菌种保存大家谈。甘油的浓度。Word版
甘油保藏真菌实验步骤
甘油保藏真菌实验步骤以甘油保藏真菌实验步骤为标题，本文将介绍甘油保藏真菌的实验步骤及其原理。
真菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，不仅在生态系统中起着重要的角色，还对人类的生活和健康产生着重要的影响。
因此，为了研究和保藏真菌的多样性和功能，甘油保藏法成为了一种常用的方法。
甘油保藏真菌是一种简单且有效的方法，它可以延长真菌的保藏时间，并且能够保持真菌的活性和生物学特性。
下面将详细介绍甘油保藏真菌的实验步骤。
实验步骤如下：步骤一：准备所需材料和设备1. 真菌菌株：选择要保藏的真菌菌株，确保其纯度和活力。
2. 甘油溶液：制备一定浓度的甘油溶液，常用的浓度为20%。
3. 培养基：选择适合真菌生长的培养基，如琼脂培养基。
步骤二：培养真菌菌株1. 在琼脂平板上点菌：使用无菌技术，在琼脂平板上点菌，培养真菌菌株。
2. 培养真菌：将琼脂平板放置在适当的温度和湿度条件下，培养真菌，通常在25-30摄氏度下培养。
步骤三：收集真菌菌株1. 真菌生长：观察真菌的生长情况，当真菌菌落达到一定大小时，可以进行下一步操作。
2. 收集真菌菌落：使用无菌的移液管或铲子，将真菌菌落从琼脂平板上收集到无菌试管中。
步骤四：甘油保藏真菌1. 添加甘油溶液：向无菌试管中加入适量的甘油溶液，使真菌菌落完全浸泡在甘油溶液中。
2. 混合均匀：轻轻摇晃试管，使甘油溶液与真菌菌落充分混合。
3. 封闭试管：用无菌瓶塞或铝箔封闭试管，防止外界的污染。
步骤五：保存真菌1. 温度和湿度：将封闭的试管存放在适当的温度和湿度条件下，通常在4摄氏度下保存。
2. 检查真菌：定期检查保存的真菌，观察其菌落的生长情况和活力。
甘油保藏真菌的原理是利用甘油的保湿性和抗冻性，使真菌菌株在低温下长时间保存。
甘油可以增加真菌的渗透压，防止真菌细胞脱水和冻结，从而保持真菌的活性和生物学特性。
总结一下，甘油保藏真菌是一种简单有效的方法，通过将真菌菌株浸泡在甘油溶液中并在低温下保存，可以延长真菌的保藏时间并保持其活性和生物学特性。
甘油保存菌株
甘油保存菌株
甘油保存菌株是一种常见的微生物保存方法，它可以有效地保护微生物的生命活力和遗传信息，使其长期保存并可随时使用。
甘油保存菌株的方法简单易行，适用于各种微生物，是微生物学研究中不可或缺的一种技术手段。
甘油保存菌株的原理是利用甘油的保护作用，将微生物细胞悬液与甘油混合后，冷冻保存在-80℃或液氮中。
甘油可以渗透进入细胞内部，形成一层保护膜，防止细胞在冷冻过程中受到损伤。
同时，甘油还可以降低细胞内水分的含量，减少细胞在冷冻过程中的结晶和破裂，从而保护细胞的完整性和生命活力。
甘油保存菌株的优点是保存时间长，可达数年甚至数十年之久，保存的菌株可以随时使用，不需要频繁传代和培养，可以减少微生物的变异和突变。
此外，甘油保存菌株的方法简单易行，不需要特殊的设备和技术，适用于各种微生物，是一种经济实用的微生物保存方法。
甘油保存菌株的操作步骤如下：首先，将微生物细胞悬液与甘油按照一定比例混合均匀，通常甘油的浓度为15%-20%。
然后，将混合液分装到冷冻管中，标明保存的菌株名称和保存日期，放入-80℃或液氮中保存。
在需要使用时，将冷冻管取出，解冻后进行传代和培养即可。
需要注意的是，甘油保存菌株的成功与否与保存前的细胞状态和保存条件密切相关。
因此，在进行甘油保存前，需要对菌株进行筛选和培养，保证细胞的健康状态和生命活力。
同时，在保存过程中，需要严格控制保存温度和保存时间，避免细胞受到不必要的损伤和死亡。
甘油保存菌株是一种简单易行、经济实用的微生物保存方法，可以有效地保护微生物的生命活力和遗传信息，是微生物学研究中不可或缺的一种技术手段。
甘油保藏真菌实验步骤
甘油保藏真菌实验步骤以甘油保藏真菌实验步骤为标题，我们将介绍如何使用甘油来保藏真菌样品。
甘油是一种常用的保存剂，能够有效保护真菌不受环境变化的影响，从而保持其生活活力和保存样品的完整性。
实验步骤如下：1. 准备所需材料和设备- 甘油溶液：将甘油加入蒸馏水中，浓度通常为20%或50%。
- 真菌样品：可以是培养皿上的菌落、孢子悬液或真菌菌丝体等。
- 冻存管或其他合适的保存容器。
- 称量器、移液器、滤纸等实验用具。
2. 准备甘油溶液- 根据需要的浓度，称量适量的甘油和蒸馏水。
- 将甘油加入蒸馏水中，充分搅拌混合，直至甘油完全溶解。
3. 处理真菌样品- 将真菌样品转移到一个干净的培养皿或容器中。
- 使用移液器逐滴加入甘油溶液，将样品浸泡在甘油中。
注意避免气泡的产生。
- 如果样品体积较大，可以使用滤纸轻轻吸去多余的液体。
4. 转移样品至保存容器- 使用移液器或其他合适的工具，将处理好的真菌样品转移到冻存管或其他保存容器中。
- 注意将样品尽量放置在冻存管或容器的中央，避免接触到容器的壁面。
5. 密封保存- 将冻存管或容器盖紧，确保密封性良好，避免甘油溶液的蒸发和外界的污染。
- 可以在容器表面标记保存日期、真菌名称等相关信息，方便后续使用和管理。
6. 存储条件- 根据不同的真菌种类和实验需求，选择适当的存储温度和条件。
- 大多数真菌可以在4摄氏度下长期保存，但某些特殊真菌可能需要更低的温度或其他特殊的存储条件。
通过以上步骤，我们可以使用甘油成功保藏真菌样品。
甘油的作用是降低真菌细胞内部的水分含量，减少细胞膜的冻融损伤，从而保持真菌的活力和保存样品的完整性。
同时，甘油还具有抗菌作用，可以抑制真菌样品的微生物污染。
需要注意的是，甘油保存的真菌样品在使用前需要重新培养，以恢复其生长能力。
此外，在保存过程中，我们还应定期检查样品的状态，确保保存环境的稳定性和样品的健康状态。
总结：甘油保藏真菌是一种常用的方法，可有效保护真菌的完整性和生活活力。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
菌种保存大家谈。甘油的浓度。
菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国内外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法
Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
甘油冻存细菌步骤
甘油冻存细菌步骤细菌的冻存是一种常见的保存方法，可以长期保留细菌的活性和遗传特性。
甘油冻存是其中一种常用的冻存方法。
下面将详细介绍甘油冻存细菌的步骤。
一、准备工作1.1 首先，准备好所需的试剂和器材。
这包括甘油溶液、培养基、离心管、离心机、冷冻管、冰盒等。
1.2 清洗器材，确保无菌。
使用无菌操作台进行操作。
二、制备甘油溶液2.1 取一定量的甘油溶液，加入适量的无菌蒸馏水，充分溶解。
2.2 调整甘油溶液的浓度。
一般常用的甘油浓度为15%-20%。
三、培养细菌3.1 选择需要冻存的细菌菌株，进行预培养。
3.2 在培养基上划线培养细菌，培养时间根据不同细菌菌株的生长速度而定。
四、收获细菌4.1 培养时间到达后，取出培养皿，观察细菌生长情况。
确保细菌有良好的生长状态。
4.2 使用无菌的吸管或移液器，将细菌悬浮液吸取到离心管中。
五、细菌冻存5.1 向离心管中加入适量的甘油溶液，悬浮液和甘油的比例一般为1:1。
5.2 轻轻颠倒离心管，充分混合细菌悬浮液和甘油溶液。
5.3 将混合液分装到冷冻管中，每管装满为止。
5.4 将冷冻管盖好，贴上标签，标明菌株名称、冻存日期等信息。
5.5 将冷冻管放入冰盒中。
六、冷冻过程6.1 将冰盒放入低温冰箱中，温度一般为-80℃。
6.2 冷冻时间根据不同细菌菌株而定，一般为2-4小时。
6.3 冷冻过程中，要避免震动和温度波动，确保细菌冻存的成功率。
七、细菌保存7.1 冷冻时间到达后，将冷冻管从冰箱中取出，迅速转移到液氮罐中进行长期保存。
7.2 细菌在液氮中的保存时间可以达到数年甚至更久。
甘油冻存细菌的步骤相对简单，但操作时需要注意以下几点：1. 所有操作要在无菌条件下进行，避免细菌受到污染。
2. 甘油溶液的浓度要准确掌握，过高或过低都可能影响细菌的存活率。
3. 细菌冻存过程中要控制好冷冻时间和温度，避免细菌冻结过程中产生冰晶对细胞造成的伤害。
4. 冷冻管的密封要严密，以防止细菌样品受到污染或失活。
菌种保藏方法甘油
菌种保藏方法甘油
甘油是一种常用的菌种保藏方法，具体步骤如下：
1. 准备甘油溶液：用无菌蒸馏水将甘油稀释至10-20%的浓度。
可以使用无菌瓶或试管来制备溶液。
2. 菌种准备：将需要保藏的菌种以活菌母液或活菌培养物的形式准备好。
3. 混合菌种和甘油溶液：将相应的菌种接种到甘油溶液中。
通常可用无菌吸管将菌种转移到甘油溶液中。
4. 混匀：轻轻摇动或翻转瓶子，确保菌种均匀分散在甘油溶液中。
5. 分装：将混匀的菌种溶液分装到无菌小容器中，如无菌管或试管中。
每个容器通常只需要接种几滴。
6. 标记和封存：在容器上标记菌种名称、时间和保藏条件，并用无菌盖子或锡箔密封容器。
7. 保藏：将标记好的菌种容器存放在适当的温度和湿度条件下，如4冰箱或-80冰箱。
注意事项：
- 进行所有步骤时，确保操作环境和操作器具都是无菌的，以防止其他细菌或真菌的污染。
- 甘油保藏法适用于大多数菌种，但并非适用于所有菌种。
某些菌种对甘油不耐受或易于受损，可能需要使用其他保藏方法。
- 在保藏期间，定期检查菌种的存活情况，并根据需要制备培养物以进行后续的实验或培养。
菌种甘油保存方法
菌种苦油保存要领之阳早格格创做
1 将要保存菌种交种于LB液体培植至对于数死少久（肉眼睹培植体系内浑浊即可）
2 将苦油密释至浓度为50%（等体积蒸馏火加等体积苦油，苦油需要缓缓吸）
3 将苦油、2 ml离心管、枪头等考查用品于121℃灭菌20min
4无菌条件下将菌液取50%浓度苦油1:1等体积混同于离心管中，苦油末浓度为25%
5于-20℃冰箱内保存
灵验期1年
再次使用钱30°火浴后交种到固体培植基上即可
平常是曲交把支躲液交到液体培植基中，让后死少24-48h 后，将菌液再次转交到新的液体培植基中.新的菌液便不妨划线培植了.
本初菌种没有敷的情况下先扩繁十个固体培植基
如果用菌液的话交种到液体培植基上
步调是固液液用第两个真验第三个保存。
菌种甘油保存
菌种甘油保存
1、配制30%甘油，121摄氏度高压灭菌20min，常温保存既可，一般都是现配现用
2、将要保存菌种接种于LB（或带相应抗性）液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
3、无菌条件下将菌液与30%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为15%
4、再次使用前置冰浴融化后接种到固体培养基上即可
5、一般零下20度一年左右，零下80度二年以上，时间太长就使用前活化下
甘油保菌原理
1、冷冻保存时菌液会被冻起来，内部产生的“冰晶”会使细胞破裂等，加入如甘油后可以防止对细胞的伤害。
2、简单来说就是抗冻，原理是甘油能够提高水体的粘稠度，使其冰点提高，防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害，一般使用甘油的终浓度在10%-20%，该范围外的浓度会对细胞产生毒性，质粒会很容易丢失
3、高浓度甘油保存菌种据说会影响菌种的表达活性如果该菌只用一次怎么化都没关系的甘油浓度太高，质粒就很容易丢失。
菌种甘油保存方法
菌种甘油保存方法文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
菌种甘油保存方法1 将要保存菌种接种于LB液体培养至对数生长期（肉眼见培养体系内浑浊即可）
2 将甘油稀释至浓度为50%（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）
3 将甘油、2 ml离心管、枪头等试验用品于121℃灭菌20min
4 无菌条件下将菌液与50%浓度甘油1:1等体积混合于离心管中，甘油终浓度为25%
5 于-20℃冰箱内保存
有效期1年
再次使用钱30°水浴后接种到固体培养基上即可
正常是直接把保藏液接到液体培养基中，让后生长24-48h后，将菌液再次转接到新的液体培养基中。
新的菌液就可以划线培养了。
原始菌种不够的情况下先扩繁十个固体培养基
如果用菌液的话接种到液体培养基上
步骤是固液液用第二个实验第三个保存。
菌种保存大家谈。甘油的浓度。
菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国内外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
80甘油保存菌种步骤
80甘油保存菌种步骤
1. 准备甘油溶液：向无菌蒸馏水中加入一定量的高纯度甘油（通常浓度为20％或30％），并用适当的方法将其溶解均匀。
2. 收集细菌菌落：从培养基上收集细菌菌落，可以使用无菌耳棒、针筒、平板刮片等工具。
3. 将菌落转移到甘油溶液中：将菌落转移到含有甘油的试管或培养皿中，用无菌的工具将菌落均匀悬浮在甘油溶液中。
4. 混匀：用无菌铁环、耳棒或震荡器等方法将菌落和甘油溶液混合均匀。
5. 储存：将混合好的甘油菌种溶液分装到无菌的冰冻管中或其他合适的容器中，每管中约含有1-2毫升的溶液。
6. 冷冻：将制备好的菌种溶液迅速放入低温冷冻器中，以-
70°C或更低的温度冷冻保存。
7. 标签：在冰冻管或容器上标明菌株信息，如菌种名称、日期、菌株编号等。
8. 存放：将冷冻好的菌种溶液移至液氮罐或其他特定的冷冻设备中，存放在低温条件下保存。
注意事项：
- 所有步骤都需在无菌条件下进行，以防止细菌的污染。
- 储存的菌种溶液应尽快冷冻保存，以防止菌落中细菌的多余
增殖。
- 菌种的冷冻保存时间一般不宜超过6个月。
- 取用菌种时，应尽量避免反复冻融，以防止菌种活力的下降。
菌种保存大家谈。甘油地浓度。
菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
菌种保存的方法 甘油
菌种保存的方法甘油菌种的保存对于微生物的研究和应用非常重要。
甘油是一种常用的保存剂，可以用于长时间保存和保持菌种的活力。
本文将介绍甘油的使用方法以及其在菌种保存中的作用。
甘油的作用甘油（Glycerol）是一种无色、无味、无毒的有机化合物，具有良好的保湿性和稳定性。
在菌种保存中，甘油具有以下作用：1. 维持菌种的生理状态：甘油可以降低细胞脆性，防止细胞在保存过程中的损伤和死亡，从而保持菌种的活力。
2. 提高低温储存能力：甘油可以降低水分冻结的温度，避免细胞在冷冻过程中的损伤，提高菌种在低温下的存活率。
3. 增加菌种的长期保存能力：甘油可作为营养源供细胞使用，延缓细胞老化和死亡，从而延长菌种的保存时间。
甘油的使用方法步骤一：制备甘油溶液首先需要制备甘油溶液，一般浓度为15%-20%。
具体制备方法如下：1. 取一定量的甘油溶液，一般可选择无菌蒸馏水或生理盐水作为稀释溶剂。
2. 将甘油溶液和稀释溶剂按照一定比例混合并彻底搅拌，直到完全溶解。
步骤二：制备菌种1. 选择需要保存的菌种，可以是细菌、真菌、酵母等微生物。
2. 选取菌落形成较好的菌株，从培养皿上用无菌鉴别环或鉴别针取一小部分菌落。
3. 将菌落转移到无菌培养基上，进行预培养。
步骤三：冻存菌种1. 在冻存管中加入适量的甘油溶液，使其覆盖菌种。
2. 将培养基上的预培养菌液用无菌鉴别环或鉴别针均匀刷取一些菌液，滴加到冻存管中的甘油溶液中，轻轻摇动以使菌种均匀分布。
3. 加盖冻存管盖，并密封好。
4. 将冻存管放入冻存盒中，标注样品信息，存放于-80或液氮保存罐中。
步骤四：菌种复苏与传代在需要使用菌种时，按照以下步骤进行菌种复苏和传代：1. 从冻存盒中取出冻存管，迅速将其放入37水浴中解冻，使菌种迅速复苏。
2. 将菌液转移到含有适宜培养基的无菌试管或烧杯中。
3. 进行菌种的传代培养，并进行相关实验或应用。
注意事项在使用甘油保存菌种时，需要注意以下事项：1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免细菌或其他微生物的污染。
菌种保存大家谈。甘油的浓度。
菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国内外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
甘油在菌种包藏中的作用
甘油在菌种包藏中的作用
甘油菌低温保存的基本原理是：在-70℃或液氮中冻存，细菌内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。
在0℃—-70℃温度范围内，水晶呈针状，极易招致细菌的严重损伤。
用电镜观察，可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔。
因此，为了避免0℃—-70℃冰晶的形成和细菌膜两侧离子平衡的破坏，需要加保护剂。
甘油可降低冰点，在缓慢的冻结条件下，能使细菌内水分在冻结前透出细菌外。
贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成，甘油对细菌无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细菌.
ii.
使用浓度范围为15%-50%，一般常用30%。
在保存瓶中按1：1加入60%的甘油和菌液，混匀后贮存于-70℃或液氮中。
复苏后细菌仍能生长，活力不受任何影响。
甘油的保菌作用及浓度
甘油保菌的作用及浓度（三种说法）
一、冷冻保存时菌液会被冻起来，内部产生的“冰晶”会使细胞破裂等，加入如甘油后可以防止对细胞的伤害。
二、简单来说就是抗冻，原理是甘油能够提高水体的粘稠度，使其冰点提高，防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害，一般使用甘油的中浓度在10%-20%，改范围外的浓度会对细胞产生毒性。
三、甘油的主要作用就是防止在冻存细菌时产生的冰晶对细胞造成的损害，我们实验室一般用30%的甘油，但保存携带质粒的菌种时甘油浓度要低些，因为甘油浓度太高，质粒就
很容易丢失。
高浓度甘油保存菌种据说会影响菌种的表达活性如果该菌只用一次怎么化都没关系的甘油浓度太高，质粒就很容易丢失。
甘油保存菌种的方法,保存菌种的温度
甘油保存菌种的方法，保存菌种的温度1、方法：准备好镊子、EP管、枪头等工具，并进行杀菌处理；手和镊子用酒精擦拭消毒，用镊子取出约10支的EP管放到试剂盒里；找到移液枪，取出50%的甘油（等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）放到EP管里面，再取出菌种放到EP管里面；最后把所有的菌种都装入到一个大袋子里盖好盖子标注好保存起来，放入-20°C 的冰箱里保存。
2、温度要求：长期保存，建议在-70°C下冻存；短期保存，可在-20°C保存。
一、甘油保存菌种的方法1、原料/工具甘油、镊子、EP管、移液枪。
2、方法/步骤（1）准备工具并杀菌：准备好镊子、EP管、枪头等工具，把这些工具放到高压灭菌的锅里进行杀菌。
（2）把EP管放入试剂盒：用酒精将手和镊子擦拭消毒，用镊子取出约10支的EP管放到试剂盒里。
（3）把甘油和菌种放入EP管：找到移液枪，取出50%的甘油（甘油稀释至50%浓度的方法：等体积蒸馏水加等体积甘油，甘油需要慢慢吸）放到EP管里面，再取出菌种放到EP管里面。
（4）保存并放入冰箱：把所有的菌种都装入到一个大袋子里盖好盖子标注好保存起来，放在-20°C的冰箱里保藏。
二、甘油保存菌种的温度1、甘油保存菌种，若是长期保存，建议在-70°C下冻存，保藏时间一般为2-4年左右；在-20°C保存时间较短，通常只有1年左右。
目前实验室大都采用-80°C（-70°C）冰箱保藏。
2、甘油冷冻保藏菌种是目前实验室应用最为广泛的一种的菌种保藏方法，原理是以甘油为保护剂，低温冷冻条件下，使微生物的新陈代谢趋于停止，从而达到长期有效的保藏。
一般来说，保藏温度越低，保藏效果越好。
这种方法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种。
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菌种保存大家谈。
甘油的浓度。
2009-08-15 01:13大家好！我是保藏中心，最近发现基因酷保藏中心的共享菌株的保存出现了较严重的问题，06年07年酷友共享的菌株很多都活化不了，好些酷友想要，保藏中心却不能应助，对此我们很抱歉！因此，在此向大家赐教，菌株应如何保存呢？望大家能分享经验，多提出建议（保藏中心如何保藏菌株和管理菌株为佳），一起努力搭建好这个平台，让它能帮到更多酷友！作者: 保藏中心时间: 09-2-19 10:55有人说，冷冻干燥保藏法是菌种保藏最有效的方法之一。
因为没有做过，所以请教做过这方面的酷友，大肠杆菌的冷冻保藏应该注意的事项?甘油冷冻保藏及穿刺菌的保藏一般能保藏多久呢？作者: 我是好人时间: 09-2-19 21:34冷冻干燥法是国内外一致认为比较理想的菌种保藏方法。
冷冻真空干燥保藏法又称冷冻干燥保藏法，简称冻干法。
它通常是用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。
并在真空条件下立即融封，造成无氧真空环境，最后置于低温下，使微生物处于休眠状态，而得以长期保藏。
常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
由于此法同时具备低温、干燥、缺氧的菌种保藏条件，因此保藏期长，一般达5～15年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。
除不产孢子的丝状真菌不宜用此法外，其他大多数微生物如病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等均可采用这种保藏方法。
保藏菌种需用时，可在无菌环境下开启安瓿管，将无菌的培养基注入安瓿管中，固体菌块溶解后，摇匀复水，然后将其接种于适宜该菌种生长的斜面上适温培养即可。
该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。
不适合酷友频繁的求助菌种。
我们实验室保藏菌种，不管是细菌，放线菌还是霉菌和酵母，我们都是用的甘油管保藏。
就是划斜面得到单菌落，将单菌落置于液体培养基培养至对数期，在EP管中保存，菌液与甘油体积比为1：1，甘油要灭菌的。
-20摄氏度保存即可。
我们的菌种有保存七八年的依然能用。
方便快捷。
管理员不妨试试。
作者: 保藏中心时间: 09-2-20 23:03:'终于有酷友理我了！感动ing十分感谢您的指教！为了表达谢意，加两点威望作者: 保藏中心时间: 09-2-20 23:33如您所说，冷冻干燥法该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备，不适合酷友频繁的求助菌种。
但考虑到一个菌株的传代问题，菌种传代次数对菌株特性的影响？我有这样的想法：每个菌种用冷冻干燥法保藏一些，也用甘油菌保藏（用于给酷友应助，一两年后再拿冷冻干燥法保藏的菌种活化，保新一批甘油菌、穿刺菌用于应助（其实保藏中心一直都有保甘油菌，但06、07年的菌株还是有出现问题）。
这样考虑怎样呢？看了您介绍的冷冻真空干燥保藏法的操作，有不明白的地方：1、保护剂如脱脂牛奶、淀粉、葡聚糖要如何处理灭菌呢？2、菌种在冷冻干燥机里冷冻干燥时会不会染菌，还是需要事先处理下冷冻干燥机？3、如何在真空条件下融封？因为没有做过这方面的工作，很多不懂的，问了不少，请谅解。
还有，液氮冷冻保藏法和冷冻干燥法相比哪种方法较好，那种比较适合保藏中心？还是有其它方法更适合呢？大家多多提出宝贵意见、分享下经验啦！作者: 我是好人时间: 09-2-22 20:295#保藏中心作者: 我是好人时间: 09-2-22 20:43液氮超低温保藏法是目前比较理想的一种菌种保藏方法，已被国外一些菌种保藏机构作为常规的方法应用，美国的ATCC已于1965年开始用用，我国的菌种保藏中心也正积极的创造条件，准备或已采用此法。
但投资费用较大，并要有个可靠的氮源。
作者: 保藏中心时间: 09-2-24 09:50您好！您上传的资料中介绍了好多种菌种保藏的方法，很受用，十分感谢您的帮助和支持！但我有一些疑问想请教下：1/您上传的PPT中讲到“在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。
在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高，造成细胞水分外渗而大量脱水，可能使细胞死亡。
如快速降温，胞内也很快形成冰晶，胞内外渗透压基本平衡，同时胞内冰晶较小，对细胞及原生质膜的损伤也较小，菌株不易死亡，影响也较小。
”，按这样说快速降温对细胞的损伤较小，但这与细胞放入液氮罐前应先进行梯度降温的做法似乎有矛盾。
2/甘油菌甘油终浓度为40%，这个浓度是如何定的呢？因为甘油具有脱水作用，浓度高了会使菌株脱水死亡，有的人建议用终浓度为10%~20%的浓度，您是如何看待这个情况呢？作者: 我是好人时间: 09-2-27 10:27管理员您好，很佩服您发现问题的能力，嘿嘿，我这些资料都是在网上给您找的，我们实验室也没有这种设备，我也没做过，所以很多问题也不是很清楚。
我们保存菌种都是用的甘油保存，但也没有注意到您说的甘油具有脱水这个问题，很是受用，以后我会注意的。
我们用甘油保存过细菌，酵母，霉菌和放线菌，40%-50%的甘油是它的最终浓度。
甘油浓度过低低温保存易结冰，使菌死亡。
我同学有直接将菌液-20保存的，不加任何保护剂，但保存的时间很短，他们保存过一年的，但很多有死掉的。
我们做大肠杆菌感受态，最终甘油是15%的浓度，有时结冰也会使菌死掉。
我用40%-50%的甘油最终浓度一直很好，也不结冰，所以也没考虑您提出的那个问题，嘿嘿。
对于液氮超低温保藏我又查了本资料，它是把熔封的安瓿管进行慢速冷冻，以每份钟下降1度的速度直至-35度，最后移到液氮中保藏。
其他的就没说什么了。
很不好意思啊。
作者: 保藏中心时间: 09-2-28 17:18不用不好意思！大家互相交流学习。
我也是上网查了相关的资料，发现有些细节问题说法不一，自己经验少，所以不懂的问题要向大家请教！作者: wyat1984 时间: 09-3-5 02:40我们实验室都是用新鲜菌液+50%灭菌甘油1：1混匀，终浓度25%甘油，-80度保存的。
菌体可以多离心收集一点。
冻干保存用的脱脂牛奶110度15分钟灭菌。
其实很多时候大家要的是质粒而不是菌，一般的DH5,JM109之类的大家都有。
为什么不抽成质粒保存呢？-80度基本不会降解。
作者: 保藏中心时间: 09-3-5 10:13您好！感谢您的支持。
“其实很多时候大家要的是质粒而不是菌，一般的DH5,JM109之类的大家都有。
为什么不抽成质粒保存呢？-80度基本不会降解。
”保藏中心的质粒都是抽提保存的，我想您有些误解了，现出现的是菌株的保藏问题而不是质粒的保藏问题，DH5,JM109之类的菌株是很多人都有，但也还有其它不少的菌株较少的。
作者: nfu03200 时间: 09-3-15 10:45我这里一般是需要用到质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合，酵母用的是30%的甘油和菌液1：1混合，然后放在-80度冰箱中保存，效果很好作者: 保藏中心时间: 09-3-16 18:43我这里一般是需要用到质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合，酵母用的是30%的甘油和菌液1：1混合，然后放在-80度冰箱中保存，效果很好nfu03200 发表于 09-3-15 10:45质粒的大肠杆菌用15%的甘油1：1和菌液混合,甘油的终浓度7.5％，感觉挺低的，请问您那里-80度保存大概能保存多长时间？作者: ferraricyn 时间: 09-3-20 15:17本帖最后由 ferraricyn 于 09-3-20 15:21 编辑个人觉得脱脂牛奶冻干的方法保藏效果较好，我们的霉菌就是这么弄哦，看了一下，原来都是细菌保藏，那还是加甘油保护，液氮速冻，-70保藏吧，呵呵另外，有的冻干机是有封口功能的，冻干机也是在无菌室内操作的，冻干后可以取出封口，同样是无菌条件下操作的作者: yueyuetby 时间: 09-3-21 17:37我们实验室的保存方式是，按3：1的比例加入菌液和甘油，一定要混匀，然后放在-70度冰箱中保存。
作者: rcm001 时间: 09-3-29 21:20本帖最后由 rcm001 于 09-3-29 21:23 编辑您好！您上传的资料中介绍了好多种菌种保藏的方法，很受用，十分感谢您的帮助和支持！但我有一些疑问想请教下：1/您上传的PPT中讲到“在作低温保藏时，注意尽量不损伤细胞。
在缓慢冷冻时，胞外基质一般较快结冰而 ...保藏中心发表于 09-2-24 09:50不是啊！细菌保存最好要快速冷冻，我在PASTEUR作博士后时他们的PROTOCOL 都是用液氮先浇在有菌液＋冷冻液的EP管上，冻好后放－80度冰箱，可以保存10年左右。
冷冻液配方需再找找再给你，印象中不是简单的甘油溶液。
动物细胞当然是要缓慢冷冻了。
作者: rcm001 时间: 09-3-29 21:43本帖最后由 rcm001 于 09-3-29 21:52 编辑如您所说，冷冻干燥法该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备，不适合酷友频繁的求助菌种。
但考虑到一个菌株的传代问题，菌种传代次数对菌株特性的影响？我有这样的想法：每个菌种用冷冻干燥法保藏一些 ...保藏中心发表于 09-2-20 23:33冻干保护剂是先配成溶液，再用0.22um的滤膜过滤除菌，再按比例加到培养到对数生长期的菌液；真正的冻干机操作当然不会染菌了，进去的空气都是经过滤的；真空封融菌种管是把冻好的菌种管口套在抽气机上，抽至一定真空度，如6pa，在喷灯上封融。
冻干曲线（温度和真空度随时间调整的曲线）也影响到存活率。
作者: 保藏中心时间: 09-3-30 10:35不是啊！细菌保存最好要快速冷冻，我在PASTEUR作博士后时他们的PROTOCOL 都是用液氮先浇在有菌液＋冷冻液的EP管上，冻好后放－80度冰箱，可以保存10年左右。
冷冻液配方需再找找再给你，印象中不是简单的甘油溶液。
...rcm001 发表于 09-3-29 21:20非常感谢！期待......作者: rcm001 时间: 09-3-30 21:59冷冻液配方来了：--翻了半天，终于找到了，是HOGNESS，哈哈－－excellent for E.coli preservation10X Hogness Modified Freezing Medium:Solution A: 5 mM MgSO4x4 H2O, 20 mM Sodium Citrate,85 mM (NH4)2SO4, 45 % Glycerin.Solution B: 0,66 M KH2PO4, 1,3 M K2HPO4Dilute "B" 4X with "A" = 10 x HMFM (e.g., 1B + 4A)例子：10 x HMFM (Hogness Modified Freezing Medium)(For freezing of bacteria)Solution AMgSO4.7 H2O 0.9 gNa3-citrate.2H2O 4.5 g(NH4)2 SO4 9 gGlycerol (100%) 440 gThe volume was adjusted to 800 ml with sterile water and sterilized by autoclaving.Solution BKH2PO4 18 gK2HPO4 47 gThe volume was adjusted to 200 ml with sterile water and sterilized by autoclaving.Before using, 640 ml solution A was added to 160 ml solution B.作者: 保藏中心时间: 09-3-31 10:32冷冻液配方来了：--翻了半天，终于找到了，是HOGNESS，哈哈－－excellent for E.coli preservation10X Hogness Modified Freezing Medium:Solution A: 5 mM MgSO4x4 H2O, 20 mM Sodium Citrate,85 mM (N ...rcm001 发表于 09-3-30 21:59对于您的分享，代表需要它的人感谢您！需要的酷友大家来试试啦！保藏中心会尝试看是否适合我们为表示感谢，给您加上两点威望。