酶免疫细胞化学染色操作指南-1
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酶免疫细胞化学染色操作指南-1
一、材料和试剂
1、玻片：须用免疫组化专用玻片，或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。
2、5-10%正常山羊血清封闭液，用PBS配。
3、3%牛血清白蛋白（BSA），用PBS配。
4、0.01M pH7.4 PBS
5、1% BSA-PBS（含0.05% Tween20）
6、AEC底物
（1）底物缓冲液（20X） PH 4.6
醋酸（分子量60.6） 30.6ml
Triton X-100
醋酸钠 3H2O（分子量136.1）66.68克
加蒸馏水到960ml，调pH到4.6，最后加蒸馏水到总体积1000ml。
（2）AEC（20X）
AEC 15mg/ml，溶在DMF（二甲基甲酰胺，分子式HCOH(CH3)2 分子量73. 10中）
（3）0.6% H2O2（20X）
临用时，（1）（2）（3）各50ul，在1ml双蒸馏水中混匀30分钟内有效。
7、DAB（即DAB-4HCL）
（1）1.5克DAB在100ml水溶液中（20X）
（2）1M Tris（20X），用HCl调PH到7.4
（1）（2）（3）各滴加入1ml二蒸水中，新鲜配，避光，30分钟内有效。
溶解后（可加热到50℃），加水合氯醛50克（水合氯醛Chloral H yclrate，分子量165.4），枸橼酸1克，充分溶解，于棕色瓶中，室温或400C保存。
8、苏木素复染液
苏木素 1克
碘酸钠 0.2克
钾矾 50克
水 1000ml
9、含10%及2%小牛血清的DMEM培养液。
10、3% H2O2：30% H2O21份，加9份双蒸水，临用时配。
11、细胞抗原玻片及96孔细胞抗原板
12、封片液：1克明胶，溶于30ml 35℃水中，加入35ml甘油（或用甘油封片）和650mg石碳酸（先溶于0.6ml水中）。
二、细胞内源过氧化物酶阻断（使用HRP标记二抗或SP法时必须阻断）
1、从冰箱取出细胞片或细胞板，置室温或37℃ 10-15分钟，使恢复温度。