药物分析湖南大学第07章胺类药物的分析

盐酸丁卡因 + NaNO2
（乳白色）
2.与三氯化铁反应
对乙酰氨基酚具有酚羟基，可直接与三氯化铁试 液反应显蓝紫色。
3.与重金属离子反应
① 与铜和钴离子反应
碳酸钠 氯仿 显黄色 + 盐酸利多卡因 硫酸铜 蓝紫色 + H 盐酸利多卡因 + l2 亮绿色细小钴盐
第七章 芳香胺类药物的分析
第一节、芳胺类药物的分析 第二节、苯乙胺类药物的分析 第三节、苯丙胺类药物的分析
第一节 芳胺类药物的分析
芳胺类药物的基本结构类型：
• 芳伯氨基未被取代，在芳环对位有取代 的对氨基苯甲酸酯类； • 芳伯氨基被酰化，在芳环对位有取代的 酰胺类。
一．对氨基苯甲酸酯类药物的结构与性质
例1
盐酸普鲁卡因 ChP（2005）
【鉴别】取本品约 0.1g ，加水 2ml 溶解后，加 10 ％
氢氧化钠溶液 1ml ，即生成白色沉淀；加热，变为
油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色
石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加
盐酸酸化，即析出白色沉淀。
盐酸普鲁卡因 + NaOH 普鲁卡因（白色 ） 油状物（普鲁卡因） Δ 对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇 Δ （使湿润的红色石蕊试 纸变兰色） 对氨基苯甲酸钠 + HCl 对氨基苯甲酸（白色 ）
【鉴别】取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶 解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液 1m1 ，摇匀，放 臵 30min ；如显色，与对乙酰氨基酚对照品 1.0g 加 对氨基酚50g用同一方法制成的对照液比较，不得 更深（0.005％）。
2.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸 的检查
杂质来源
二乙胺基乙醇 盐酸普鲁卡因
Ar-N2+Cl- + H2N-Ar 盐酸的量

芳胺类药物:盐酸=1:2.5～6； 酸度过大，妨碍芳伯氨基的游 离，还可使亚硝酸盐将分解。
c. 反应温度

重氮化反应速度与温度成正比； 重氮盐随温度升高而加速分解； 温度升高10℃，重氮化反应速度加快2.5 倍，重氮盐分解速度亦加速2倍 Ar-N2+Cl- + H2O Ar-OH + N2 + HCl
4.盐酸罗哌卡因的对映体纯度检查
• 具有一手性碳原子，存在二个对映异构体； • R-盐酸罗哌卡因的心脏毒性较大，需严格控制 其含量； C3H7 CH
3
N
NHCO CH3
手性碳原子
HCl
• 用毛细管电泳法进行盐酸罗哌卡因对映体的纯 度检查，R-盐酸罗哌卡因的限量不得超过0.5%。
电泳手性添加剂：环糊精
（对乙酰氨基酚，paracetamol）
O S O
CH3CONH
NHCOCH3
（醋氨苯砜）
CH3
NHCOCH2N(C2H5)2 CH3
HCl
(盐酸利多卡因)
CH3 NHCO CH3 C4H9 N HCl
(盐酸布比卡因)
CH3 NHCO CH3
C3H7 N HCl
(盐酸罗哌卡因)
CH3 H N C O CH3 NH2 C CH3 HCl
点样量：供试品溶液200 l，对照液40 l；
展开剂：三氯甲烷-丙酮-甲苯（13:5:2）； 判断：供试品的杂质斑点不得比对照品主斑点更深。
④ 对氨基酚
使本品产生色泽并对人体有毒性，应严格控制 其限量。 OH 兰色配位化合物 对氨基酚 + 亚硝基铁氰化钠
例
对氨基酚检查（对照法 ）
COOCH2CH2N(C2H5)2 HCl
（盐酸丁卡因）
H2N CONHCH2CH2N(C2H5)2 HCl
（盐酸普鲁卡因胺）
3. 主要性质
① 芳伯氨基特性：本类药物得结构中具有芳伯氨 基（除盐酸丁卡因外），显重氮化 - 偶合反应； 与芳醛缩合成Schiff碱反应；易氧化变色。 ② 水解特性：分子结构中的含有酯键（或酰胺 键），易水解。 ③ 弱碱性：分子结构中具有叔胺氮原子（除苯佐 卡因外），具弱碱性；能与生物碱沉淀剂发生 沉淀反应，只能在非水溶剂体系中滴定。 ④ 其他特性：多为碱性油状液体或低熔点固体， 难溶于水，可溶于有机溶剂；其盐酸盐易溶于 水和乙醇，难溶于有机溶剂。
(Ar) R (Ar) R (R')H C =O + NH2 H NH2 R
△ , H2O
(R')H (Ar) R (R')H
C =NH 亚 胺 C =NH R Schiff 碱
二．酰胺类药物的结构与性质
1. 基本结构
均具有芳酰胺基
R3 R1 NH C R2 O
R4
2. 典型药物
HO
NHCOCH3
1. 基本结构
均具有对氨基苯甲酸酯的母体
H R1N
O C OR2
2. 典型药物
H2N
COOC2H5
（苯佐卡因）
H2N
COOCH 2 CH 2 N (C 2 H 5 ) 2 H Cl
（盐酸普鲁卡因）
H2N
COOCH 2 CH 2 N (C 2 H 5 ) 2 H Cl
Cl（盐酸氯普鲁卡因）
CH3(CH2)3NH
例
对氨基苯甲酸的检查（续）
点样量：上述两种溶液各10 l； 显色剂：对二甲氨基苯甲醛溶液 （ 2 ％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液 100ml ， 加冰醋酸5ml制成）；
判断：供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑 点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得 更深。
3.盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质和 光解产物的检查
【鉴别】取供试品约 50mg ，加稀盐酸 1m1 ，必要时缓
缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，
滴加碱性β- 萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由
橙黄到猩红色沉淀。
② 间接(加热水解后)重氮化反应：
对乙酰氨基酚、醋氨苯砜 例
对乙酰氨基酚 ChP（2005）
【鉴别】取本品约 0.1g ，加稀盐酸 5m1 ，臵水浴中加


重氮化速度：氢溴酸>盐酸>硝酸、硫酸
氢溴酸昂贵，以溴化钾+盐酸代替 HNO2 + NaCl
NaNO2 + HCl
HNO2 + HCl Ar-NH2
NOCl + H2O
快
NO+ClAr-NH-NO 慢
Ar-N=N-OH
快
NO+的浓度大，反应速度快
Ar-N2+Cl-
KBr + HCl HNO2 + HBr
杂质来源
水解
4-氨基-2-氯苯甲酸
盐酸氯普鲁卡因
光照
盐酸羟基普鲁卡因
例 色谱条件
高效液相色谱-质谱联用法
色谱柱：Zobax SB-C18柱；柱温：25℃ 流动相：0.5%乙酸水溶液-0.5%乙酸乙腈（87:13）； 流速：1ml/min；检测波长：254nm
质谱条件
裂解电压：70V；喷雾电压：4000V;干燥温度：350 ℃ 干燥气（N2）流速和压力：9.5L/min，40psi； 检测方法：正离子模式；质量扫描范围：80~160
【鉴别】取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解 后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤 过，结晶用水洗涤，在80℃干燥，依法测定，熔点 约为131℃。
6. 紫外分光光度法
• 本类药物结构中含有苯环，具有紫外吸 收光谱特征，可用于鉴别。
例1
盐酸布比卡因 ChP（2005）
【鉴别】取本品，精密称定，按干燥品计算，加 0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液， 照分光光度法测定，在263nm与271nm的波长处有最 大吸收；其吸收度分别为 0.53～0.58与0.43～0.48。
① 三硝基苯酚衍生物
例
盐酸利多卡因 ChP（2005）
【鉴别】取本品0.2g，加水20ml溶解。取溶液10ml， 加三硝基苯酚试液10ml，即生成沉淀；滤过，沉淀 用水洗涤后，干燥，依法测定，熔点为228～232℃， 熔融时同时分解。 盐酸布比卡因可用同法鉴别
② 硫氰酸盐衍生物
例
盐酸丁卡因 ChP（2005）
③ 有关物质
包括中间体、副产物及分解产物，如：对氨基 酚、对氯苯乙酰胺、偶氮苯等。
《中国药典》（2005）采用薄层色谱法，以对 氯苯乙酰胺为对照品，进行限量检查。
例 【鉴别】
有关物质检查（对照法 ）
供试品溶液：取本品1.0g，臵具塞离心管中，加乙 醚5ml，密塞振摇30min，离心后取上清液；
对照品溶液：取每1ml含对氯苯乙酰胺 1.0mg的乙醇 溶液适量，用乙醚稀释成每1ml含50g的溶液； 薄层板：硅胶GF254；
3. 主要性质（续）
④ 弱碱性：利多卡因、布比卡因、罗哌卡因含有 叔胺氮原子，妥卡尼结构中有伯胺氮原子，显 碱性，可以成盐。 ⑤ 与重金属离子发生沉淀反应：盐酸利多卡因、 盐酸布比卡因、盐酸罗哌卡因、盐酸妥卡尼分 子结构中的酰胺基上的氮可在水溶液中与铜离 子或钴离子配位，生成有色的配位化合物沉淀， 沉淀可溶于三氯甲烷等有机溶剂后呈色。
K1
HBr + KCl NOBr + H2O
HNO2 + HCl
K2
NOCl + H2O
K1≈300K2 加入KBr，可增大被测溶液中NO+的 浓度，所以能加快重氮化反应速度
b. 加入过量盐酸加速反应

重氮化反应速度加快； 重氮盐在酸性溶液中稳定； 防止生成偶氮氨基化合物影响测定结果. Ar-N=N-NH-Ar + HCl
② 羟肟酸铁盐反应
盐酸普鲁卡因胺 + H2O2 羟肟酸+ FeCl3 Δ 羟肟酸铁（紫红色 暗棕色 棕黑色）
③ 与汞离子的反应
盐酸利多卡因 + Hg(NO3)2 区别于： 对氨基苯甲酸酯类 + Hg(NO3)2 HNO3 Δ 显黄色
HNO3 Δ
红色或橙黄色
4. 水解产物的反应
本类药物分子中有些具有酯键结构，在碱性条 件下可水解，利用水解产物的特性可进行鉴别。
三．鉴别试验 1.重氮化-偶合反应
具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均 可发生重氮化反应，生成的重氮盐可与碱 性β-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。
Ar
HCl NH2 NaNO 2
-
重氮盐
OH 萘酚
橙黄～猩红色
① 直接重氮化反应：
盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺
例
盐酸普鲁卡因 Ch.P（2005）
四．特殊杂质检查
1.对乙酰氨基酚的特殊杂质检查
① 合成工艺
对硝基氯苯
水解
对硝基酚
还原
对氨基酚
对乙酰氨基酚 杂质：铁粉（还原剂）、对氨基酚（中间体）及其
有色氧化产物、对氯苯乙酰胺（副产物）等
② 乙醇溶液的澄清度与颜色检查
残留还原剂铁粉致使乙醇溶液产生浑浊，中间 体对氨基酚的有色氧化产物在乙醇中显橙红色 或棕色。
一般在室温（10～30℃）下进行，15℃以 下结果较准确。
d. 滴定速度（先快后慢）
五．含量测定
1.亚硝酸钠滴定法
① 原理：
本类药物分子结构中具芳伯氨基或水解后具芳
伯氨基，可用NaNO2滴定法测定含量。 Ar-NHCOR + H2O Ar-NH2 + H2O
NaNO2
H+ Δ
Ar-NH2 + RCOOH
Ar-N2+Cl- + NaCl + 2H2O
② 测定条件：
a. 加入适量KBr加快反应速度
热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液 5滴，
摇匀，用水 3ml 稀释后，加碱性β- 萘酚试液 2m1 ，振 摇，即显红色。
对乙酰氨基酚 对氨基酚
HCl、
③ 盐酸丁卡因：
不具芳伯氨基，无重氮化反应；其分子结构中的 芳香仲胺在酸性溶液可与 NaNO2反应生成乳白色沉 淀,可与芳伯氨基的同类药物区别。 H+
(盐酸妥卡尼)
3. 主要性质
① 水解后显芳伯氨基特性：本类药物的结构中具 有芳酰胺基，在酸性溶液中易水解为芳伯氨基 化合物。 ② 水解产物易酯化：对乙酰氨基酚和醋氨苯砜， 水解后产生醋酸，在硫酸介质中与乙醇反应， 发出醋酸乙酯的香味。 ③ 酚羟基特性：对乙酰氨基酚具有酚羟基，与 FeCl3发生呈色反应。
例2
苯佐卡因 ChP（2005）
【鉴别】取本品约 0.1g ，加氢氧化钠试液 5m1 ，煮 沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色 沉淀，并发生碘仿的臭气。 乙醇 苯佐卡因 + NaOH Δ CHI3 乙醇 + I2 + NaOH （碘仿臭气，黄色 ） Δ
5. 制备衍生物测熔点
酯键 水解
+
对氨基苯甲酸
脱羧
有色物质苯醌
氧化
苯胺
使注射液变黄，疗效下降，毒性增加
例
对氨基苯甲酸的检查（对照法）
【鉴别】 供试品溶液：精密量取本品，加乙醇稀释使成为每 1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液； 对照品溶液：取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成 每1ml中含30g的溶液； 薄层板：含羧甲基纤维素钠粘合剂的硅胶 H 薄层 板； 展开剂：苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14:1:1:4）;