2019年肿瘤的分子诊断.ppt
合集下载
肿瘤的分子检测及靶向治疗ppt课件
研究确立了曲妥珠单抗联合化疗在HER-2阳性的晚期胃或 食管胃结合部癌患者中的标准治疗地位。
33
34
35
甲状腺癌的遗传学改变包括：丝裂原活化蛋白 激酶（MAPK）通路及磷酸肌醇 -3- 激酶（PI3K） /AKT 信号通路。 在这些非重叠的遗传学改变中，70%的甲状腺 乳头状癌（PTCs）证实发现了BRAF、RAS、 RET/PTC 癌基因；70%的甲状腺滤泡癌（FTC）证 实发现了 RAS 及 PAX8/PPARc 癌基因；低度分化 及未分化癌中可见 TP53 及 CTNNB1 癌基因。
43Biblioteka Vemurafenib(威罗菲尼，BRAFV600E抑制剂) 临床试验（Ⅰ、Ⅱ期）已证实其对BRAFV600E突变MM患者的有效性，有效率 约为60% ～80%。我国BREFV600E变异率近26%，虽不如白种人高，但仍可能 解决1/4的患者的问题
Dabrafenib(达拉菲尼，BRAFV600E抑制剂，13年FDA批准)
靶点 KRAS/NRAS、 BRAF
突变率 KRAS（40%） NRAS(5%) BRAF(10%)
小结 1.所有转移性结直肠癌患者都应进行RAS基因检测（KRAS和NRAS）。至少进行KRAS基因 第 2号外显子检测，只要有可能，专家推荐进行KRAS 其他外显子及NRAS基因检测。只要 有RAS基因突变，西妥昔单抗及帕尼单抗就不再适用于此类患者的治疗。 2.检测可采用福尔马林固定、石蜡包埋的组织标本。所取组织可以是原发结直肠癌组织和/ 或转移灶。有文献报道两种标本的KRAS和NRAS突变情况相似。 3.具有V600E BRAF突变的患者，似乎预后更差。目前有限的资料提示，患者存在V600E突 变时，一线治疗进展后使用抗EGFR单抗治疗是无效的。
肿瘤标志物的分子诊断课件
常用于肿瘤的分子诊断的技术
一、酶联免疫吸附、免疫比浊法和蛋白印渍技术 二、核酸的分子杂交技术和基因芫片技术 三 蛋白贈芯片及蛋白廄学技术 四、免疫荧光技术及流式细胞仪 五、P附、免疫比浊法和蛋白印渍技术
检测对象：蛋白质分子 虽然这几种方法操作最后的检测方式不同，可是其 基本原理相同，即都是利用抗原抗体特异性反应检测样 本中的蛋白质(定量或者是定性)，所不同的是在于它们 在最后的检测及操作方法上的差异。
肿瘤的分子诊断技术
肿瘤的诊断及分子诊断
诊断肿瘤的金标准：病理诊断， 问题：很多时候等到能够得到病理诊断的时候，肿瘤分 子已经扩散或者肿瘤组织太大无法手术从而失去 早期治疗的机会。 早期诊断肿瘤的技术和方法是科学研究者一直致力 的方向。
肿瘤的分子诊断： 实际上是利用各种技术在分子水平对肿瘤标志物的检 测和确认。
2. 免疫透射比浊法
（Immunoturbidimetry）
当样本中的蛋白质（抗原）与其相对应的抗体结合后形成复合 物，导致溶液中的浊度的改变，当光线通过一个这浑浊介质溶液时， 由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊 颗粒的量成正比，这种透射比浊和免疫学技术相结合的测定光吸收 量的方法称为免疫透射比浊法。 在介质溶液中，抗原与特异性抗体在一定条件下才能形成复合 物，一定的条件包括： ①要有单价特异抗体才能与抗原形成复合物，抗体不纯混杂有另一 种或两种少量的抗体，这种免疫复合物就不是单一复合物而是大 杂烩，结果偏高； ②抗原抗体比例必须适当，只有在抗原与抗体等价时即无过剩抗体 此时，复合物的结合与解离处于平衡状态，其混浊程度达高峰。 抗体过量时，随抗原量的增加而复合物形成也增加；抗原过量 时，抗原抗体复合物形成不但不增加，反而会减少，光吸收减 少，检测结果偏低。 ③一般要求溶液中有非离子性亲水多聚体促进免疫复合物的形成，
肿瘤分子诊断学
检测方法：
IHC MSI 基因胚系突变
图：MMR突变基因携带者的患病风险
结肠癌辅助化疗临床决策一览
基因突变携带者患大肠癌及Lynch相关肿瘤风险高
Lynch综合征基因诊断流程
MLH1 、MSH2、MSH6、PMS2
异常（IHC表达缺失±MSI）
筛查手段
补 筛 手 段
进行MMR胚系突变检测是LS诊断的金标准 ，一旦发现MMR胚系突变，即无需考虑该 家系是否符合临床诊断标准，即可判定
15
HR= 1.31
p=0.01
8.7
10
7.3
中位 (月)
5
0 OS
PFS
很可能，帕尼单抗在MT RAS患者中这一显著不利影响将促使其在说明书 中增加相关警告
MT：任何KRAS或NRAS外显子2,3和4突变
Oliner KS, et al. 2013 ASCO Abstract 3511.
微卫星不稳定性 （microsatellite instability, MSI）
重新检测
-
+
FISH 重新检测 +
赫赛汀® 治疗
赫赛汀® 治疗
FISH
+
赫赛汀® 治疗
消化系统肿瘤肠癌 KRAS来自BRAF/PIK3CA/PTEN
MSI、MMR
UGT1A1 15基因表达
靶向筛选
遗传筛查
胃癌
HER2 C-met FGFR2
GIST
C-KIT PDGFRA
确诊手段
筛选标准
筛选标准 制定年限 Amsterda 1991 m 标准 II
Amsterda 1998 m 标准 II
《肿瘤的分子诊断》PPT课件
《肿瘤的分子诊断》ppt课件
汇报人：可编辑 2024-01-11
目 录
• 肿瘤分子诊断概述 • 肿瘤分子诊断的应用 • 肿瘤分子诊断的挑战与前景 • 肿瘤分子诊断的实际案例
01
肿瘤分子诊断概述
肿瘤分子诊断的定义
01
肿瘤分子诊断是指通过检测肿瘤 细胞或组织中的分子异常，对肿 瘤进行早期发现、诊断、治疗和 预后评估的方法。
的不断发展，卵巢癌的分子诊断将有望实现更精准、更个性化的治疗策略。
THANKS
感谢观看
免疫治疗
通过调节患者的免疫系统 来攻击肿瘤细胞的治疗方 法，具有较好的疗效和较 低的副作用。
03
肿瘤分子诊断的挑战与前景
肿瘤分子诊断的挑战
技术限制
目前肿瘤分子诊断技术仍存在 一定的局限性，如检测灵敏度
、特异性等方面的问题。
肿瘤异质性
肿瘤内部的异质性导致不同部 位肿瘤细胞的分子特征存在差 异，给分子诊断带来困难。
基因突变和甲基化
检测
基因突变和甲基化是肿瘤发生发 展的重要机制，通过检测这些变 化，有助于发现早期肿瘤。
肿瘤的分类与分型
肿瘤的分类与分型
根据分子标志物的差异，可以将 肿瘤分为不同的亚型，有助于制
定个性化的治疗方案。
基因表达谱分析
通过分析肿瘤组织的基因表达谱， 可以将肿瘤分为不同的亚型，有助 于了解肿瘤的生物学特征和预后。
免疫组化分析
免疫组化分析是一种常用的肿瘤分 类方法，通过检测肿瘤细胞的免疫 反应，有助于确定肿瘤的性质和分 化程度。
肿瘤的预后评估
01
肿瘤的预后评估
通过检测分子标志物，可以预测 肿瘤的发展趋势和患者的预后情 况。
生存分析
02
汇报人：可编辑 2024-01-11
目 录
• 肿瘤分子诊断概述 • 肿瘤分子诊断的应用 • 肿瘤分子诊断的挑战与前景 • 肿瘤分子诊断的实际案例
01
肿瘤分子诊断概述
肿瘤分子诊断的定义
01
肿瘤分子诊断是指通过检测肿瘤 细胞或组织中的分子异常，对肿 瘤进行早期发现、诊断、治疗和 预后评估的方法。
的不断发展，卵巢癌的分子诊断将有望实现更精准、更个性化的治疗策略。
THANKS
感谢观看
免疫治疗
通过调节患者的免疫系统 来攻击肿瘤细胞的治疗方 法，具有较好的疗效和较 低的副作用。
03
肿瘤分子诊断的挑战与前景
肿瘤分子诊断的挑战
技术限制
目前肿瘤分子诊断技术仍存在 一定的局限性，如检测灵敏度
、特异性等方面的问题。
肿瘤异质性
肿瘤内部的异质性导致不同部 位肿瘤细胞的分子特征存在差 异，给分子诊断带来困难。
基因突变和甲基化
检测
基因突变和甲基化是肿瘤发生发 展的重要机制，通过检测这些变 化，有助于发现早期肿瘤。
肿瘤的分类与分型
肿瘤的分类与分型
根据分子标志物的差异，可以将 肿瘤分为不同的亚型，有助于制
定个性化的治疗方案。
基因表达谱分析
通过分析肿瘤组织的基因表达谱， 可以将肿瘤分为不同的亚型，有助 于了解肿瘤的生物学特征和预后。
免疫组化分析
免疫组化分析是一种常用的肿瘤分 类方法，通过检测肿瘤细胞的免疫 反应，有助于确定肿瘤的性质和分 化程度。
肿瘤的预后评估
01
肿瘤的预后评估
通过检测分子标志物，可以预测 肿瘤的发展趋势和患者的预后情 况。
生存分析
02
肿瘤分子诊断ppt课件
16
ppt课件完整
药物名称
检测靶标
检测内容
吉非替尼/ 厄洛替尼
EGFR
西妥昔单抗
K-ras，Braf
基因突变 基因突变
伊马替尼
C-Kit
基因突变
指导肿瘤靶向治疗的靶标
检测结果 预测内容
野生型 突变型 野生型 突变型 野生型 突变型
耐药 敏感 敏感 耐药 耐药 敏感
17
ppt课件完整
基因多态性检测与药物代谢毒性 (UGT1A1,CYP,DPD)
18
ppt课件完整 4/1/2021
最常见的基因多态性 SNP
单核苷酸多态性（SNP）是最常见的基因变异
绝大多数人群
至少1%的人群
G to C
共有序列
变异的序列
SNP 位点
19
ppt课件完整 4/1/2021
为什么 SNPs 重要?
个体 1
个体 2
基因 A
基因 B
SNP标志基因 A
SNP 可能使基因 B 产生变 异的蛋白质分子
23
ppt课件完整
胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因（UGT1A1）
UGT1A1*27(C686A)或UGT1A1*28[(TA)7TAA]: 野生型：6个TA
使UGT1A1的转录活性下降了三分之二。 导致对伊立替康的毒性增加。
UGT1A1*6(G211A)：
此型的酶活性是野生型的49％ 。
肿瘤分子诊断服务介绍
标准化用药
标准化用药
ppt课件完整
个体化用药
个体化用药
标准疗法1 标准疗法2 标准疗法3
2
ppt课件完整
肿瘤药物与相关靶标
3
分子肿瘤概论上传ppt课件
-
17
B．u-PA 受体（u-PAR）及纤溶酶原受体 C．PAI （PA 抑制剂）
PAI1 是u-PA 的主要抑制剂 PAI2 不同肿瘤表达意义不一 PAI3 功能不清
-
18
（2）基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMP）
1) MMP 分类 胶原酶：如间质胶原酶 （Collagenase） 明胶酶：如明胶酶A (gelatinase A) 间质溶素：如间质溶素1 、2 膜型基质金属蛋白酶：Ⅰ、Ⅱ型
-
5
3．肿瘤黏附因子(adhesion molecules)
① 钙黏蛋白(cadherin)
又称为钙连接素，钙黏素。
依赖细胞外钙
黏附
介导钙离子依赖性细胞与细胞（同源细胞）的
-
6
分为 E-钙黏蛋白(E-cad, 上皮-钙黏蛋白) ---关系最密切 ---主要分布于各种上皮细胞 ---促进同质黏附力
-
31
2.基因拷贝数的增加、转录产物mRNA的增加 ---- 核酸分子 生物学方法进行检测
常用方法
-
32
(1)核酸分子杂交（nucleic acid molecular hybridisation）技术 最常用的基本技术 1.原位杂交 （ISH） 2.荧光原位杂交 （FISH）， 3.双色（多色）银染原位杂交（DSISH） 3.Southern blot (DNA 杂交) 4.Northern blot (RNA 杂交)
作用 介导内皮细胞、血小板与瘤细胞黏附 选择素家族包括：
P-selectin E-selectin L-selectin
-
11
⑤ CD44 及其它 CD 44(透明质酸受体) 路易斯寡糖（SLEX，,s-LewisX ） 血管内皮细胞 E-选择素的配体 跨膜超级家族基因蛋白（TM4ST） 六 种 成 分 ： CD9 、 CD37 、 CD53 、 CD63 、 CD81 、 CD82
基础医学肿瘤的分子诊断PPT课件
assay,ELISA ） • 蛋白印迹（Western blot） • 流式细胞仪测试法
第5页/共69页
（二）基因扩增的检测
基因拷贝数的增加和转录产物的mRNA 的增加
分子诊断检测方法:
原位杂交 （in situ hybridization,ISH） 荧光原位杂交
（fluorescence in situ hybridization, FISH） 原 位 PCR （ in situ polymerase chain reaction） Southern杂交（第D6页N/共A69杂页 交）
第31页/共69页
该法检出率很高，也是检测片段最长的方法。应用荧光检测系统可增 强敏感度。该法中的化学试剂有毒，故又发展了碳化二亚胺检测法 （Carbodiimide，CDI），CDI为无毒物质。
第32页/共69页
（六）等位基因特异性寡核苷酸分析法 (allele-specific oligonucleotide ASO) 设计一段20bp左右的寡核苷酸片段，其中包含了发生突变
用连续二次的巢式PCR来扩增包括存在酶位点编码子的DNA片段，在两次 扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段，野生型因被酶切而不 能进入第二次PCR扩增，而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到产物 的富集。
第28页/共69页
（四）变性梯度凝胶电泳法
（
denaturing
gradient
原位杂交（in situ hybridization,ISH） 将分子杂交与组织化学相结合的一项技术，属固相核酸分子杂交范围，
它用标记的DNA或RNA为探针在原位检测组织细胞内特异的DNA或RNA 序列。
第7页/共69页
优点：
1、具有分子杂交的特异性强、灵敏高特点， 同
第5页/共69页
（二）基因扩增的检测
基因拷贝数的增加和转录产物的mRNA 的增加
分子诊断检测方法:
原位杂交 （in situ hybridization,ISH） 荧光原位杂交
（fluorescence in situ hybridization, FISH） 原 位 PCR （ in situ polymerase chain reaction） Southern杂交（第D6页N/共A69杂页 交）
第31页/共69页
该法检出率很高，也是检测片段最长的方法。应用荧光检测系统可增 强敏感度。该法中的化学试剂有毒，故又发展了碳化二亚胺检测法 （Carbodiimide，CDI），CDI为无毒物质。
第32页/共69页
（六）等位基因特异性寡核苷酸分析法 (allele-specific oligonucleotide ASO) 设计一段20bp左右的寡核苷酸片段，其中包含了发生突变
用连续二次的巢式PCR来扩增包括存在酶位点编码子的DNA片段，在两次 扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段，野生型因被酶切而不 能进入第二次PCR扩增，而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到产物 的富集。
第28页/共69页
（四）变性梯度凝胶电泳法
（
denaturing
gradient
原位杂交（in situ hybridization,ISH） 将分子杂交与组织化学相结合的一项技术，属固相核酸分子杂交范围，
它用标记的DNA或RNA为探针在原位检测组织细胞内特异的DNA或RNA 序列。
第7页/共69页
优点：
1、具有分子杂交的特异性强、灵敏高特点， 同
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第23 章 基因治疗
Gene therapy
李 凌
第一军医大学分子生物学研究所
传统治疗方法
1. 2. 3. 4. 药物治疗 手术治疗 放射治疗 理疗
• 新的生物治疗： • 基因治疗(gene therapy)
基因治疗
一、概念
二、策略
三、基本流程 四、应用与展望
一、基因治疗的概念
• Gene therapy is a medical intervention
(1) 自杀基因疗法
• 将一些来源于病毒或细菌的基因导入肿瘤细胞
• 该基因表达产生的酶可催化无毒性的药物前体 转变为细胞毒性物质，从而杀死肿瘤细胞； • 同时通过“旁观者效应”（bystander effect） 杀死邻近未导入该基因的分裂细胞而显著扩大 杀伤效应。 • 由于携带该基因的受体细胞本身也被杀死，所 以这类基因被称为“自杀基因”。
反义基因疗法
Targeted inhibition of gene expression
反义技术
• 导入特定的反义核酸 • • 反义RNA 核酶（ribozyme）
• 使RNA失活 • 转录和翻译水平
核 酶
催化RNA切割和RNA剪接
Recognition sequences
“hammerhead” ribozymes
胞内，使其在体内有效表达，最终达到治疗 疾病目的的方法，均称之为基因治疗。
二、基因治疗的策略
(一) 直接策略：
• 针对致病基因
(二) 间接策略：
• 导入与致病基因无直接联系的治疗基因
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction）
2. 基因置换（gene replacement）
3. 基因增补（gene augmentation） 又称为补偿性基因治疗 4. 基因失活（gene inactivation） 又称为反义基因治疗
• 自杀基因
• 单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因
• 编 码 胸 苷 激 酶 （ TK ） 催 化 丙 氧 鸟 苷 （ ganciclovir,
GCV）磷酸化成为磷酸化的核苷酸类似物，阻断DNA
的合成。
• 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因
• 将5’-氟胞嘧啶（5’-FC）转化为5’-氟尿嘧啶（5’-FU） 而发挥细胞毒性作用。
反基因技术
• 脱氧寡核苷酸（oligodeoxyribonucleotide, ODN），
也被称为TFO (triplex-forming oligo)
• 肽核酸（peptide nucleic acids， PNA，一种以多
肽骨架取代糖-磷酸骨架的DNA类似物）
• 与靶基因的DNA双螺旋分子形成三股螺旋 • DNA水平
Rb基因，p53基因，MTS基因，nm23基因
p53基因治疗研究：
（1）野生型p53基因的替代疗法 （2）突变型p53基因的阻断疗法 （3）与p53基因有关的新型肿瘤疫苗
4. 基因失活
• 反义基因治疗
• 指采用反义（antisense）技术或反基因 （antigene）、基因敲除（gene knockout）等技术，阻断某些基因的异常表达。
Ganciclovir phosphate inhibits DNA polymerase
Cell death – Including bystander cells
(2) 化疗保护性基因治疗
• 指将编码抗细胞毒性药物蛋白的基因导入人体 细胞，以提高机体耐受肿瘤化疗药物的能力。
• 如 将 多 药 抗 性 （ multiple drug resistance,
based on modification of genetic materials
in living cells.
• 基因治疗是指改变细胞遗传物质为基
础的医学治疗。
基因治疗概念的发展
• 经典概念：将具有正常功能的基因置换或
增补患者体内的缺陷基因，从而达到治疗疾 病的目的。
• 广义概念：将某种遗传物质转移至患者细
• 细胞色素P450基因
Targeted Killing Genetic Pro-drug Activation Therapy
viral vector （HSV）
tumour cell
Ganciclovir（GCV）
tk
thymidine kinase gene
ganciclovir phosphate
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction） • 指将致病基因的突变碱基加以纠正，而保留 正常部分。
2. 基因置换（gene replacement） • 指通过同源重组或基因打靶技术，将正常基 因定点整合到靶细胞基因组内,以原位替换致 病基因。
• 不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进行精 确的原位修复，是最理想的治疗方式。
MDR ）基因 MDR-1 导入骨髓造血干细胞，减
少骨髓受抑制的程度，以加大化疗剂量，提高 化疗效果。
(3) 药物增敏基因治疗
• 将外源基因插入肿瘤细胞后，改变肿瘤细胞对 药物的敏感性。
• 如将钙调素基因转入癌细胞，利用其对癌细胞
self splicing intron ribozymes
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
1. 免疫基因治疗
2. 分子化疗
3. 其它策略
1.免疫基因治疗
(1) 细胞因子基因治疗
IL-2、IL-4、IL-1、IL-6、IL-7、IL-12、
INF-γ、TNF-α、G-CSe augmentation）
又称为补偿性基因治疗
• 是指不去除异常基因，将有功能的正常基因导
入病变细胞或其它细胞后发生非定点整合，表
达正常产物以补偿缺陷基因的功能，或使原有 的功能得以加强。
抑癌基因疗法
抑癌基因：是正常细胞内正常存在的，能抑 制细胞转化和肿瘤发生的一类基因群
(2) 免疫增强基因疗法
MHC I类抗原、共刺激分子
(3) 肿瘤DNA疫苗疗法
癌胚抗原（CEA）制备的肿瘤DNA疫苗
免疫基因治疗
Tumour Necrosis Factor
2.分子化疗
(1) 自杀基因疗法： tk基因、CD基因 (2) 化疗保护性基因治疗： MDR基因 (3) 药物增敏基因治疗： 钙调素基因
Gene therapy
李 凌
第一军医大学分子生物学研究所
传统治疗方法
1. 2. 3. 4. 药物治疗 手术治疗 放射治疗 理疗
• 新的生物治疗： • 基因治疗(gene therapy)
基因治疗
一、概念
二、策略
三、基本流程 四、应用与展望
一、基因治疗的概念
• Gene therapy is a medical intervention
(1) 自杀基因疗法
• 将一些来源于病毒或细菌的基因导入肿瘤细胞
• 该基因表达产生的酶可催化无毒性的药物前体 转变为细胞毒性物质，从而杀死肿瘤细胞； • 同时通过“旁观者效应”（bystander effect） 杀死邻近未导入该基因的分裂细胞而显著扩大 杀伤效应。 • 由于携带该基因的受体细胞本身也被杀死，所 以这类基因被称为“自杀基因”。
反义基因疗法
Targeted inhibition of gene expression
反义技术
• 导入特定的反义核酸 • • 反义RNA 核酶（ribozyme）
• 使RNA失活 • 转录和翻译水平
核 酶
催化RNA切割和RNA剪接
Recognition sequences
“hammerhead” ribozymes
胞内，使其在体内有效表达，最终达到治疗 疾病目的的方法，均称之为基因治疗。
二、基因治疗的策略
(一) 直接策略：
• 针对致病基因
(二) 间接策略：
• 导入与致病基因无直接联系的治疗基因
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction）
2. 基因置换（gene replacement）
3. 基因增补（gene augmentation） 又称为补偿性基因治疗 4. 基因失活（gene inactivation） 又称为反义基因治疗
• 自杀基因
• 单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因
• 编 码 胸 苷 激 酶 （ TK ） 催 化 丙 氧 鸟 苷 （ ganciclovir,
GCV）磷酸化成为磷酸化的核苷酸类似物，阻断DNA
的合成。
• 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因
• 将5’-氟胞嘧啶（5’-FC）转化为5’-氟尿嘧啶（5’-FU） 而发挥细胞毒性作用。
反基因技术
• 脱氧寡核苷酸（oligodeoxyribonucleotide, ODN），
也被称为TFO (triplex-forming oligo)
• 肽核酸（peptide nucleic acids， PNA，一种以多
肽骨架取代糖-磷酸骨架的DNA类似物）
• 与靶基因的DNA双螺旋分子形成三股螺旋 • DNA水平
Rb基因，p53基因，MTS基因，nm23基因
p53基因治疗研究：
（1）野生型p53基因的替代疗法 （2）突变型p53基因的阻断疗法 （3）与p53基因有关的新型肿瘤疫苗
4. 基因失活
• 反义基因治疗
• 指采用反义（antisense）技术或反基因 （antigene）、基因敲除（gene knockout）等技术，阻断某些基因的异常表达。
Ganciclovir phosphate inhibits DNA polymerase
Cell death – Including bystander cells
(2) 化疗保护性基因治疗
• 指将编码抗细胞毒性药物蛋白的基因导入人体 细胞，以提高机体耐受肿瘤化疗药物的能力。
• 如 将 多 药 抗 性 （ multiple drug resistance,
based on modification of genetic materials
in living cells.
• 基因治疗是指改变细胞遗传物质为基
础的医学治疗。
基因治疗概念的发展
• 经典概念：将具有正常功能的基因置换或
增补患者体内的缺陷基因，从而达到治疗疾 病的目的。
• 广义概念：将某种遗传物质转移至患者细
• 细胞色素P450基因
Targeted Killing Genetic Pro-drug Activation Therapy
viral vector （HSV）
tumour cell
Ganciclovir（GCV）
tk
thymidine kinase gene
ganciclovir phosphate
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction） • 指将致病基因的突变碱基加以纠正，而保留 正常部分。
2. 基因置换（gene replacement） • 指通过同源重组或基因打靶技术，将正常基 因定点整合到靶细胞基因组内,以原位替换致 病基因。
• 不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进行精 确的原位修复，是最理想的治疗方式。
MDR ）基因 MDR-1 导入骨髓造血干细胞，减
少骨髓受抑制的程度，以加大化疗剂量，提高 化疗效果。
(3) 药物增敏基因治疗
• 将外源基因插入肿瘤细胞后，改变肿瘤细胞对 药物的敏感性。
• 如将钙调素基因转入癌细胞，利用其对癌细胞
self splicing intron ribozymes
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
1. 免疫基因治疗
2. 分子化疗
3. 其它策略
1.免疫基因治疗
(1) 细胞因子基因治疗
IL-2、IL-4、IL-1、IL-6、IL-7、IL-12、
INF-γ、TNF-α、G-CSe augmentation）
又称为补偿性基因治疗
• 是指不去除异常基因，将有功能的正常基因导
入病变细胞或其它细胞后发生非定点整合，表
达正常产物以补偿缺陷基因的功能，或使原有 的功能得以加强。
抑癌基因疗法
抑癌基因：是正常细胞内正常存在的，能抑 制细胞转化和肿瘤发生的一类基因群
(2) 免疫增强基因疗法
MHC I类抗原、共刺激分子
(3) 肿瘤DNA疫苗疗法
癌胚抗原（CEA）制备的肿瘤DNA疫苗
免疫基因治疗
Tumour Necrosis Factor
2.分子化疗
(1) 自杀基因疗法： tk基因、CD基因 (2) 化疗保护性基因治疗： MDR基因 (3) 药物增敏基因治疗： 钙调素基因