高效液相色谱法测定辛伐他汀干混悬剂溶出度

高效液相色谱法测定辛伐他汀干混悬剂溶出度
王素珍;刘杰鑫;李荣荣;岳雪;李大成;王炳全;董惠钧
【摘要】目的建立辛伐他汀干混悬剂溶出度测定方法.方法选用甲醇-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾作为流动相,检测波长为238 nm,采用高效液相色谱法对辛伐他汀干混悬剂主药进行测定.采用桨法在不同溶出介质中考察辛伐他汀干混悬剂的溶出特征行为.结果辛伐他汀干混悬剂稳定性好,日内和日间的RSD值均<1％;辛伐他汀在25～200 mg·L-1范围内呈良好线性关素,r2=0.999 6;平均回收率100.5％～105.5％,RSD 0.7％～1.4％,重复性实验RSD值为2.89％,表明该方法准确度和精密度良好.结论建立的高效液相色谱法可对辛伐他汀干混悬剂进行溶出度测定.【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2017(036)0z1
【总页数】3页(P85-87)
【关键词】辛伐他汀干混悬剂;溶出度;溶出特征;色谱法,高效液相
【作者】王素珍;刘杰鑫;李荣荣;岳雪;李大成;王炳全;董惠钧
【作者单位】聊城大学药学院,聊城 252000;聊城大学药学院,聊城 252000;聊城大学药学院,聊城 252000;聊城大学药学院,聊城 252000;聊城大学生物制药研究院,聊城 252000;聊城大学生物制药研究院,聊城 252000;聊城大学药学院,聊城 252000【正文语种】中文
【中图分类】R917
DOI 10.3870/j.issn.1004-0781.2017.z1.040
辛伐他汀(simvastatin)是洛伐他汀的半合成衍生物，能够抑制肝细胞内羟甲基戊二酰辅酶A还原酶的活性，口服经过体内代谢后才能发挥降脂作用，控制血液中胆固醇的含量，同剂量条件下疗效优于洛伐他汀、普伐他汀和氟伐他汀等他汀类药物，对治疗高脂血症、脑卒中等具有显著疗效[1-3]。

目前临床上应用的辛伐他汀剂型主要有普通片、分散片、胶囊、滴丸、咀嚼片等。

对吞咽困难的患者如老人、儿童等人群存在服药困难的缺点，另外，辛伐他汀是一种难溶性药物，在体内溶解性差，口服吸收差，从而导致其生物利用度低[4]。

干混悬剂是提高生物利用度的优选剂型，由于药物在其中是以微粒的形式混散于辅料之中,因此分散度比较大,有利于胃肠道的吸收[5]。

干混悬剂具有稳定性好、方便服用、药物溶出速率快等优点，目前国内已有辛伐他汀干混悬剂上市。

笔者考察了辛伐他汀干混悬剂溶出特点，依据实验结果建立了辛伐他汀干混悬剂的溶出度测定方法，为辛伐他汀干混悬剂临床应用提供参考。

1.1 仪器 RC-3型智能溶出实验仪(天津市光学仪器厂)；L600型高效液相色谱仪(北京普析通用仪器有限责任公司)；S-3100型紫外分光光度计(韩国新科公司)；FE20型pH计(上海梅特勒-托利多公司)；5424R型台式高速离心机(德国Eppendorf公司)；超纯水仪(美国Millipore公司)；FBS224型电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司，感量：0.1 mg)；DZF型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；KQ5200V型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药与试剂辛伐他汀对照品(浙江海正药业有限公司，批号：B2140816)；辛伐他汀干混悬剂(自制)；辅料为羟丙基甲基纤维素(青岛优索化学科技有限公司)、微粉硅胶(宁波北仑雅旭化工有限公司)和蔗糖粉(天津市风船化学试剂科技有限公司)；分析纯磷酸二氢钾、无水磷酸二氢钠购自天津市福晨化学试剂厂；十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS,分析纯)购自天津市大茂化学试剂厂；甲醇
(色谱纯)购自天津市康科德科技有限公司；氢氧化钠购自莱阳经济技术开发区精细化工厂。

2.1 溶出介质溶液分别配制溶出介质水(含0.3%SDS)[6]，pH值6.8磷酸盐缓冲液(含0.3%SDS)[7]和pH值7.0磷酸盐缓冲液(含0.5%SDS)[8]。

2.2 供试品溶液称取辛伐他汀干混悬剂适量，参照溶出度测定法(《中华人民共和
国药典》2015版)加入溶出介质900 mL，转速为50 r·min-1，依法操作，经30 min后取样10 mL，用孔径0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液备用。

2.3 对照品溶液精密称取辛伐他汀对照品10 mg，置于100 mL量瓶中，加溶出
介质溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。

2.4 空白辅料溶液精密称取空白辅料约50 mg置于50 mL量瓶中，加入溶出介质超声处理20 min并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液备用。

2.5 检测波长的确定按照方法“2.3”和“2.4”项方法分别配制对照品溶液和空白辅料溶液。

在190～300 nm范围内扫描，确定辛伐他汀最大吸收波长，并排除空白辅料的干扰。

实验结果表明，辛伐他汀在238 nm处有最大吸收(图1)。

2.6 高效液相色谱测定条件色谱柱：Agilent-Eclipse XDB-Phenyl-C18(4.6
mm×250 mm，5 μm)，流动相：甲醇-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(4：1)；检测波长：238 nm；流速：1.0 mL·min-1，柱温：30 ℃；进样量：20 μL。

2.7 辅料干扰实验按照“2.3”和“2.4”项下方法配制不同溶出介质的对照品溶液和空白辅料溶液。

参照“2.6”项下高效液相色谱测定方法测定上述试样，记录色
谱图。

结果表明，3种介质溶液中空白辅料在辛伐他汀出峰保留时间处没有吸收色谱峰，不会干扰辛伐他汀的测定。

2.8 辛伐他汀稳定性考察精密称取辛伐他汀对照品，用流动相配制50和100 mg·L-1浓度的溶液，在室温下放置0 ，4 ，8 ，16，24，48 ，72 h后分别进样测定辛伐他汀含量(表1)。

结果表明不同浓度辛伐他汀溶液日间和日内稳定性良好，
且RSD值均在1%以下。

2.9 线性范围考察分别精密称取干燥至恒重的辛伐他汀对照品100 mg，用流动相配制浓度为200 mg·L-1的贮备液。

用稀释法分别配制25，50，75，100，150，200 mg·L-1浓度的标准系列溶液，分别取20 μL进样测定，记录峰面积。

以辛
伐他汀质量浓度C(mg·L-1)为横坐标，辛伐他汀峰面积A为纵坐标进行线性回归，得辛伐他汀的线性回归方程为:A=58 757C+58 891，r2=0.999 6。

结果表明，辛伐他汀在25～200 mg·L-1内浓度和峰面积呈良好的线性相关性。

2.10 加样回收率考察精密称取同一批已知含量的辛伐他汀干混悬剂，配制高、中、低3种浓度的样品溶液各2份，分别取20 μL进样测定，再精密称取6份对照品，每份10.0 mg，分别加入上述高、中、低3个浓度样品溶液中，按照“2.6”项色谱条件进样测定，计算辛伐他汀含量和加样回收率，结果如表2所示。

2.11 方法重复性考察按照“2.2”项方法配制6份辛伐他汀干混悬剂平行供试品
溶液：精密称取辛伐他汀干混悬剂约50 mg，用按照“2.1”项方法配制的pH值6.8的溶出介质溶解并定容至50 mL量瓶，分别编号，取上述供试品溶液测定。

结果表明，6份供试品溶液含量分别为0.70，0.69,0.74,0.74,0.73,0.72 mg，平均0.72 mg，RSD为2.91%，表明该方法的精密度良好。

2.12 溶出曲线考察称取辛伐他汀干混悬剂适量，分别以水(含0.3%SDS)、pH值6.8磷酸盐缓冲液(含0.3%SDS)和pH值7.0磷酸盐缓冲液(含0.5%SDS)3种溶液作为溶出介质，按照《中华人民共和国药典》2015年版溶出度测定法，采用桨法，转速为50 r·min-1，取样时间为5，10，15，30，45和60 min，用孔径0.45
μm微孔滤膜滤过，并及时在溶出杯中补充相同体积的溶出介质。

根据“2.6”项
的高效液相色谱测定方法测定不同时间点辛伐他汀的溶出度，以溶出累积释放率为纵坐标、取样间隔点为横坐标绘制溶出度曲线(图2)。

结果表明，辛伐他汀干混悬
剂除在水中溶出速率最高，10 min内溶出达到90%，pH值6.8和pH值7.0溶
出介质相比，辛伐他汀干混悬剂在pH值7.0缓冲液中溶出速率快，这可能与表面活性剂SDS的含量高有关。

通过比较3种溶出介质中辛伐他汀干混悬剂的溶出特性，优选水(含0.3%SDS)作为辛伐他汀干混悬剂溶出度测定介质。

溶出度测定是体外评价药物质量、判断药物临床疗效的有效方法，对评价药物渗透吸收特性和生物利用度提供重要指标[9]。

为了真实反映药物体内生物利用度，并
能够对不同剂型作出合理区分，进而预测药物的体内吸收过程[9]，需要确定合理
的溶出度实验条件和方法。

辛伐他汀属于低溶解性-高渗透性药物(BCSII类)，溶出限制了其在体内的吸收而且与药物在体内的生物利用度关系密切[10]。

目前辛伐他汀片剂溶出度测定的文献报道很多，但辛伐他汀干混悬剂作为一种新的剂型，笔者还未见溶出度测定的相关报道。

因此笔者选用高效液相色谱法建立了辛伐他汀干混悬剂的溶出度测定方法。

辛伐他汀在pH值1.2人工胃液、pH值4.0醋酸盐缓冲液中不稳定[6]，因此，未选择此2种溶液作为溶出介质，本实验选用水(含0.3%SDS)、pH值6.8磷酸盐缓冲液(含0.3%SDS)和《中华人民共和国药典》2015年版中有关溶出度测定规定的pH值7.0 磷酸二氢钠缓冲液(含0.5%SDS)为溶出介质，采用桨法，转速为50 r·min-1，温度37 ℃测定辛伐他汀干混悬剂的溶出度。

结果表明，辛伐他汀干混
悬剂在3种溶出介质中都有较好的溶出行为，尤其在溶出介质水(含0.3%SDS)中，溶出速率快，在10 min内能达到90%以上。

其原因可能与加了表面活性剂SDS
有关，笔者曾考察了辛伐他汀在不同缓冲液中的平衡溶解度，结果发现辛伐他汀在水中几乎不溶。

因此确定辛伐他汀干混悬剂溶出测定介质为水(含0.3%SDS)，测
定转速为50 r·min-1。

[1] 钱卫冲,黄峻,王海燕.国产辛伐他汀治疗高胆固醇血症的疗效[J].中国新药杂
志,2000,9(6):407-410.
[2] 张琳娜.辛伐他汀与阿托伐他汀治疗老年原发性高脂血症临床效果及安全性比较
[J].临床合理用药,2015,8(3):48.
[3] 龚如燕.两种他汀类药物在原发性高脂血症中的疗效差异分析[J].中国现代药物应用,2016,10(1):184-185.
[4] 唐文燕,廉云飞,张军东,等.辛伐他汀纳米混悬剂.中
国.201310531068.8[P].2015-5-6.
[5] 胡瑞标.头孢克洛干混悬剂的研究[D].广州:广州中医药大学，2011:6.
[6] 陈长水,卓开华.7厂家辛伐他汀片的溶出度考察[J].中国药
房,2011,22(13):1203-1205.
[7] 赵冬梅,王晓晖,张华俊.国内10省份不同厂家辛伐他汀片的溶出度测定及质量评价[J].中国药房,2016,27(9):1275-1278.
[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版
社,2015:通则0931.
[9] 董红环,程显隆,刘洋,等.雷奈酸锶干混悬剂溶出度方法的建立[J].药物分析杂志,2015,35(3):543-547.
[10] 林的仕,余楚钦,林华庆,等.3种头孢呋辛酯干混悬剂体外溶出行为比较[J].医药导报,2014,33(4):503-506.
【相关文献】
[1] 钱卫冲,黄峻,王海燕.国产辛伐他汀治疗高胆固醇血症的疗效[J].中国新药杂志,2000,9(6):407-410.
[2] 张琳娜.辛伐他汀与阿托伐他汀治疗老年原发性高脂血症临床效果及安全性比较[J].临床合理用药,2015,8(3):48.
[3] 龚如燕.两种他汀类药物在原发性高脂血症中的疗效差异分析[J].中国现代药物应
用,2016,10(1):184-185.
[4] 唐文燕,廉云飞,张军东,等.辛伐他汀纳米混悬剂.中国.201310531068.8[P].2015-5-6.
[5] 胡瑞标.头孢克洛干混悬剂的研究[D].广州:广州中医药大学，2011:6.
[6] 陈长水,卓开华.7厂家辛伐他汀片的溶出度考察[J].中国药房,2011,22(13):1203-1205.
[7] 赵冬梅,王晓晖,张华俊.国内10省份不同厂家辛伐他汀片的溶出度测定及质量评价[J].中国药
房,2016,27(9):1275-1278.
[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:通则0931.
[9] 董红环,程显隆,刘洋,等.雷奈酸锶干混悬剂溶出度方法的建立[J].药物分析杂志,2015,35(3):543-547.
[10] 林的仕,余楚钦,林华庆,等.3种头孢呋辛酯干混悬剂体外溶出行为比较[J].医药导
报,2014,33(4):503-506.
中图分类号 972.6；R917。