5.消毒灭菌试验
无菌室消毒灭菌操作规程
无菌室消毒灭菌操作规程无菌室是医疗和实验环境中非常重要的空间，其内部必须保持无菌状态以确保实验的准确性和研究的可靠性。
为了维护无菌室的洁净环境，以下是一份无菌室的消毒灭菌操作规程。
一、概述无菌室是为了保证实验的可靠性和研究的准确性而建立的，其主要功能是提供无菌环境、防止交叉污染。
无菌室的消毒灭菌操作规程是对无菌室内环境进行灭菌和消毒的操作流程进行规范化，以达到无菌室工作区域的最佳无菌状态。
二、消毒灭菌操作规程1. 打开无菌室的门前，请先用肥皂和流动水洗手，重点清洁指甲，并用75%酒精消毒。
2. 确保无菌室内部及工作台面干燥，座椅、工作台等物品无明显污染。
3. 使用具有高效消毒性能的消毒剂进行表面消毒。
消毒剂可选用过氧乙酸或乙酸烯丙酯等高效消毒剂，按照说明书的要求使用。
4. 消毒操作时，应准备好必要的防护措施，包括穿戴无菌手套、口罩和帽子等个人防护装备。
5. 将所需器具和试剂放在经过消毒处理的无菌室桌面上。
6. 操作前应将试验所需的器械、试剂等进行高温湿热灭菌处理，或使用已经灭菌的无菌装置进行操作。
7. 在操作过程中，不能将无菌室内的工作区域长时间暴露在外界空气中，以防止污染。
8. 消毒和灭菌操作结束后，及时清理无菌室内的废弃物，并用适当的消毒剂对工作区域进行再次消毒。
9. 定期对无菌室内和周围环境进行清洁和消毒，保持无菌室的干净整洁。
10. 若无菌室内出现明显污染或破损，请及时更换或修理，以确保无菌室的正确使用。
三、注意事项1. 消毒操作应严格按照规程进行，不得擅自增减或改动。
2. 涉及到的消毒剂和灭菌器材应符合相关行业标准。
3. 操作人员应经过相关培训，了解相关操作要求和流程。
4. 消毒剂应储存在干燥、通风的地方，避免阳光直射。
5. 操作过程中，应注意个人防护，避免操作失误导致交叉感染。
6. 定期检查无菌室内的设备设施是否正常工作，如有问题及时进行维修或更换。
7. 检查无菌室的温湿度和过滤装置的工作情况，保持合适的无菌室环境。
微生物实验常用的灭菌、消毒方法及效果监测
微生物实验常用的灭菌、消毒方法及效果监测因为微生物广泛存在于环境中，从预防交错污染的角度动身，微生物试验必需遵循无菌操作的原则，采纳多种物理、化学或是生物的办法，确保全部的物品和工作环境符合用法要求。
常用以下术语表示杀灭微生物的程度。
消毒：杀灭或(和)清除致病微生物，使其数量削减到不再能引起人发病。
用于消毒的化学药品称为消毒剂。
灭菌：将全部微生物所有杀灭或(和)清除掉，包括细菌芽孢和非致病微生物。
灭菌比消毒更彻底。
无菌：不含活菌，是灭菌的结果。
防止细菌进入人体或其他物品的操作技术称为无菌操作。
(一)常用的灭菌、消毒办法常用的灭菌或消毒办法分为4类：热力灭菌法、化学消毒法、辐射法和过滤除菌法。
普通按照物品的种类和污染后的危害程度来挑选消毒、灭菌办法。
消毒首选物理办法，不能用物理办法消毒的方可选化学办法。
1.热力灭菌法高温对微生物具有显然的杀伤作用，这是因为热能可变性蛋白质、核酸及破坏细胞膜等。
热力灭菌法按照有无水蒸气的参加分为干热灭菌法和湿热灭菌法两种。
热力灭菌法的种类及用法范围详见表4-4。
表4-4 热力灭菌法的种类及用法范围 2.化学消毒法无数化学药物能够影响微生物的物理结构和生理活动，从而达到消毒的作用。
化学消毒剂普通都对人体组织有害，因此，只能外用或用于环境的消毒，常用化学消毒剂的种类、作用机理及用法范围见表4-5。
表4-5 化学消毒剂及用法范围 3.辐射法辐射法中紫外线杀菌最为常用。
紫外线的穿透能力很弱，简单被固形物汲取，不能透过一般玻璃，因此，它只适用于空气、水及物体表面的杀菌。
无菌室、超净工作台、生物平安柜内都装有紫外灯，用来举行空气消毒，消毒时光普通为30min。
应用紫外线杀菌时，必需防止紫外线对人体的挺直照耀，以免损害眼睛和灼伤皮肤。
4.过滤除菌法指将含菌的液体或气体通过一个称作细菌滤器的装置，使细菌受到机械的阻力而留在滤器或滤板上，从而达到除菌的目的。
此法常用于不宜加热灭菌的液体物质，如培养基添加剂、抗生素、血清等。
灭菌测定方法和步骤
1. 准备一定数量的微生物样本，确保它们对辐射敏感且易于计数。2. 将样本暴露于预定剂量的辐射下。3. 辐射后，将样本在适宜条件下培养。4. 计算并比较辐射前后的微生物存活率，以评估灭菌效果。5. 根据需要，调整辐射剂量并重复测试以优化灭菌条件。
灭菌测定方法和步骤
灭菌方法
测定方法
步骤
热灭菌（如蒸汽剂（如耐热的细菌孢子）。2. 将生物指示剂放置在待灭菌物品中或附近。3. 进行灭菌处理（如蒸汽灭菌）。4. 灭菌后，将生物指示剂取出，在适宜条件下培养。5. 观察并记录培养结果，评估灭菌效果。
化学灭菌（如使用消毒剂）
中和试验法
1. 准备测试样本和对照样本。2. 将消毒剂应用于测试样本，同时确保对照样本不受影响。3. 使用适当的中和剂来停止消毒剂的活性，同时不破坏潜在的微生物。4. 将处理后的样本在适宜条件下培养。5. 观察并记录培养结果，比较测试样本和对照样本的微生物生长情况，评估灭菌效果。
辐射灭菌（如紫外线、γ射线）
实验16-消毒灭菌
实验16 消毒灭菌、微生物生长的控制实验16 消毒灭菌、微生物生长的控制一、抗生素对微生物生长的控制（一）目的要求掌握滤纸片的抑菌试验方法。
理解抗生素的抑菌谱。
（二）基本原理抗生素是微生物产生的一类具很高活性的次生代谢产物，敏感微生物以低浓度的抗生素处理后，其生长、繁殖就会受到抑制或死亡。
微生物对不同抗生素的敏感性差异极大，对有的抗生素极敏感，而对别的抗生素没有任何反应。
一种抗生素能够作用的微生物种类的范围也是有限的，抗生素能作用的微生物种类称为该抗生素的抗菌谱。
对多种微生物有作用的抗生素称为广谱抗生素，对种类数量少的抗生素称为窄谱抗生素。
抗生素接触或进入微生物细胞内能使微生物死亡的最低剂量，称为致死剂量。
敏感微生物若在琼脂培养基平板培养过程中接触或进入微生物细胞内的抗生素达到或超过致死剂量的区域内，因微生物不能生长平板呈透明状态，否则因微生物生长平板表面不透明，并在表面形成菌苔。
在敏感微生物细胞或孢子制成的平板上，放置滤纸园片、再在纸片上滴加抗生素溶液后，抗生系将呈园形向外扩散，而且抗生素在培养基内形成浓度梯度，纸片处抗生素的浓度，纸片以外抗生素的浓度逐渐减小。
因而，在恒温培养中的过程中，将在纸片附近出现透明的抗菌圈。
抑菌圈的大小与抗生素的浓度、滴加的体积、抗生系的扩散性、微生物的敏感度、微生物细胞的浓度等有关。
（三）器材1、培养基肉汤蛋白胨平板。
2、器材培养箱、移液品、打孔器、滤纸、镊子、无菌试管、无菌吸管、无菌水、洗尔球等。
3、菌种大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌4、抗生素青霉素（四）操作步骤l、滤纸片准备用打孔器打取滤纸片.放入培养皿内灭菌后备用。
2、抗生素溶液配制称取注射用青霉素粉，以无菌水配成溶液。
3、带菌平板制作将牛肉膏--蛋白胨—琼脂培养基沸水浴溶化后，于45℃恒温水浴保温。
以无菌水将斜面菌种细胞洗下制成悬浮液，以血球计数板测孢子浓度，再加入无菌水将悬浮液浓度调为108-9个细菌/ml。
消毒灭菌实验报告
消毒灭菌实验报告实验目的：通过进行消毒灭菌实验，以验证不同消毒方法对细菌的杀灭效果。
实验原理：细菌在适宜的环境下，可以进行繁殖和生长，但在一定条件下，可以被有效地杀灭。
常见的消毒方法包括物理方法（如高温、辐射）和化学方法（如消毒液、酒精等）。
本实验主要通过浸泡法和擦拭法两种方法进行消毒，并通过培养基接种实验观察不同消毒方法的杀菌效果。
实验材料和仪器：1. 细菌溶液：包含细菌培养物的液体。
2. 培养基：含有适宜条件供细菌生长的培养基。
3. 消毒液：本实验选择常见的消毒液进行测试。
4. 培养皿：用于接种细菌和培养细菌的平底无菌培养皿。
5. 具备质量衡量的工具6. 不同消毒方法所需的器械：例如棉签、细菌滴管等。
实验步骤：1. 将培养基均匀地倒在培养皿中，使其均匀铺满整个培养皿底部，然后静置凝固。
2. 使用棉球蘸取制备好的不同消毒液，在不同的培养皿上分别进行擦拭消毒。
可选择同一种消毒液进行不同时间段的擦拭试验。
3. 使用细菌滴管将细菌溶液滴在培养皿中，同时设置对照组（未进行消毒的培养皿）。
4. 用标签标记好各个培养皿的信息，并放置在恒温箱中进行培养。
培养箱温度设置在适宜菌株生长的条件下。
5. 观察培养皿上是否出现细菌生长，记录所需时间。
6. 分别计算不同消毒方法的杀菌率或杀菌时间，并绘制图表进行比较。
实验结果和讨论：根据实验结果，我们可以比较不同消毒方法对细菌的杀菌效果。
通常，消毒液能够有效杀灭细菌，且杀菌时间较短。
而擦拭方法相对于浸泡法，能够更好地达到细菌灭菌效果。
在实验过程中，要注意避免细菌的外部污染，并保持实验环境的清洁与无菌操作。
结论：消毒液的浸泡方法和擦拭方法都能够有效地杀灭细菌。
其中擦拭方法的效果更佳，能够更好地达到细菌的灭菌效果。
在日常生活中，我们应根据实际情况选择适宜的消毒方法，以达到最好的消毒效果。
5种化学灭菌的方法
5种化学灭菌的方法化学灭菌是一种常用的灭菌方法，通过使用化学物质杀灭或抑制微生物的生长繁殖，以达到灭菌的目的。
下面将介绍5种常见的化学灭菌方法。
1. 高温蒸汽灭菌法高温蒸汽灭菌法是一种常用的化学灭菌方法。
在高温高压条件下，水蒸气能够快速渗透到微生物的细胞内部，破坏细胞膜结构和酶系统，从而达到灭菌的效果。
蒸汽灭菌广泛应用于医疗器械、药品生产等领域。
2. 氧化剂灭菌法氧化剂灭菌法利用强氧化剂（如过氧化氢、臭氧等）对微生物进行氧化作用，破坏其细胞结构和代谢功能，从而达到灭菌的目的。
这种方法操作简单，广泛应用于水处理、食品加工等领域。
3. 消毒剂灭菌法消毒剂灭菌法是利用化学消毒剂对微生物进行灭菌。
常用的消毒剂包括酒精、氯化物、酚类化合物等。
这些消毒剂能够破坏微生物的细胞膜、蛋白质和核酸等结构，从而杀死微生物。
消毒剂灭菌法广泛应用于医疗卫生、食品加工等领域。
4. 辐射灭菌法辐射灭菌法利用辐射能对微生物进行灭菌。
常用的辐射源包括紫外线、γ射线和电子束。
辐射能能够破坏微生物的遗传物质，从而杀死微生物。
辐射灭菌法被广泛应用于医疗器械、食品保鲜等领域。
5. 膜过滤灭菌法膜过滤灭菌法是利用微孔膜对微生物进行灭菌。
微孔膜可以过滤掉微生物，从而达到灭菌的效果。
这种方法操作简单、快速，广泛应用于制药、饮料等领域。
总结起来，化学灭菌是一种常用的灭菌方法，能够有效地杀灭或抑制微生物的生长繁殖。
高温蒸汽灭菌、氧化剂灭菌、消毒剂灭菌、辐射灭菌和膜过滤灭菌是常见的化学灭菌方法。
不同的方法适用于不同的场合，选择合适的化学灭菌方法可以确保杀灭微生物，保障人们的健康和安全。
细菌的生理、消毒、灭菌实验
1、消毒灭菌（录像）
a.掌握下述基本概念：消毒、灭菌 、抑菌 、防腐 、无菌；
b.掌握以下几种消毒方法所 需的时间及温度；
煮沸、间隙灭菌、干烤、 巴氏消毒法、 高压蒸气灭菌
c.为什么湿热灭菌效果比干热灭菌效果好?
d.掌握紫外线灭菌原理、特点及用途？
e.选择下列物品最佳消毒灭菌方法
牛奶、手术器械、体温表、血 清、手术室空气、玻璃器皿、 普通培养基 。
H2S Fe2+ Pb2+
黑色沉淀 变形杆菌 十 乙型副伤寒沙门 氏菌 十 大肠杆菌 一
实验报告： 1.细菌生长现象观察
液体培养基：三种生长现象绘图。 固体培养基：三种菌落特征列表描述。 2.细菌生化反应 三种生化反应绘图
THANKS
固体培养基：菌落（单个细菌生长繁殖后形成的 肉眼可见的细胞集团）
菌落 特征
大小：大、中、小 性状：形态，表面，边缘，干湿，色素。 溶血环：α溶血环、β溶血环
菌落特征 金黄色葡萄球菌 枯草芽胞杆菌 乙型溶血性链球菌
大小
性状…… 溶血环
4.细菌的生化ห้องสมุดไป่ตู้应
1) 糖发酵试验: 利用细菌是否分解单糖产酸和/或产气
2.细菌的培养基类型和人工培养方法
a. 细菌培养基的类型
培养基的类型
用途
液体培养基 半固体培养基
增菌 动力实验、保存菌种
固体培养基（琼脂平板、斜面培养基）
细菌的分离与纯培养
b.人工培养方法介绍
3.细菌生长现象观察
液体培养基（不摇动） ：生长方式
混浊生长 表面生长 沉淀生长 （菌膜生长）
半固体培养基： 动力实验
来区分和鉴别细菌的实验
倒立小试管
五种消毒剂杀菌效果实验
Poultry Science李燕，赵玮，石海春，张孝兰(山东益生畜牧兽医科学研究院，山东 烟台 264000)摘 要：本实验选择5种消毒剂分别对5种细菌杀菌效果进行评估，结果表明，卫可稀释至 1600倍、聚醇瞇碘稀释至200倍、苯扎渙鞍稀释至5000倍、过氧乙酸稀释至3000倍、戊二醛稀释至100倍，作用10 min,可完全杀灭肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌和绿脓杆菌。
关键词：消毒剂；细菌；杀菌效果中图分类号:S859.7991 文献标识码:B 养鸡场利用化学消毒剂对鸡舍及其周围环境 进行消毒是做好生物安全措施的关键环节叫化学 消毒剂根据其作用机制和化学结构，可以分为碱类、氯类、碘类、漠类、醛类、醇类、过氧化物类、酚 类、季钱盐类、双脈类等，其作用机理主要是改变 微生物结构，干扰细胞代谢，导致微生物死亡-31。
为反映不同种类消毒剂对不同致病菌的杀灭效果，本实验采用细菌悬液定量法，选取生产中常 用的5种消毒剂作为研究对象，分别就其对沙门 氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌等5种常见致病菌的杀菌效果和有效灭菌浓度进行 研究，为生产场区选择有效消毒液提供参考。
1材料1.1菌株肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌和绿脓杆菌，均为从鸡场环境和 孵化场毛蛋中分离到的菌株，用鉴别培养基纯化，再用营养肉汤培养后冻存备用。
收稿 EI 期：2020-07-29文章编号.1673-1085(2020)9-0051-031.2消毒剂卫可、聚醇醛碘、苯扎漠钱、过氧乙 酸和戊二醛。
1.3其它试剂和实验材料营养肉汤、生理盐水、18 mmxl80 mm 带塞试管、棉签、100 |1L 吸头、1 mL吸头,10-100 »L 单道移液器,100-1000咽单道 移液器、5 mL 单道移液器、超净工作台、37 T 恒温培养箱、麦氏比浊管、分光光度计、高压灭菌锅等。
2方法2.1制备菌液将纯化的细菌用灭菌棉签涂布到琼脂板上，24 h 后用灭菌生理盐水把菌苔洗下 来，用麦氏比浊管法和分光光度计法调整细菌浓度为 2xl08 CFU/mL 02.2 消毒剂溶液的配制每种消毒剂按厂家提 供的浓度，适当扩大或缩小稀释倍数，用无菌纯水 对消毒液进行稀释。
医院消毒灭菌效果监测内容
医院消毒灭菌效果监测内容
1．使用中的消毒剂：每季度进行一次生物监测，（细菌含量必须≤100cfu/ml，不得检出致病性微生物），按要求定期进行化学监测（含氯消毒剂应每日监测，戊二醛每周一次，用于内镜消毒或灭菌的必须每日或使用前监测）。
2．使用中的灭菌剂：每月进行一次生物监测，不得检出任何微生物。
3．消毒物品：每季度监测一次，不得检出致病性微生物。
4．灭菌物品：每月监测一次，不得检出任何微生物。
5．压力蒸汽灭菌器：每锅进行工艺监测，每包进行化学监测，每月进行一次生物监测，压力蒸汽灭菌器每天灭菌前要进行BD试验，并有详细记录。
新灭菌器使用前及大修后必须进行生物监测，合格后才能使用。
对拟采用的新包装材料、容器摆放方式、排气方式及特殊灭菌工艺，也必须先进行生物监测，合格后才能使用。
6．紫外线消毒：应进行日常监测，（包括灯管应用时间、累计照射时间、使用人签名），对新的灯管和使用中的灯管应进行照射强度监测，每半年一次，新灯管不得低于90uw/cm2，使用中的灯管不得低于70uw/cm2，生物监测必要时进行。
7．各种消毒后的内镜（胃镜、肠镜、喉镜、气管镜等）：每季度进行生物监测，（细菌总数≤20cfu/件，不得检出致病菌），凡穿破黏膜的内镜附件（活检钳、异物钳、切开刀）等灭菌物品必须每月进行生物监测。
8．各种灭菌后的内镜（如腹腔镜、胆道镜、膀胱镜、宫腔镜、胸腔镜等）及附件：每月进行一次生物监测。
9．血液净化系统的监测：每月对入、出透析器的透析液进行监测：入口液的细菌菌落总数≤200cfu/ml，出口液的细菌菌落数总数必须≤2000cfu/ml，并不得检出致病微生物。
医院消毒灭菌效果的检测结果分析
悦读社会·百态-150 - Family life guide刘权利文（乌兰浩特市疾病预防控制中心）摘要：目的分析检验我区各级医院消毒灭菌质量，为医院感染管理提供更有力的依据。
方法：近年来，对消毒灭菌项目进行了测试，如室内空气、材料表面、医务人员的手、消毒剂的适宜性、灭菌物品是否合格，压力蒸汽灭菌器灭菌、透析液体和医院的污水。
结果：地区医院的压力蒸汽灭菌器灭菌有效，对相关消毒物品为100.0%有效，但未达到室内空气、物体表面、医务人员手、被使用的消毒剂、透析液体、医院废水等项目100.0%有效。
结论：本地区各级医院整体消毒灭菌效果总体较好，但室内空气合格率等方面仍存在不足，可能引起医院感染，需要进一步加强。
关键词：医院消毒；灭菌效果；检测随着时代的发展和进步，人们的生活水平有了很大的提高，对生活提出了更高的要求，其中医疗服务是一个非常重要的组成部分。
大量患者集中在医院，导致医院内微生物浓度大，种类也比较复杂。
环境污染非常严重，如果得不到妥善处理，很可能在医院引起感染。
因此，医院绝杀细菌是一项非常重要的工作，而绝杀室也是一项非常重要的地方。
确保在整个医院有效清洗消毒细菌医疗用品、设备和绷带。
消毒的有效性将直接影响医院的声誉和患者的安全。
因此，有必要加强对医院消毒灭菌工作的监督。
资料与方法一般资料近年来，对消毒灭菌项目进行了测试，如室内空气、材料表面、医务人员的手、消毒剂的适宜性、灭菌物品是否合格，压力蒸汽灭菌器灭菌、透析液体和医院的污水。
[1]。
方法室内空气试验使用直径为9厘米的平板普通营养琼脂。
取样点保持在地面0.8至1.5米的高度，并确定接触时间。
采集标本后，在37℃环境中放置48h 左右，计算细菌总数。
如果绝杀由医务人员进行并在表面进行，样本溶液应包含适当的中和材料。
取样后，置于10ml 取样溶液中。
全振荡后，冲洗细菌计数。
在使用消毒剂灭菌试验中，需将1ml 样品加入9ml 中和剂中混合，并记录活菌数。
消毒灭菌检测制度和方法
消毒、灭菌效果的监测制度与方法的标准操作规程医院消毒是预防医院感染的重要措施之一，消毒效果的监测是评价其消毒设备运转是否正常、消毒药剂是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否达标的唯一手段，在医院消毒、灭菌工作中必不可少.因此，特制定消毒、灭菌效果的监测制度与方法的标准操作规程，以帮助各科室做好消毒、灭菌效果的监测工作.主要内容包括：消毒灭菌设备的监测、医疗器械消毒灭菌效果的监测和医院环境微生物学监测。
一、消毒灭菌设备的监测主要包括压力蒸汽灭菌效果监测、环氧乙烷（EO）灭菌效果监测和紫外线消毒效果监测。
（一）压力蒸汽灭菌效果监测1．化学监测1）化学指示卡(管）监测方法：需每包监测。
将既能指示蒸汽温度，又能指示温度持续时间的化学指示管(卡)放入每一待灭菌的物品包中央，经一个灭菌周期后，取出指示管(卡），根据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。
2)化学指示胶带监测法：需每包监测。
将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品包外,经一个灭菌周期后，观察其颜色的改变,以指示是否经过灭菌处理。
3）结果判定：检测时,所放置的指示管(卡)、胶带的性状或颜色均变至规定的条件，判为灭菌合格；若其中之一未达到规定的条件，则灭菌过程不合格.4）B—D试验：对预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌，每日进行一次B—D试验。
将B-D测试纸包水平放于灭菌柜内灭菌架(车)的底层靠近排气口处，柜内除测试包外无任何物品.经132℃,3.5min后, 取出一次性B—D包观察颜色变化。
均匀一致变色, 说明冷空气排除效果良好，灭菌器可以使用，反之,则灭菌器有冷空气残留,测试不合格。
新安装的设备和大修后设备应该进行B-D试验标准包测试,试验应该重复3次.5）注意事项：监测所用化学指示物须经卫生部批准,并在有效期内使用。
2．生物监测1）生物指示物监测应1月1次。
2）指示菌株:为耐热的嗜热脂肪杆菌芽胞(ATCC 7953 或 SSIK 31株）。
3）检测方法：将两个菌片分别装入灭菌小纸袋内(也可使用自含式生物指示物）,置于标准试验包中心部位.灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包(由 3 件平纹长袖手术衣，4 块小手术巾，2 块中手术巾，1 块大毛巾，30 块 10cm×10cm 8 层纱布敷料包裹成 25cm×30cm ×30cm 大小)。
中护微生物实验3细菌分布检查与消毒灭菌实验
4.常用消毒灭菌器及除菌滤器介绍
高压蒸汽灭菌器 干烤箱（干热灭菌器） 滤器
三、药物敏感实验（纸片法）
方法：
1. 取琼脂平板一个用记号笔在平板底部标记贴抗生素纸片的位置。 2. 点燃酒精灯。用棉签蘸取菌液，在琼脂平板上密集而均匀地涂布。 3. 待培养基稍干后，无菌操作用镊子分别取抗生素纸片按标记位置贴
因此可逐渐扩散到周围的培养基中其浓度将随与纸片距离的增加而逐渐降低从而形成了以纸片为中心药物浓度逐渐减小的浓度剃度
中护微生物实验3细菌分布检查与消 毒灭菌实验
实验目的
1.学会不同部位细菌的检查方法。 2.掌握常用的消毒灭菌方法及其仪器的使用。 3.了解药敏实验的结果及意义。
实验内容与方法
2.咽喉部细菌的检查
(1)咽喉拭子法：
材料：血平皿、咽拭子 方法：
1. 用干净棉签咽部取材； 2. 将取得样本以分区划线形式接种在血平皿上； 3. 37℃ 温箱内孵育24小时后观察结果。
(2)咳碟法
• 取血平板一个，将盖打开，置于距口腔10厘 米处，用力咳嗽数次，然后盖好，置37度温 箱培养18-24小时观察结果。
3.紫外线杀菌实验
材料：琼脂平板、细菌培养物、灭菌长方形纸片 方法： 取普通琼脂平板一个，密集画线接种大肠埃希菌。 用无菌镊子把灭菌长方形纸片贴于平板表面中央。 打开平皿盖的2/3，置于紫外灯下距离约20-30厘米
处照射30分钟， 除去纸片，盖好平皿盖，置37度温箱培养24小时观察
结果。 原理：损伤DNA，阻止DNA的复制
3. 37℃ 温箱内孵育24小时后观察结果。 意义：为临床针对性合理用药提供依据
药敏试验
抑菌圈消消毒 Nhomakorabea毒
前
后
细菌分布与消毒灭菌实验报告
细菌分布与消毒灭菌实验报告一、实验目的1. 研究不同环境条件下细菌的分布情况；2. 探讨常见消毒灭菌方法对细菌的杀灭效果；3. 建立科学的消毒灭菌操作规范。
二、实验材料与方法1. 材料：a. 培养基：用于培养和检测细菌的典型营养富集培养基；b. 不同环境样本：包括但不限于空气、水、土壤、食品表面等；c. 常见消毒灭菌剂：如酒精、过氧化氢、紫外线等。
2. 实验步骤：a. 采集不同环境样本，制备相应的稀释液；b. 涂布法或滴布法将样本均匀涂布在不同培养基上；c. 细菌培养：将涂布好的培养基培养在适宜的温度下，定时观察并记录细菌的生长情况；d. 消毒灭菌试验：将已经培养好的细菌接种到不同消毒灭菌剂处理后的培养基上，观察并记录细菌生长情况。
三、实验结果与分析1. 细菌分布情况：a. 空气中：培养基上出现多种常见细菌，主要为空气中悬浮细菌；b. 水中：水样品中出现的细菌种类较多，表现为波动的生长曲线；c. 土壤中：土壤样品中的细菌种类丰富，生长繁茂；d. 食品表面：食品表面附着的细菌种类较多，主要为耐热菌和耐寒菌。
2. 消毒灭菌效果：a. 酒精：对大部分细菌有较好的消毒效果，但并不是所有细菌都能被完全杀灭；b. 过氧化氢：对细菌有较好的杀菌效果，多数细菌培养基上的细菌均被消毒；c. 紫外线：对细菌也有比较好的杀菌效果，但需注意照射时间和距离。
四、实验结论1. 不同环境中细菌的分布情况各异，需要根据实际情况选择合适的消毒灭菌方法；2. 酒精、过氧化氢和紫外线是比较常见的消毒灭菌方法，但对于不同细菌种类有不同的杀灭效果；3. 实验结果为建立科学的消毒灭菌操作提供了参考，为日常生活和工作中的消毒灭菌提供了技术支持。
五、参考文献1. 胡伟，刘静. 生物实验指导. 北京：北京大学出版社, 2017.2. 何亚平，李明. 微生物学实验技术. 北京：清华大学出版社, 2018.六、致谢在本研究中，我们由衷感谢指导老师对我们的悉心指导和支持，也感谢提供实验设备和场地的相关部门和同事。
灭菌与消毒指示器材鉴定试验
灭菌与消毒指示器材鉴定试验1 压力蒸汽灭菌生物指示物鉴定试验1.1 目的测定压力蒸汽灭菌生物指示物所含菌量，以及在121℃±0.5℃饱和蒸汽作用下的存活时间、杀灭时间与D 值是否达到要求指标。
1.2 实验器材(1) 压力蒸汽灭菌生物指示器材抗力检测器(biological indicator evaluator resistometer，pressured steam sterilization，BIER，下简称抗力检测器)。
对抗力检测器要求的技术指标：时间控制以秒为单位；温度控制以0.1℃为单位；加热至预定温度的时间应≤10s；排气时间≤5s；试验期间柜室内温度误差≤±0.5℃。
(2) 56℃～60℃温箱。
(3) 溴甲酚紫蛋白胨培养液(嗜热脂肪杆菌芽胞恢复培养基，见附录A)。
(4) 嗜热脂肪杆菌芽胞恢复琼脂培养基(见附录A)。
(5) 眼科镊子(夹取菌片用)。
(6) 磷酸盐缓冲液(PBS，0.03 mol/L，pH 7.2)。
(7) 回收液(含0.1% 吐温80 的PBS 液)。
1.3 生物指示物微生物含量与抗力标准(1) 嗜热脂肪杆菌(Bacillus stearothermophilus ATCC 7953或SSI K31) 芽孢。
回收菌量为5×105cfu/片～5×106cfu/片，或5×105cfu/ml～5×106cfu/ml。
(2) 在121℃±0.5℃饱和蒸汽条件下，存活时间≥3.9min，杀灭时间≤19min。
(3) 在121℃±0.5℃饱和蒸汽条件下，D值为1.3min～1.9min。
1.4 生物指示物含菌量的测定随机抽取3个生物指示物样本。
样本如为菌悬液式指示物，直接用PBS 作适当稀释后，按2.1.1.3 规定进行活菌培养计数即可；样本如为含菌载体式指示物(如菌片)，应先置回收液中洗下芽孢，并以PBS稀释至适当浓度，再进行活菌计数培养。
5检查方法与消毒灭菌
滤菌器 含有微细小孔<0.22微米, 含有微细小孔<0.22微米,只允许液体或气体 <0.22微米 通过, 而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 通过, 适用范围 血清、毒素、 血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌
滤菌过程
低温与干燥
冷冻真空干燥法： 冷冻真空干燥法： 在低温状态下真空抽属盐 氧化剂 染料
作用机制
蛋白变性 氧化、蛋白沉淀 氧化、蛋白酶变性 氧化、蛋白沉淀 干扰氧化、抑制繁殖
常用种类
乙醇 高锰酸甲 红汞、硫柳汞 过氧乙酸、碘酒 龙胆紫
蛋白变性，细胞膜损伤 石炭酸
表面活性剂 蛋白变性，细胞膜损伤 新洁而灭
各种消毒剂的应用
消毒剂 含氯消毒剂 过氧乙酸 戊二醛 碘酒 碘伏 乙醇 新洁尔灭 高锰酸钾 常用浓度 有效氯量4g/L 有效氯量4g/L 饮水 0.2%0.2%-1% 2% 2.5% 2% 75% 0.4%0.4%-1.6% 1-10g/L 皮肤、物体表面、空气 皮肤、物体表面、 医疗器械 皮肤、黏膜、 皮肤、黏膜、物体表面 皮肤、黏膜、 皮肤、黏膜、物体表面 医疗器械、皮肤 医疗器械、 皮肤、黏膜、 皮肤、黏膜、物体表面 皮肤、黏膜、食具、 皮肤、黏膜、食具、蔬菜等 适用范围
用途：保存菌种 用途：
二、化学消毒灭菌法 杀菌机理
－－使菌体蛋白凝固变性 －－使菌体蛋白凝固变性 －－使细胞内酶失活，干扰细菌的正常代谢 －－使细胞内酶失活， 使细胞内酶失活 －－破坏细菌细胞壁、膜等结构， －－破坏细菌细胞壁、膜等结构，导致内含 破坏细菌细胞壁 物逸出
按杀菌能力分类
1、高效消毒剂 、 －－可杀死包括芽胞在内的所有微生物 －－可杀死包括芽胞在内的所有微生物 －－适用于不耐热力，但要进入体内的物品 －－适用于不耐热力， 适用于不耐热力 －－包括含氯消毒剂、过氧化物消毒剂 －－包括含氯消毒剂、 包括含氯消毒剂 醛类消毒剂、 醛类消毒剂、环氧乙烷等
药物敏感试验和消毒灭菌
硫柳汞
0.01
生物制品防腐
氧化剂
高锰酸钾
0.1
皮肤、尿道、水果、蔬菜消毒
过氧化氢
3
皮肤、粘膜、创伤消毒
过氧乙酸
0.2～0.5
塑料、玻璃、人造纤维消毒
碘液
2.5
皮肤消毒
醇类
乙醇
70～75
皮肤、体温计消毒
酚类
石炭酸
3～5
地面、器皿表面和排泄物消毒
来苏
3～5
消毒与灭菌技术 化学消毒剂作用机制
损伤细菌细胞膜，增加其通透性（表面活性剂、脂溶剂等）
菌体成分氧化、水解或结构改变（氧化剂、卤素、醛、酚等）
干扰细菌酶系统和代谢（氧化剂、重金属盐类等）
促进菌体蛋白质变性凝固（酚、醇、醛、酸碱类等）
名称
浓度(%)
用途
重金属盐
红汞
2
皮肤、粘膜、小创面消毒
孵育：35ºC 16-18h，量取抑菌圈直径。
纸片应分布均匀，中心距离不小于24mm。
含菌平板必须避免过浓或过稀。
纸片贴完后应在15min内将平板反过来，置于37度温箱中。
纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。
要注意无菌操作。
注意事项
影响药敏结果的因素
培养基 应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺药和TMP的活性。 细菌接种量 细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。 药物浓度 药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。 培养时间 一般培养温度和时间为37℃ ，8-18小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。
实验三细菌的分布与消毒灭菌
实验三细菌的分布与消毒灭菌【目的】①了解细菌广泛分布于自然界及正常人体，树立“有菌观念”，从而认识无菌操作对于微生物学及医学实践的重要性。
②了解正常人体中寄居着种类繁多的细菌，正常情况下不引起人类疾病，称为正常菌群。
③熟悉外界因素对细菌的影响，学习常用的消毒灭菌方法。
④了解不同细菌对外界因素具有不同的抵抗力。
一、细菌的分布检查（一）空气中的细菌检查【材料】普通琼脂平板培养基。
【方法】①取普通琼脂平板一只开启皿盖，培养基面向上放于实验桌上，暴露5～30min后盖好。
②置37℃培养18～24小时后观察结果。
【结果】（填表10-1）平板培养基表面或多或少有菌落生长。
（二）地面水中的细菌检查【材料】地面水(河水、井水或池水)、高层琼脂培养基、1ml无菌吸管、灭菌培养皿。
【方法】①以无菌吸管吸取1ml地面水，加入灭菌平皿中。
②将已溶化且冷至45℃左右的高层琼脂倾注人上述平皿中，加盖后轻轻摇动，使水与琼脂充分混匀，静凝。
③37℃ 24小时后取出观察，计数菌落。
【结果】（填表10-1）（三）衣服、票证、头发、手指皮肤上的细菌检查【材料】普通琼脂平板培养基。
【方法】取普通平板一个，用蜡笔在平板背面玻璃上划成四等分，并贴上标签(图10-1)。
然后以无菌操作法，用衣袖角、票证、头发及手指或指甲内污物，在平板培养基表面相应部位轻轻涂抹，置37℃培养24【结果】填表培养基表面涂抹处有菌落生长。
衣服、票证、头发、手指皮肤上的细菌检查（四）正常人体咽喉部的细菌检查【材料】血液琼脂平板培养基、灭菌棉拭、接种环、酒精灯。
【方法】取灭菌棉拭一支，在被检查者咽喉部轻轻涂擦后，再涂于血液琼脂培养基—侧，然后改用灭菌接种环作分离划线接种。
盖上皿盖，37℃孵育24小时（或者采用咳喋法）。
【结果】（填表10-1）琼脂平板表面有菌落生长。
其中占优势的是一种细小菌落，其周围有草绿色的不完全溶血环。
此为咽喉部的正常菌群—甲型链球菌。
（五）实验结果观察(填表)（一）煮沸与高压灭菌法【原理】高温对细菌有明显的致死作用，主要机制是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌细胞膜功能受损及菌体内电解质浓缩有关。
消毒和灭菌
1) 煮沸与高压灭菌法(2人一组) ●菌液：大肠杆菌/枯草杆菌
●甲组：煮沸（100℃，5min）
●乙组：高压灭菌法（121 ℃，20min）
●丙组：不作任何加热处理
2) 紫外线灭菌(8人一组) 图1
图1
1 以灭菌接种环挑取大肠埃希菌培养物，于琼脂平板上作来
回密集划线接种。
2 半启皿盖(将皿盖遮住涂面的1／2)，置于紫外线灯下lm以 内接受照射30分钟。
1) 空气中的细菌(8人一组) 取普通琼脂平板一个，打开盖暴露于空气中约15-30分钟， 然后盖好，放37℃温箱孵育24小时后观察结果，计算有多 少个菌落。
2) 手指皮肤上的细菌(8人一组) 用手指直接涂于普通琼指平板上，放37℃温箱孵育，24小 时后观察结果，记录有多少种不同特征的菌落。
2.
消毒和灭菌
表1细菌分布的实验结果
检查材料 空气
手指
细菌生长 平板培养基表面 培养基表面
情况
或多或少有菌落 涂抹处有菌
菌落个数 生长。
落生长。
2. 消毒和灭菌实验结果
表2煮沸和高压灭菌实验结果
细菌名称 甲组 100℃ 5分 乙组 121℃ 20分 丙组
钟
钟
(对照)
枯草芽胞 混浊
澄清
混浊
杆菌
未加热
大肠埃希 澄清
澄清
1. 了解细菌广泛分布于自然界及正常人体，树立“有菌观念”， 从而认识无菌操作对于微生物学及医学实践的重要性。
2. 了解正常人体中寄居着种类繁多的细菌，正常情况下不引起 人类疾病，称为正常菌群。熟悉外界因素对细菌的影响，掌
握常用的消毒和灭菌方法
3. 观察细菌鞭毛的变异 4. 熟悉生物因素对细菌的作用 2、 实验材料 普通琼脂平板培养基、大肠杆菌肉汤培养液、枯草杆菌肉汤培养 液、无菌毛细吸管、肉汤培养基管、电炉、锅子、高压灭菌器、 接种环、酒精灯、紫外线灯、大肠杆菌培养物 3、 操作方法 1. 细菌的分布
八一医院消毒灭菌检测制度
八一医院消毒灭菌检测制度1. 背景随着医疗水平的不断提高，医疗设备与手术器械的消毒灭菌工作也变得越来越重要。
在医疗过程中，如果不严格执行消毒灭菌工作，将会导致交叉感染或污染，给患者带来严重的健康风险。
因此，严格执行消毒灭菌检测制度对于医院的安全运行具有非常重要的意义。
2. 目的本文档旨在规范八一医院消毒灭菌检测工作，确保医疗设备和手术器械的消毒灭菌质量，防止交叉感染和污染。
3. 适用范围本制度适用于八一医院所有临床科室和医疗中心的消毒灭菌检测工作。
4. 工作程序4.1 消毒灭菌前的准备工作在进行消毒灭菌之前，需要检查消毒灭菌设备和器材是否齐全，准备相关消毒灭菌剂和化学试剂。
4.2 消毒灭菌前的检查工作在进行消毒灭菌之前，必须对所要消毒的物品进行检查，并记录检查结果。
如发现问题，应及时进行处理并记录处理结果。
4.3 消毒灭菌操作工作在进行消毒灭菌时，必须按照消毒灭菌指导书的规定进行操作，确保消毒灭菌剂的浓度、温度和时间等参数符合标准要求。
操作过程中需要注意个人防护和设备的使用维护。
4.4 消毒灭菌后的检查工作在进行消毒灭菌结束后，需要对所消毒的物品进行检查，并记录检查结果。
如发现问题，应及时进行处理并记录处理结果。
4.5 消毒灭菌记录工作在每次消毒灭菌结束后，必须做好消毒灭菌记录。
记录应包括消毒灭菌器材的名称、型号、使用日期、消毒灭菌剂浓度、温度、时间等参数，操作者的姓名、批号等信息。
4.6 消毒灭菌结果的处理工作在进行消毒灭菌后，必须对消毒灭菌结果进行处理。
如检查结果符合标准要求，该物品才能释放到下一步使用环节。
如检查结果不符合标准要求，应及时进行处理并进行记录。
5. 工作要求5.1 操作符合消毒灭菌规定所有的消毒灭菌操作都必须符合相关的消毒灭菌规定，不得有违规操作。
5.2 操作符合标准要求所有的消毒灭菌操作都必须符合标准要求，消毒灭菌设备和消毒灭菌剂的使用必须符合规定的浓度、温度和时间等参数。
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结果： 结论：
计数菌落数 ？？？
3. 紫外线灭菌试验(操作,1块/4人,小平板,大肠杆菌) p61 原理： 材料： 普通琼脂平板 大肠杆菌、紫外线
方法：
紫外线×30分钟
37℃×18~24h
结果：
结论：
？？？
紫外线（ ultraviolet ray，UV） ：260~266nm（最佳杀菌波长）
一、细菌的分布检查 1. 空气中细菌的检查（操作） p-55 2. 皮肤、日常物品细菌的检查（操作） p-56
二、消毒灭菌试验
1. 紫外线灭菌试验（操作） p-61 2. 化学消毒剂的消毒灭菌试验（操作） p-61 3. 煮沸与高压灭菌试验（操作） p-60
1. 空气中细菌的检查(操作,3块/班,小平板) p55
灭菌
灭菌
热
160~170º C×2h
电磁波热效应 100º C×5~10 分 钟，沸水
高压蒸气灭菌器
品
灭菌 消毒( 芽胞杀不 死） 灭菌（芽胞杀 死） 医疗器械 饮水和食具
高压蒸 103.4Kpa(15 磅 / 吋 气灭菌 热 法
2/1.05Kg/cm2)
耐高温、耐湿物品
（基础培养基、生理盐
水、手术辅料等）
方法：
氯 青 紫 氯 碘 碘 青
37℃×18~24h 药敏试验 --纸片法
碘 紫 紫
大肠杆菌
金葡菌
抑菌圈 结果：
（直径mm） 氯霉素 大肠杆菌 金葡菌
青霉素
碘酒
结晶紫
特别观察： 青霉素对两种细菌的杀菌结果，为什么？ 结论： ？？？
5. 煮沸与高压灭菌试验(操作,2块/4人,小平板, 大肠杆菌,枯草芽胞杆菌) p60 原理：
材料：
普通琼脂平板 大肠杆菌，枯草芽胞杆菌
方法：
对照 100 ℃ 10′ 对照 100 ℃ 10′ 121 ℃ 20′ 121 ℃ 20′
大肠杆菌
枯草芽胞杆菌
37℃×18~24h
种类 焚烧 干 烧灼 干烤 红外线 煮沸法 湿
方法 用焚烧炉燃烧 火焰烧灼 干烤箱，热空气
效果 灭菌
用途
废弃污物、尸体
接种环，试管口 玻璃器皿等耐高温的物
第四次实验报告问题：
1. 金葡萄菌×，金葡菌√ 2. 结果：观察到两种菌落：一种？？，另一种？？ 结论： 3.结果：大肠杆菌沿穿刺线向周围扩散生长 痢疾杆菌：？？？ 结论：大肠杆菌 动力+ 痢疾杆菌 动力4.结果：观察到针尖样草绿色溶血环菌落 结论：？？？
原因：大肠杆菌抑制金葡菌
实验五 细菌的分布检查、消毒灭菌试验
121.3º C×15~20分钟
结果： 菌名 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 煮沸 高压
注：+有细菌生长
-无细菌生长
结论：
？？？
高压蒸汽灭菌法的使用：p58
加水→装锅→加盖→排气→灭菌→起锅
高压蒸汽灭菌锅使用步骤及注意事项：
①先将筒内注水，然后把要灭菌的物品装入内筒，再把盖拧
紧，打开排气阀门，开始加热。 ②水沸腾后，排气阀门开始排出气体，待筒内气体全部排出 后，关闭排气阀门。（见书表2-6） ③筒内压力维持103.4kPa，121℃，15~30min，即可达到灭 菌的目的。 ④关闭热源，自然放凉，待压力表指针下降到零时，方可开 盖取物。
杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价键结合成
二聚体，干扰DNA复制与转录，导致细菌死亡。 特点：穿透力弱，对皮肤、眼有损伤。 适用范围：适用于空气和物体表面消毒。
4. 化学消毒剂的消毒灭菌试验和药敏试验 (操作,2块/4人,大平板,大肠杆菌,金葡菌) p61
材料：
普通琼脂平板 大肠杆菌、金葡菌 氯霉素、青霉素、碘酒、结晶紫
实验报告：
1. 空气中细菌的检查
2. 皮肤、日常物品细菌的检查
3. 紫外线灭菌试验 4. 化学消毒剂的消毒灭菌试验 5. 煮沸与高压灭菌试验
明天中午12:30来实验室看实验结果!!!
材料： 外20min
普通琼脂平板
结果： 结论：
计数菌落数，观察菌落数的差异。
？？？
菌落计数方法
2. 皮肤、日常物品细菌的检查(操作,1块/4人,大平板) p56 材料： 普通琼脂平板 皮肤、头发、衣服、钞票
皮肤 衣服 头发
方法：
37℃×18~24h