黄精降低活性氧水平促进衰老内皮祖细胞功能的研究

关键词：黄精；内皮祖细胞；活性氧；细胞衰老；细胞功能；老 年大鼠
内皮祖细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ，ＥＰＣｓ） 是一类可替代修复损伤血管内皮，促进血管网络重 建的内皮细胞前体细胞，利用体外扩增的 ＥＰＣｓ治 疗缺血性心血管疾病具有较好的应用前景［１－２］。然 而，ＥＰＣｓ在体外传代培养中常因老化而难以维持增 殖，如何干预 ＥＰＣｓ的衰老，提高 ＥＰＣｓ的数量和质 量，是临床治疗缺血性心血管疾病急需解决的一个 难点。前期研究表明，黄精可通过提高端粒酶活性 来保护衰老大鼠骨髓 ＥＰＣｓ的功能［３］，在此基础上， 本文将进一步探讨黄精在老年大鼠骨髓 ＥＰＣｓ体外 传代培养 衰 老 进 程 中，对 细 胞 功 能 及 活 性 氧 （ｒｅａｃ ｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）水平的影响。 １ 材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 实验动物 健康 ＳＰＦ级 ２０月龄 ＳＤ大鼠 ２０ 只，体质量（５２０～５８０）ｇ；３月龄 ＳＤ大鼠 ４０只，体 质量（２２０～２６０）ｇ，♀♂各半。全部动物由北京维 通利 华 实 验 动 物 技 术 有 限 公 司 提 供，合 格 证 号： １１４００７００１１１１３０。动 物 饲 养 环 境：温 度 （２２～２５） ℃，湿度 ５０％ ～６０％，光照 １２ｈ，采用标准鼠饲料和 灭菌饮用水喂养。本动物实验方案获得贵州医科大
黄精降低活性氧水平促进衰老内皮祖细胞功能的研究
秦 臻１，韦正新１，宰青青１，许键炜１，２
（贵州医科大学基础医学院 １．药理学教研室、２．组织工程与干细胞实验中心，贵州 贵阳 ５５００２５）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１９．０１．０２４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１９）０１－０１２３－０５ 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ２８２．７１；Ｒ３２９．２４；Ｒ３３９．３８ 摘要：目的 观察黄精在老年大鼠内皮祖细胞 （ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ，ＥＰＣｓ）传代培养衰老进程中对细胞功能及活 性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）水平的影响。方法 分离 培养大鼠骨髓 ＥＰＣｓ并鉴定，将培养至第 ２代的 ＥＰＣｓ分为 ４ 组，分别用黄精含药血清和空白对照血清继续培养至第 ４、 ６、８代。β半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度；ＭＴＴ法检 测细胞增殖功能；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室检测迁移功能；体外成血管 试剂盒检测成血管功能；流式细胞仪检测 ＲＯＳ水平。结果 ＥＰＣｓ在体外传代培养中，其衰老程度逐渐加重，并伴有增 殖、迁移和成血管功能的明显减退，ＲＯＳ水平急剧升高（Ｐ＜ ００５）；经黄精干预后，ＥＰＣｓ衰老程度有所减轻，其功能有所 增强，ＲＯＳ水平明显降低（Ｐ＜００５）。结论 黄精可能通过 降低 ＲＯＳ水 平 来 延 缓 传 代 培 养 ＥＰＣｓ的 衰 老 进 程，保 护 ＥＰＣｓ的功能。
ＡＳＴ，ＢＵＮ，ａｎｄＳＣｒｉｎｔｈｅｓｅｒｕｍ ｏｆＰＨＳＥＥｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜００５）．Ｈｏｗｅｖｅｒ， ｔｈｉｓｐｈｅｎｏｍｅｎａｗａｓｎｏｔｆｏｕｎｄｉｎＴＧ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕ ｓｉｏｎｓ ＰＨＳＥＥｈａｓａｇｏｏｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｉｃａｃｙｏｎＣＩＡ ｒａｔ．Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓａｎｄｉｎｄｕｃｉｎｇ ａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｓｙｎｏｖｉａｌｃｅｌｌｓ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｔｈｅｅｘ ｔｒａｃｔｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｉｍｐａｉｒｅｄｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎ ＣＩＡｒａｔｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＰｔｅｒｏｃａｒｙａｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓＳｋａｎ；ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；ＣＩＡ ｍｏｄｅｌ；ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｓｙｎｏ ｖｉｏｃｙｔｅｓ
中国药理学通报 Ｃｈｉ１９Ｊａｎ；３５（１）：１２３～７
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网络出版时间：２０１８－１２－１１１５：０１ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．ｒ．２０１８１２１０．０９５１．０５０．ｈｔｍｌ
收稿日期：２０１８－０７－１０，修回日期：２０１８－０９－２０ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１４０３４４５）；贵州省中医
药管理局中医药、民 族 医 药 科 学 技 术 研 究 课 题 资 助 项 目 （ＮｏＱＺＹＹ２０１７－００８） 作者简介：秦 臻（１９８２－），女，博 士，副 教 授，研 究 方 向：中 医 药 防 治心脑血管疾病，Ｅｍａｉｌ：７５８７１０８３＠ｑｑ．ｃｏｍ； 许键炜（１９７９－），男，博 士，副 教 授，研 究 方 向：干 细 胞 及 组织再生与修复，通讯作者，Ｅｍａｉｌ：３６３９１２５７７＠ｑｑ．ｃｏｍ
ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｐａｗ ｓｗｅｌｌｉｎｇｒａｔｅａｎｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｎｄｅｘｄｅ ｃｒｅａｓｅｄｉｎＴＧａｎｄＰＨＳＥＥｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈｓｔａｔｉｓｔｉ ｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（Ｐ＜００５）．Ｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｏｆｉｎｆｌａｍ ｍａｔｏｒｙｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｓｙｎｏｖｉａｌｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｓｙｎｏｖｉｕｍ ｏｆｔｈｅｋｎｅｅｆｒｏｍ ｅｉｔｈｅｒ ＴＧａｎｄＰＨＳＥＥｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏ ｋｉｎｅｓＴＮＦαａｎｄＩＬ１βｉｎｔｈｅｓｅｒｕｍｆｒｏｍＴＧａｎｄＰＨ ＳＥＥｔｒｅａｔｅｄｒａｔｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜００５）． Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓｐ ｐ６５ａｎｄＢｃｌ２ｉｎｔｈｅｓｙｎｏｖｉｕｍｏｆＴＧａｎｄＰＨＳＥＥｔｒｅａ ｔｅｄｒａｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｍａｒｋｅｒｓｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ３ａｎｄ Ｂａｘｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｍｏｒｅｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇｌｙ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＡＬＴ，