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