松子壳多糖体外诱生小鼠IL-2和TNF-α的研究
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鼎 国生 物公 司 ） 。
【 日］ １ １ — — ８ 收稿 １ ２ ０ ３ ２ １０ ］ ［ 自然科学基金】 国家 课题编号为 ３ ５ １５ 。 ０ ７３ ５
・
用 双抗 体 夹 心 Ｅ ＩＡ法 检 测 Ｉ一 ＬＳ Ｌ ２和 Ｔ Ｆ Ｎ一
的含量 ， 严格按照试剂盒说明进行操作。
２ ・ ０
遍， 除去 非黏 附细胞 ， 到较纯 的单 层 巨噬细胞 。 得 每
孔 加入 Ｌ Ｓ５ Ｌ 终浓 度 ２ ｇ ｍ ） ５ ０ Ｌ Ｐ ０ （ ０ ／ Ｌ 和 ０ ｝Ｌ不 同 浓 度 （ ０ ／ Ｌ、０ ｇ ５ ｇｍ １０ ／ ２ ０ ｇ Ｌ、０ ｍＬ、０ ／ ３ ０ ｍ
养板 （ｏｔ 公 司 ）碳酸 氢钠 、 酸 、 酸氢 二钠 、 Ｃｓｒ ｅ ； 盐 磷 磷
度 （０ ｇ ｍＬ １ ０ ｇ ｍＬ ２ ０ ｇ ｍ 、０ ｇｍＬ ５ ／ 、０ ／ 、０ ／ Ｌ ３ ０ ／ ） Ｐ Ｐ， 的 Ｓ 每个 浓 度 设 ３孔 ， 照 组加 入 完 全 培液 。 对
外诱生 Ｉ一 及 Ｔ Ｆ 【 泌的影 响 ，旨在 为松 子壳 Ｌ２ Ｎ —ｏ分
研 室提 供 ， 以双 蒸 水 配成 ｌ ｍ ／ Ｏｇ ｍＬ母 液 ， 临用 时 以
在 无 菌条 件 下 常 规方 法 制 备 小 鼠腹 腔 巨 噬细
胞， 调整 细胞 浓度 为 ５ ０ ｃｌｍＬ １ ｅ ／ 的细胞悬 液 。加 Ｘ ｌ 入 ２ 孔 培 养板 中 ， ４ 每孔 ｌ Ｌ 在 ３ ￣ ，％Ｃ ： ｍ ， ７（ ５ Ｏ 条件 ２ 下 培养 ２ｈ 弃 去培 养液 ， ， 用无 血清 Ｒ ＭＩ １４ Ｐ 一 ６ ０洗 ２
含 １％４ 牛 血清 的 Ｒ ＭＩ１４ ０ ｘ Ｐ 一 ６０培养 液 ｆ 培 液 ） 完全
稀 释至所需 浓度 。 Ｒ ＭＩ １ ４ Ｐ 一 ６ ０培 养 基 （ 国 Ｇ Ｂ Ｏ公 司 ） 胰 酶 美 ＩＣ ； （ ｍ ｒｃ 司 ） 小牛 血清 （ 州 四季 青公 司 ） 刀豆 Ａ ｅｓｏ公 ； 杭 ； 蛋 白 Ａ（ｏ Ａ） 脂多 糖 （Ｐ ） ｉ 公 司 ）细胞 培 Ｃｎ 及 Ｌ Ｓ（ ｇ Ｓ ｍａ ；
广东饲料 第 １ 卷第 ４ ９ 期
１７数 据 统 计 ．
２１ 年 ４ ００ 月
Ｔ Ｋ等多种杀伤细胞 的分化 和效应功 能 ， Ｊ Ａ 并诱导杀伤 细胞产生 ＩＮ Ｙ和 Ｔ Ｆ ａ Ｆ— Ｎ — 等细胞 因子。
１２主要 药品试 剂 ．
在 ３ ℃ ，％Ｃ ２ ７ ５ ０ 条件下 培养 ４ 。离 心 （０ ０ ／ｉ， ８ ｈ ２０ ｍｎ ｒ １ ｉ）收集上 清 ，２ ％保存 。 ０ｍｎ ， 一０
１ ． 鼠 Ｔ — 的诱 生 ５小 ＮＦ
松子 壳多 糖ｆ Ｓ ， Ｐ）由吉林 大 学农 学部 生 化教 Ｐ
多糖 的深入开发利用 奠定一定 的实验基础 。
１ 料与 方法 材
１ ． １实验动 物
Ｓ Ｆ级 昆明小 鼠 ２ Ｐ ０只 ，雌 雄各半 ，体 重 １ ８～ ２ ｇ购 于第 三 军 医 大 学 实验 动 物 中心 ｆ 可 证 号 ： ２， 许
ＳＸ Ｃ Ｋ渝 ２ ０ — ０ ２ 。 ０７ ０ ０ ）
见报 道 。本次试 验进一 步考察松子壳 多糖对小 鼠体
１３主 要 仪 器 ．
酶联免疫检测仪 （ Ｉ — Ａ ＢＯ Ｒ Ｄ公司 ）Ｃ ： ；Ｏ 孵箱
（ 国 Ｓ Ｌ ＡＢ公 司 ） 美 ＨＥ Ｌ ；倒 置 显微 镜 （ ｌ ｐ ｓ Ｏｙ ｕ 公 ｍ 司 ）低 温高 速 离心 机 （ 国 Ｈ ｒｃｓ 司 ）水 浴摇 ； 德 ｅａｕ 公 ； 床 Ｈ Ｓ Ｈ（ Ｚ — 哈尔滨 东联 电子 ） 。
ｇ Ｌ 的 Ｐ Ｐ 每个浓度设 ３ ， ／ ） Ｓ， ｍ 孔 对照组加入完全
培 液 。继 续 培养 ４ ｈ离 心 （０ ０ｒ ｉ，０ｍｎ ， ８， ２０ ｍｎ １ ｉ）收 ／ 集上 清 ，２ ℃保存 。 一Ｏ
１ ． 鼠 Ｉ－ ６小 Ｌ ２和 化钠、 台盼蓝等均为国产分析 纯试剂 。小 鼠 Ｉ 一 Ｌ ２及 Ｔ Ｆ ｔ Ｎ —Ｏ 测定 试剂 盒均 （ 北京
（． ２ 华南农业大学 ， 广东 广州 ５０ ９ ） １０ ５
【 中图分 类号】８ ６７ Ｓ １． 【 文献标识码】 Ｃ ［ 文章编￣］ ５ ８ １ （００ ０— ００ ０ － ｍｏ — ６ ３２ １ ）４ ０ ２ — ２
松 子壳多糖 （ｉｅ ｕｓｅ ｏ ｓｃｈｒ ｅＰ Ｐ Ｐｎ ｔｈｌ ｌ ａｃａｉ ，Ｓ ） ｎ ｌ ｙ ｐ ｄ 是从松 子壳 （ 松塔 ） 中提取 的酸性 多糖 成分 ， 其在 抗 肿瘤 、 抗病毒 和免疫促进 剂作用方 面研 究较 多（ａ— Ｓｋ ａａ 等 ，９９Ｈ ｒ ａ ，９ １吕永俊 等 ，０８ ， ｇｍｉ １９ ； ａａ 等 １９ ； ｄ ２０ ）我 们在前期试验证 实 了松子壳 多糖对小 鼠脾 ＴＢ淋 巴 、 细胞 转化 、巨噬 细胞 的吞噬功 能 、Ｋ细胞杀伤 作用 Ｎ 均有明显 的促进作用 ，但 Ｐ Ｐ对 细胞 因子 的影 响未 Ｓ
１ ． 鼠 Ｉ－ ４小 Ｌ ２的诱 生
在无 菌条件 下 常规方 法制 备小 鼠脾 细胞 ， 台盼 蓝 染 色计 数 活 细胞 数 （ 在 ９％以上 ）用 含 １％ 应 ５ ， ０ 小 牛 血 清 的 Ｒ ＭＩ１４ Ｐ 一６ ０调 整 细 胞 浓 度 为 ５Ｘ １６ ｌｍ 。 加 入 ２ ０ｃ ｌ Ｌ ｅ／ ４孔 培 养 板 中 ， 每 孔 ｌ ， ｍＬ Ｃ ｎ ５ Ｌ 终 浓 度 ５ ｇｍＬ ） ５０ Ｌ不 同浓 ｏＡ ０ （ Ｘ Ｉ ／ ） 和 ０
广东饲料 第 １ 卷第 ４ ９ 期
２１ 年 ４ ００ 月
松子壳 多糖体外诱生小鼠 Ｉ ２和 Ｌ 一 Ｔ ０ 的研究 Ｎ一 （ Ｆ
刘 中禄 吕铁钢 ｚ张永 亮 ｚ ， ，
（ ． 三军 医大学大坪医院野战外科研究所 实验动物 中心 ， １ 第 重庆 ４ ０ ４ ） ０ ０ ２
【 日］ １ １ — — ８ 收稿 １ ２ ０ ３ ２ １０ ］ ［ 自然科学基金】 国家 课题编号为 ３ ５ １５ 。 ０ ７３ ５
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用 双抗 体 夹 心 Ｅ ＩＡ法 检 测 Ｉ一 ＬＳ Ｌ ２和 Ｔ Ｆ Ｎ一
的含量 ， 严格按照试剂盒说明进行操作。
２ ・ ０
遍， 除去 非黏 附细胞 ， 到较纯 的单 层 巨噬细胞 。 得 每
孔 加入 Ｌ Ｓ５ Ｌ 终浓 度 ２ ｇ ｍ ） ５ ０ Ｌ Ｐ ０ （ ０ ／ Ｌ 和 ０ ｝Ｌ不 同 浓 度 （ ０ ／ Ｌ、０ ｇ ５ ｇｍ １０ ／ ２ ０ ｇ Ｌ、０ ｍＬ、０ ／ ３ ０ ｍ
养板 （ｏｔ 公 司 ）碳酸 氢钠 、 酸 、 酸氢 二钠 、 Ｃｓｒ ｅ ； 盐 磷 磷
度 （０ ｇ ｍＬ １ ０ ｇ ｍＬ ２ ０ ｇ ｍ 、０ ｇｍＬ ５ ／ 、０ ／ 、０ ／ Ｌ ３ ０ ／ ） Ｐ Ｐ， 的 Ｓ 每个 浓 度 设 ３孔 ， 照 组加 入 完 全 培液 。 对
外诱生 Ｉ一 及 Ｔ Ｆ 【 泌的影 响 ，旨在 为松 子壳 Ｌ２ Ｎ —ｏ分
研 室提 供 ， 以双 蒸 水 配成 ｌ ｍ ／ Ｏｇ ｍＬ母 液 ， 临用 时 以
在 无 菌条 件 下 常 规方 法 制 备 小 鼠腹 腔 巨 噬细
胞， 调整 细胞 浓度 为 ５ ０ ｃｌｍＬ １ ｅ ／ 的细胞悬 液 。加 Ｘ ｌ 入 ２ 孔 培 养板 中 ， ４ 每孔 ｌ Ｌ 在 ３ ￣ ，％Ｃ ： ｍ ， ７（ ５ Ｏ 条件 ２ 下 培养 ２ｈ 弃 去培 养液 ， ， 用无 血清 Ｒ ＭＩ １４ Ｐ 一 ６ ０洗 ２
含 １％４ 牛 血清 的 Ｒ ＭＩ１４ ０ ｘ Ｐ 一 ６０培养 液 ｆ 培 液 ） 完全
稀 释至所需 浓度 。 Ｒ ＭＩ １ ４ Ｐ 一 ６ ０培 养 基 （ 国 Ｇ Ｂ Ｏ公 司 ） 胰 酶 美 ＩＣ ； （ ｍ ｒｃ 司 ） 小牛 血清 （ 州 四季 青公 司 ） 刀豆 Ａ ｅｓｏ公 ； 杭 ； 蛋 白 Ａ（ｏ Ａ） 脂多 糖 （Ｐ ） ｉ 公 司 ）细胞 培 Ｃｎ 及 Ｌ Ｓ（ ｇ Ｓ ｍａ ；
广东饲料 第 １ 卷第 ４ ９ 期
１７数 据 统 计 ．
２１ 年 ４ ００ 月
Ｔ Ｋ等多种杀伤细胞 的分化 和效应功 能 ， Ｊ Ａ 并诱导杀伤 细胞产生 ＩＮ Ｙ和 Ｔ Ｆ ａ Ｆ— Ｎ — 等细胞 因子。
１２主要 药品试 剂 ．
在 ３ ℃ ，％Ｃ ２ ７ ５ ０ 条件下 培养 ４ 。离 心 （０ ０ ／ｉ， ８ ｈ ２０ ｍｎ ｒ １ ｉ）收集上 清 ，２ ％保存 。 ０ｍｎ ， 一０
１ ． 鼠 Ｔ — 的诱 生 ５小 ＮＦ
松子 壳多 糖ｆ Ｓ ， Ｐ）由吉林 大 学农 学部 生 化教 Ｐ
多糖 的深入开发利用 奠定一定 的实验基础 。
１ 料与 方法 材
１ ． １实验动 物
Ｓ Ｆ级 昆明小 鼠 ２ Ｐ ０只 ，雌 雄各半 ，体 重 １ ８～ ２ ｇ购 于第 三 军 医 大 学 实验 动 物 中心 ｆ 可 证 号 ： ２， 许
ＳＸ Ｃ Ｋ渝 ２ ０ — ０ ２ 。 ０７ ０ ０ ）
见报 道 。本次试 验进一 步考察松子壳 多糖对小 鼠体
１３主 要 仪 器 ．
酶联免疫检测仪 （ Ｉ — Ａ ＢＯ Ｒ Ｄ公司 ）Ｃ ： ；Ｏ 孵箱
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ｇ Ｌ 的 Ｐ Ｐ 每个浓度设 ３ ， ／ ） Ｓ， ｍ 孔 对照组加入完全
培 液 。继 续 培养 ４ ｈ离 心 （０ ０ｒ ｉ，０ｍｎ ， ８， ２０ ｍｎ １ ｉ）收 ／ 集上 清 ，２ ℃保存 。 一Ｏ
１ ． 鼠 Ｉ－ ６小 Ｌ ２和 化钠、 台盼蓝等均为国产分析 纯试剂 。小 鼠 Ｉ 一 Ｌ ２及 Ｔ Ｆ ｔ Ｎ —Ｏ 测定 试剂 盒均 （ 北京
（． ２ 华南农业大学 ， 广东 广州 ５０ ９ ） １０ ５
【 中图分 类号】８ ６７ Ｓ １． 【 文献标识码】 Ｃ ［ 文章编￣］ ５ ８ １ （００ ０— ００ ０ － ｍｏ — ６ ３２ １ ）４ ０ ２ — ２
松 子壳多糖 （ｉｅ ｕｓｅ ｏ ｓｃｈｒ ｅＰ Ｐ Ｐｎ ｔｈｌ ｌ ａｃａｉ ，Ｓ ） ｎ ｌ ｙ ｐ ｄ 是从松 子壳 （ 松塔 ） 中提取 的酸性 多糖 成分 ， 其在 抗 肿瘤 、 抗病毒 和免疫促进 剂作用方 面研 究较 多（ａ— Ｓｋ ａａ 等 ，９９Ｈ ｒ ａ ，９ １吕永俊 等 ，０８ ， ｇｍｉ １９ ； ａａ 等 １９ ； ｄ ２０ ）我 们在前期试验证 实 了松子壳 多糖对小 鼠脾 ＴＢ淋 巴 、 细胞 转化 、巨噬 细胞 的吞噬功 能 、Ｋ细胞杀伤 作用 Ｎ 均有明显 的促进作用 ，但 Ｐ Ｐ对 细胞 因子 的影 响未 Ｓ
１ ． 鼠 Ｉ－ ４小 Ｌ ２的诱 生
在无 菌条件 下 常规方 法制 备小 鼠脾 细胞 ， 台盼 蓝 染 色计 数 活 细胞 数 （ 在 ９％以上 ）用 含 １％ 应 ５ ， ０ 小 牛 血 清 的 Ｒ ＭＩ１４ Ｐ 一６ ０调 整 细 胞 浓 度 为 ５Ｘ １６ ｌｍ 。 加 入 ２ ０ｃ ｌ Ｌ ｅ／ ４孔 培 养 板 中 ， 每 孔 ｌ ， ｍＬ Ｃ ｎ ５ Ｌ 终 浓 度 ５ ｇｍＬ ） ５０ Ｌ不 同浓 ｏＡ ０ （ Ｘ Ｉ ／ ） 和 ０
广东饲料 第 １ 卷第 ４ ９ 期
２１ 年 ４ ００ 月
松子壳 多糖体外诱生小鼠 Ｉ ２和 Ｌ 一 Ｔ ０ 的研究 Ｎ一 （ Ｆ
刘 中禄 吕铁钢 ｚ张永 亮 ｚ ， ，
（ ． 三军 医大学大坪医院野战外科研究所 实验动物 中心 ， １ 第 重庆 ４ ０ ４ ） ０ ０ ２