即用型大鼠VEGFSP免疫组化染色试剂盒

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人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA)

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。

【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。

将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。

依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。

【试剂盒组成】1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL4 标准品稀释液6mL10 说明书1份5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张6 酶标试剂6mL12 密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

非小细胞肺癌VEGF免疫组化表达及其临床意义

非小细胞肺癌VEGF免疫组化表达及其临床意义【摘要】目的：探讨非小细胞肺癌VEGF免疫组化表达及其临床意义。

方法：回顾性分析我院收治的90例非小细胞癌患者临床资料和30例肺良性病变患者临床资料，所有患者均采用免疫组化染色技术检测VEGF的表达水平。

结果：VEGF在非小细胞癌患者和肺良性病变患者中表达水平比较差异明显（P<0.01），VEGF在非小细胞肺癌中的阳性表达和病灶大小、PTNM分期及淋巴结是否转移密切相关。

结论：VEGF可作为非小细胞肺癌患者复发转移情况及预后情况的预测指标。

【关键词】非小细胞肺癌；VEGF；免疫组化[Abstract] objective：to explore the expression of VEGF immunohistochemistry of non-small cell lung cancer and its clinical significance. Methods：our hospital were retrospectively analyzed the clinical data of 90 patients with non-small cell carcinoma and the clinical data of 30 patients with lung benign lesions，all patients were using immunohistochemical staining technique to detect the expression of VEGF levels. Results：VEGF in patients with non-small cell carcinoma and lung expression level in patients with benign lesions compared significant difference（P < 0.01），the positive expression of VEGF in non-small cell lung cancer and the lesion size，PTNM staging and lymph node metastasis are closely related. Conclusion：VEGF can be used as a prognostic indicator for recurrence and metastasis in patients with NSCLC.[Key words] non-small cell lung cancer；VEGF；immunohistochemical肺癌是一种高死亡率的疾病，对人类生命和健康产生严重威胁。

WT1在结肠癌中的表达及临床意义

WT1在结肠癌中的表达及临床意义龚勇;仝巧云;郑世华【摘要】目的检测WT1在结肠癌中的表达并探讨其临床意义.方法应用免疫组化及半定量RT-PCR技术检测WT1在48例结肠癌及14例正常结肠组织中的表达情况,分析其与结肠癌患者的临床病理特征及预后等关系.结果 WT1在结肠癌中的阳性表达率明显高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);WT1的表达与患者的年龄、性别和分化程度无关(P>0.05);而与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05);生存分析显示WT1阳性表达组患者的生存期与阴性组差异无统计学意义(P>0.05).结论 WT1的高表达可能在结肠癌的发生发展中起重要作用,设想以WT1为靶点进行基因治疗,有可能为结肠癌的治疗提供新途径.%Objective To observe the expression of WT1 in colon carcinoma, and to explore its clinical significance.Methods The expression levels of WT1 in 48 cases of colon carcinoma and 14 cases of normal colon tissues were detected by immunohistochemistry and semi quantitative RT-PCR.The correlation between the expression of WT1 and clinical pathological features as well as patient's prognosis was analyzed.Results The positive expression rates of WT1 in colon carcinoma were significantly higher than those in normal colon tissues ( P <0.05).The expression of WT1 was not correlated to patient's age and sex,differentiation degree of tumor( P >0.05),however,which was related with TNM staging and lymph node metastasis of tumor ( P <0.05).The survival analysis showed that there was no significant difference in survival time between patients with WT1 positive expression and patients with WT1 negative expression( P >0.05).Conclusion The high expression of WT1 may play an important role in the pathogenesis and development of colon cancer,which may provide an new way for treatment of colon cancer.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2017(039)008【总页数】3页(P1176-1178)【关键词】WT1;结肠癌【作者】龚勇;仝巧云;郑世华【作者单位】443003 三峡大学消化病研究所湖北省宜昌市中心人民医院消化内科;443003 三峡大学消化病研究所湖北省宜昌市中心人民医院消化内科;443003 三峡大学消化病研究所湖北省宜昌市中心人民医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R735.35结肠癌是消化道中常见的恶性肿瘤之一，多发生于40岁以上的男性患者，在我国发病率和病死率较高，由于结肠癌早期症状隐匿，易被忽视，多数患者确诊时已至中晚期，预后较差，因此对于结肠癌的早期诊断及判断预后有重要意义[1]。

GTVisionTM Ⅲ抗鼠兔通用型免疫组化检测试剂盒

包装组成
GK500710 1×10ml 2×12.5ml 1×0.5ml 2个无
GK500711 1×100ml 2×125ml 1×5ml 2个 1个
产品简介：该试剂盒是一个特别敏感的二步法免疫组化试剂盒，适合与兔抗抗体或小鼠抗抗体配用。其
中试剂A是标记有辣根过氧化物酶和抗兔及抗小鼠免疫球蛋白的多聚体分子，相当于二抗，它与兔抗或小鼠抗一抗结合。结合后的大分子即标记有辣根过氧化物酶，再与DAB反应，得到棕色显色。由于该系统不含生物素和链亲和素，所以不受内源型生物素干扰。染色背景非常清晰。
色完全后，用蒸馏水冲洗终止显色。 6）需要时，苏木精复染。 7）各级酒精（70%－100%）脱水，每级3分钟。取出切片置入二甲苯5分钟，三次。 8）用封片胶封片。
产品保存：本品应在 2-8 度保存，并在有效期末前使用，切勿反复冻融。
注意事项： 1、在抗原修复以及其后的免疫组化染色过程中都要避免组织片干燥，保持湿润。
该系统实验步骤少，省时；操作简单，背景低。
产品应用：常规脱蜡水化：将石蜡切片浸于二甲苯中5分钟，三次。取出切片置于100％无水乙醇中3分钟两次；依次置入90% －70%各级酒精各3分钟。用PBS或TBS冲洗3次，每次3分钟。
抗原修复：参照一抗说明书进行抗原修复。
DAB工作液的配制：实验前，按每毫升B液（DAB稀释液）中加1滴（或20微升）C液（DAB原液）的浓度配制所需要的用量，混匀后避光备用。
GTVisionTM Ⅲ etection System/Mo&Rb GTVisionTM Ⅲ抗鼠/兔通用型免疫组化检测试剂盒
货号：
编号
成分
A B C
配件
HRP 标记聚合物(抗兔/鼠) DAB 缓冲稀释液 DAB 原液塑料吸管 10ml 刻度离心管

大鼠(PEDF)ELISA试剂盒说明书,色素上皮衍生因子elisa

大鼠(PEDF)ELISA试剂盒说明书，色素上皮衍生因子elisa大鼠(PEDF)ELISA试剂盒说明书，色素上皮衍生因子elisa供应商：上海乔羽生物有限公司ELISA试剂盒规格：(1) 规格：96T 可以测90个样，5个标准孔，1个空白孔(2) 规格：48T 可以测42个样，5个标准孔，1个空白孔大鼠(PEDF)ELISA试剂盒说明书，色素上皮衍生因子elisa说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

大鼠(PEDF)ELISA试剂盒说明书，色素上皮衍生因子elisa实验内容与方法1．在微量反应板每孔加入待检标本50μl，设阳性、阴性对照各2孔，每孔加入阳性（或阴性）对照各1滴，并设空白对照1孔。

2．每孔加入酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。

3．弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

4．每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37℃孵育15分钟。

5．每孔加终止液1滴，充分混匀。

6．用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

大鼠(PEDF)ELISA试剂盒说明书，色素上皮衍生因子elisa试剂准备试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

1. 标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。

实验前在每个标准品管中加入0.5mL样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。

2. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。

免疫显色试剂说明书

免疫显色试剂说明书【产品名称】免疫显色试剂【包装规格】【预期用途】在免疫组化反应或原位杂交反应中与首要抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。

【检测原理】免疫显色试剂是二步法免疫组化试剂盒，适合与兔或鼠源一抗配用。

其主要过程为，一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物与抗原抗体复合物中的一抗结合，再利用辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺（DAB）在抗原部位形成棕色显色。

由于该系统不含生物素和链亲和素，所以不受内源性生物素干扰，染色背景非常清晰。

【主要组成成分】其他需要但未提供的材料：PBST缓冲液（pH7.2-7.4）、纯化水、酒精、脱蜡液、苏木素染色液、中性树胶、塑料湿盒、染色缸、染色架等。

【储存条件及有效期】储存条件：2-8℃，有效期18个月。

请在开瓶3个月内使用。

生产日期、有效期至：见标签。

【样本要求】常规经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片。

【检测方法】常规脱蜡水化：石蜡切片经常规脱蜡和水化。

抗原热修复：参照一抗说明书进行抗原修复。

DAB工作液的配制：按每毫升DAB缓冲液（试剂D）中加入50μL DAB色原（试剂C）（约1滴）的比例配制DAB工作液，DAB工作液应现配现用。

配制好的DAB 工作液需在2小时内使用，如出现沉淀，使用前先混匀。

操作步骤：1）抗原修复完毕后自然冷却的切片，用自来水清洗。

2）除去切片上组织周围的液体，用免疫组化笔圈定玻片上的待测组织区域并放入PBST缓冲液中。

3）取出切片，除去PBST缓冲液，滴加内源性过氧化物酶阻断剂（试剂A）（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上孵育10分钟，用PBST清洗切片。

4）除去PBST缓冲液，滴加100μL左右一抗工作液（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上进行孵育（按照各自一抗说明书操作）。

一抗孵育完毕，用PBST清洗切片。

5）除去PBST缓冲液，每张切片加酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物（试剂B）100μL左右（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），室温下孵育30分钟。

VEGF、SP在门脉高压大鼠肠黏膜组织的表达

ｔｓｅａｄｔｅｅｐｅｓｏｆＳｎｓｌｉｔｓｎｃｓｓｕｆｘｅｉｎａｏｐｒｔｒｉｉｃｔｃｅｓｄｔａｉｕｎｈｘｒｓｉｎｏＰｉｍａｌｎｅｔａｍｕｏａｔｓｅｏｐｒｍｅｔｌｕａｓｗｅｅｓｇｆａｌｉｒａｅｈｎｓｉｌｉｅｒｇｎｉｎｙｎ
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山姜素调节VEGF

山姜素调节VEGF/SphK1/S1P信号通路对膝骨关节炎大鼠血管生成的影响罗锟，王智，王柯△摘要：目的　探讨山姜素（APT）调节血管内皮生长因子/鞘氨醇激酶1/1磷酸鞘氨醇（VEGF/SphK1/S1P）信号通路对膝骨关节炎（KOA）大鼠血管生成的影响。

方法　采用改良的Videman法构建KOA大鼠模型，将90只大鼠分为对照组（Control组）、模型组（Model组）、山姜素低剂量组（L-APT组）、山姜素高剂量组（H-APT组）、山姜素高剂量组+慢病毒阴性对照组（APT+NC组）、山姜素高剂量组+过表达SphK1慢病毒组（APT+SphK1组），每组15只。

HE染色观察大鼠软骨组织病理变化；酶联免疫吸附试验测定软骨组织白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-6、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）水平；TUNEL检测软骨组织细胞凋亡情况；免疫组化检测血管内皮生长因子（VEGF）、CD31蛋白表达情况；Western blot检测血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、磷酸化VEGFR2（p-VEGFR2）、SphK1、S1P蛋白水平。

结果　与Control组比较，Model组大鼠出现病理损伤，细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、IL-6、MMP-13、VEGF阳性表达、CD31阳性表达和p-VEGFR2、SphK1、S1P蛋白表达水平增加（P＜0.05）；与Model组比较，L-APT组、H-APT组病理损伤明显减轻，细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、IL-6、MMP-13、VEGF阳性表达、CD31阳性表达和p-VEGFR2、SphK1、S1P蛋白表达水平降低（P＜0.05）；与APT+NC组比较，APT+SphK1组软骨组织病理损伤加重，细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α、IL-6、MMP-13、VEGF阳性表达、CD31阳性表达和p-VEGFR2、SphK1、S1P蛋白表达水平增加（P＜0.05）。

常用免疫组化试剂介绍完整版

常用免疫组化试剂介绍完整版免疫组化试剂是一类用于检测细胞和组织中特定分子的试剂。

它们能够与目标分子发生特异性的结合反应，通过显色、荧光等方式实现目标分子的定位和检测。

常用的免疫组化试剂有抗体、底物、荧光染料等。

下面将详细介绍常用的免疫组化试剂。

一、抗体单克隆抗体：单克隆抗体是由单个克隆的B细胞分泌的抗体组成。

它们具有更高的特异性和一致性，适用于特定的免疫组化实验。

单克隆抗体一般通过酶联免疫吸附试验或杂交瘤技术获得。

二、底物底物是一种被特定酶催化后能够产生染色或荧光信号的化学物质。

在免疫组化实验中，常用的底物有DAB、VIP、AP、HRP等。

DAB：DAB（3,3'-二氨基联吡啶）是一种常用的免疫组化染色底物。

当DAB与过氧化物酶结合后，在特定条件下会产生棕色沉淀物，用于检测目标分子的位置。

VIP：VIP（维珍纳胶体阳离子）是一种特殊的底物，其在经过过氧化物酶催化后，形成带有阳离子电荷的胶体颗粒。

VIP用于染色后，可以形成黑色沉淀物。

AP：AP（碱性磷酸酶）是一种常用的底物，可以和特定基质反应生成可见或荧光信号。

AP基质有两种常用的类型，一种是快速红色溶液（Fast Red），另一种是紫色溶液。

HRP：HRP（过氧化物酶）是一种广泛使用的底物，在过氧化物酶的作用下可以产生明亮的荧光或染色信号。

HRP染色通常呈现为褐色或黑色。

三、荧光染料荧光染料是一种通过吸收特定波长的光线并在另一个波长下发射荧光的化合物。

免疫组化实验中常用的荧光染料有FITC、TRITC、Cy3、Cy5等。

FITC：FITC（荧光异硫氰酸酯或荧光同硫氰酸酯）是一种常用的绿色荧光染料，其在激发波长为488nm的波长下产生绿色荧光。

TRITC：TRITC（荧光异硫氰酸酯）是一种常用的红色荧光染料，其在激发波长为568nm的波长下产生红色荧光。

Cy3：Cy3是一种荧光发色团，其在激发波长为550nm的波长下产生黄绿色荧光。

Cy5：Cy5是一种荧光发色团，其在激发波长为650nm的波长下产生红色荧光。

常用免疫组化染色要点

常用免疫组化染色要点1、取材对于活检或手术切除标本应在2小时内取材或固定，避免组织自溶及抗原变性等影响免疫组化结果。

取材时为避免挤压组织，尽量使用锋利刀片，并且避开坏死组织。

取有代表性的肿瘤组织。

2、固定标本用10%中性缓冲福马林固定液 (甲醛10ml + 0.01M ph7.4 PBS 90ml)固定12-18小时，不超过24小时。

有些单位采用先固定标本后取材的工作程序。

此时要注意，比较大的肿瘤应该切开固定，避免肿瘤中心部分固定不及时。

3、脱水．透明、浸蜡、包埋、切片等按照常规方法用自动脱水机脱水、透明、浸蜡。

注意温度不要超过60℃。

玻片处理：彻底清洗，烤干后1:10多聚赖氨酸涂抹玻片，风干。

组织切片厚度4-5微米。

烤片50-60℃，2-3小时以上。

常规脱蜡入水。

4、常用检测系统选择SP三步法：敏感度大于EnVision、EliVision约1-2倍，但不宜用于富含亲生物素物质的组织，尤其对肝、肾组织很容易造成非特异性着色。

EnVision、EliVision两步法：特异性强，可以避免生物素非特异性结合。

5、免疫组化步骤抗原修复高温高压pH6.0柠檬酸盐缓冲液修复，适用于绝大多数抗原。

需要用95℃热水浴EDTA（pH9.0）修复20分钟。

适合于：CD10、CD138、Bcl-6、MuM1、VEGF、CD31、CD117、CD30、Cyclin D1、TdT、ALK。

不需要修复的抗体：GST-π等。

需要胃蛋白酶消化的抗体：EGFR，EBV。

在此后整个染色过程中，切片不能干燥，否则会造成非特异着色。

pH7.4 0.01M PBS（或者TBS）缓冲液浸洗切片5分钟×3次（下同）。

室温下将切片浸入 3% H2O2溶液10分钟，以阻断内源性过氧化物酶作用（显色后红细胞如果着色，说明H2O2 浓度不够，不能抑制内源性酶）。

PBS洗后拭去组织周围多余的水分，离组织切片周围约2mm处以防渗笔圈定。

注意细节: 组织切面上水分不要过多；抗体液量适当；液体不能流离到组织外，玻片平置，等。

即用型大鼠VEGFSP免疫组化染色试剂盒

即用型大鼠VEGF SP免疫组化染色试剂盒产品编号：QD82178试剂的保存：短期于4℃保存，长期于-20℃保存。

工作原理血管内皮生长因子(VEGF)是相对分子质量为(34～45) ×103的同源二聚体糖蛋白。

人体内可形成多种异构体可以特异性地促进血管内皮有丝分裂的因子。

VEGF是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原,它能增加血管通透能力,促进内皮细胞增殖,对肿瘤的浸润和转移有重要影响。

链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。

同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。

亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。

链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

根据研究，SP（StreptAvidin-Biotin Complex）大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。

应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。

试剂盒中内容1.山羊血清封闭液：1ml(效价1：10，临用前用TBS或PBS稀释10倍)。

用于组织切片的封闭。

2.二抗：1ml（效价1：10，临用前用抗体稀释液稀释10倍)。

亲和纯化抗体，标记长臂生物素，生物素标记抗兔IgG。

3.SP：1ml（效价1：10，临用前用SP稀释液稀释10倍）。

链酶亲和素-过氧化物酶复合物。

用户自备试剂：1.粘片剂APES或Poly-L-Lysine。

2.0.01M PBS，0.01M 枸橼酸盐缓冲液。

3.DAB显色试剂盒。

4.免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。

石蜡切片染色程序:1.载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。

人血管内皮生长因子（VEGF）酶联免疫检测试剂盒使用说明

人血管内皮生长因子（VEGF)酶联免疫检测试剂盒使用说明书AE98006Hu使用前仔细阅读本说明书。

本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人血管内皮生长因子（VEGF)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。

用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子（VEGF)测定。

工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人血管内皮生长因子（VEGF)水平。

向预先包被了人血管内皮生长因子（VEGF)单克隆抗体的酶标孔中加入人血管内皮生长因子（VEGF)，温育；温育后，加入生物素标记的抗VEGF抗体。

再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅与样品中人血管内皮生长因子（VEGF)的浓度呈正相关。

试剂盒组成试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品1200ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存链霉亲和素-HRP3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存生物素标记的抗0.5ml×1瓶1ml×1瓶2-8℃保存VEGF抗体显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存需要而未提供的试剂和器材1．37℃恒温箱。

2．标准规格酶标仪。

3．精密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

vegf免疫组化流程 -回复

vegf免疫组化流程-回复Vegf（Vascular Endothelial Growth Factor）是一种具有重要生物学功能的蛋白质，它在血管生成和修复过程中发挥着关键的调节作用。

免疫组化是一种常用的实验方法，用于检测细胞或组织中特定蛋白质的表达情况。

本文将详细介绍Vegf免疫组化的流程，包括实验前准备、标本处理、抗体选择和染色图像分析等步骤。

一、实验前准备在进行免疫组化实验前，需要准备一些常规试剂和设备，包括理化变性蜡、甲醇、乙醇、去离子水、磷酸盐缓冲液、遮蔽血清、细胞培养液、家兔抗人Vegf抗体等。

此外，还需要准备显微镜、显微镜幻灯片等实验用具。

二、标本处理1. 组织标本处理：将要研究的组织标本（如肿瘤组织、血管组织等）固定在理化变性蜡中，使得细胞和组织的形态保持不变。

然后将标本切片成5-10微米的薄片，并将切片放置于显微镜幻灯片上。

2. 细胞标本处理：将要研究的细胞标本（如细胞培养物）放置在一块玻璃片上，固定并渗透化。

然后使用标本夹将玻璃片固定在显微镜幻灯片上。

三、抗体选择1. 抗原复性：为了将标本中的蛋白质保持在天然状态，需要进行抗原复性的处理。

将标本加热至95C-100C，并在一段时间内保持该温度，以解离蛋白的构象。

2. 抗体选择：根据研究需要选择适当的抗体。

在本实验中，我们选择了家兔抗人Vegf抗体作为主抗体。

需要注意的是，抗体的浓度需要根据实验条件进行优化。

四、免疫组化染色1. 染色液准备：将选择的抗体与染色试剂（如二聚体过氧化物酶标记物）进行特异的结合，制成免疫染色试剂。

根据厂家提供的说明书进行稀释，以获得合适的浓度。

2. 组织/细胞的孔洞修复：由于切片过程中可能会产生一些孔洞，需要进行孔洞修复，以防止抗体的非特异性结合。

一种常用的孔洞修复方法是使用5牛血清白蛋白进行封闭。

3. 抗体染色：将制备好的免疫染色试剂加到切片或细胞标本上，使其与目标蛋白质的抗原发生特异性结合。

保持染色试剂在标本上的接触时间，以便充分发生反应。

vegf免疫组化流程

vegf免疫组化流程VEGF（vascular endothelial growth factor）是一种重要的血管内皮生长因子，能够促进血管生成和血管通透性增加。

VEGF免疫组化是一种常用的实验方法，用于检测组织或细胞中VEGF的表达水平。

下面是一般的VEGF免疫组化流程：1. 取得组织样本：首先需要获取需要检测的组织样本，可以是固定的组织切片或细胞。

2. 制备切片：如果使用组织切片，需要将组织样本进行固定、脱水、包埋等处理，然后用切片机将组织切成薄片。

3. 脱脂和去蜡：将切片放入去脂溶剂中脱脂，然后用去蜡剂去除蜡质。

4. 抗原修复：将切片放入抗原修复液中，通过高温或低温处理，使得细胞或组织中的VEGF蛋白变得更容易被抗体识别。

5. 阻断非特异性结合：将切片放入阻断液中，阻断非特异性结合位点，减少假阳性结果。

6. 抗体结合：将切片放入含有VEGF抗体的抗体溶液中，使抗体与样本中的VEGF蛋白结合。

7. 洗涤：将切片用缓冲液洗涤，去除未结合的抗体。

8. 反应物结合：将切片放入含有与VEGF抗体结合的酶标记二抗或荧光二抗的溶液中，使其与VEGF抗体结合。

9. 洗涤：将切片用缓冲液洗涤，去除未结合的二抗。

10. 显色或荧光染色：使用适当的显色剂或荧光染料，使结合了二抗的切片产生可见的颜色或荧光。

11. 脱水和封片：将切片依次放入乙醇溶液中脱水，然后用透明剂澄清，最后用封片剂封闭切片。

12. 显微镜观察：将封好的切片放入显微镜下观察，通过显色或荧光信号的强度和分布来判断样本中的VEGF表达水平。

需要注意的是，不同实验室可能会有一些细微的差异，具体的实验步骤和试剂使用可能会有所不同。

因此，在进行VEGF免疫组化实验时，最好参考特定实验室或研究文献中的具体流程。

CD68与VEGF在子宫内膜腺癌中的表达及意义

CD68与VEGF在子宫内膜腺癌中的表达及意义余期龙;胡小青【摘要】目的探讨子宫内膜腺癌组织中CD68与VEGF的表达与子宫内膜癌临床病理参数之间的关系.方法采用免疫组化方法对40例子宫内膜腺癌(EAC)、20例正常子宫内膜(NE)及20例子宫内膜非典型增生(EAH)组织中的CD68与VEGF蛋白进行检测.结果 (1)EAC组织CD68的表达明显高于NE、EAH组织(P＜0.05); EAC组织CD68的阳性率与手术病理分期、组织学分级、淋巴转移有关(P＜0.05),与年龄、肌层浸润无关(P＞0.05).(2)EAC组织VEGF的表达明显高于NE、EAH组织(P＜0.05)；EAC组织VEGF的阳性率与手术病理分期、淋巴转移有关(P＜0.05),与年龄、组织学分级、肌层浸润无关(P＞0.05).(3)CD68和VEGF蛋白在EAC中的表达呈现正相关(rs=0.420,P=0.007).结论 CD68与VEGF在EAC组织中过量表达,呈明显正相关.CD68阳性细胞即肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、VEGF可能与EAC 的发生发展有关,TAMs可能通过表达VEGF促进肿瘤的生长与转移.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2012(047)010【总页数】4页(P864-866,873)【关键词】子宫内膜腺癌;CD68;VEGF;免疫组织化学;TAMs【作者】余期龙;胡小青【作者单位】330006南昌,江西省妇幼保健院肿瘤科;330006南昌,江西省妇幼保健院肿瘤科【正文语种】中文【中图分类】R737.33子宫内膜癌作为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，近年来发病率不断上升,并具有年轻化的趋势。

全世界范围内，子宫内膜癌是仅次于宫颈癌为第二好发的妇科恶性肿瘤[1]。

研究发现，肿瘤相关巨噬细胞(CD68标记)往往是肿瘤微环境中最丰富的细胞群，占30%-50%[2]，参与了肿瘤的发生、生长等过程，尤其是肿瘤的血管及淋巴管的形成[3，4]。

vegf免疫组化流程

vegf免疫组化流程VEGF免疫组化流程是一种常用于研究血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）在生物组织中的表达和分布的实验方法。

VEGF是一种重要的调节因子，对血管生成和组织修复过程起着重要作用。

VEGF免疫组化流程可以帮助科研人员了解VEGF在不同组织中的表达情况，进一步研究其功能和疾病相关性。

下面将介绍VEGF免疫组化流程的详细步骤。

流程步骤：1. 组织固定：将组织标本取出，迅速固定。

常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林（neutral buffered formalin）和4%的冷磷酸盐缓冲液（4% paraformaldehyde）。

固定时间根据组织的大小和类型进行调整，一般为4-24小时。

2. 组织包埋：将固定的组织标本进行去水和透明化处理。

去水可使用不同浓度的乙醇，透明化可使用透明剂（如二甲苯或其它透明剂）进行处理。

该步骤的目的是为了保持标本的完整性和可切片性。

3. 切片：将透明化的组织标本放入组织切片机中进行切片。

切片厚度一般为3-5μm。

切片完成后，用标签或玻片记录好切片的顺序和位置。

4. 石蜡去除和抗原修复：将切片的石蜡脱除，一般使用二甲基苯（xylene）或其它脱蜡剂进行处理。

然后进行抗原修复步骤，该步骤的目的是为了恢复组织标本中的抗原的可识别性。

抗原修复方法可能有多种选择，包括高温蒸压法（如压力锅法）、酶消化法以及化学方法。

5. 抗体染色：将修复后的切片进行抗体染色。

VEGF的免疫组化染色可使用VEGF特异性的一抗和二抗来实现。

一抗与组织标本中的VEGF结合，二抗与一抗结合，再使用染色剂如二氧化钼直接可视化。

免疫组化染色的过程中需进行阴性对照和阳性对照，以确保结果的准确性。

6. 洗涤和封片：完成抗体染色后，将切片进行洗涤，去除多余的染色剂和抗体。

之后将切片用温暖的蒸馏水冲洗数次，以去除洗涤液中的盐析物。

最后，用有机溶剂（如二甲苯或其它溶剂）将切片覆盖玻片，并在切片和玻片之间加入合适的封片剂，然后加盖盖玻片。

CgA、CD56、Syn在小细胞肺癌中的表达及与预后的关系

CgA、CD56、Syn在小细胞肺癌中的表达及与预后的关系发表时间：2018-06-12T14:16:56.587Z 来源：《航空军医》2018年6期作者：杨望军[导读] 神经内分泌表型是小细胞肺癌的预后影响因素之一。

（安化县人民医院湖南安化413500）摘要：目的探讨CgA、CD56、Syn在小细胞肺癌中的表达及与预后的关系。

方法选取我院于2015年1月-2017年1月间收治的小细胞肺癌住院患者45例，所有患者均采用免疫组化染色技术检测CgA、CD56、Syn的表达情况，所有患者均随访1年。

结果本组小细胞肺癌组织中，CgA阳性率为33.3%，CD56阳性率为86.7%，Syn阳性率为64.4%，CgA、CD56、Syn在小细胞肺癌中的阳性表达之间比较无明显差异，P>0.05；此外对CgA、CD56、Syn在不同临床病理参数中的阳性表达也无明显差异，P>0.05；对小细胞肺癌单因素生存分析显示，NE 表型与SCLC 的无进展生存有密切联系，P<0.05。

结论神经内分泌表型是小细胞肺癌的预后影响因素之一，关键词：小细胞肺癌；CgA；CD56；Syn；预后[Abstract] objective to investigate the expression and prognosis of CgA，CD56 and Syn in small cell lung cancer.Methods select our hospital from January 2015 to January 2017 were between 45 patients with small cell lung cancer in the hospital，all patients were using immunohistochemical staining techniques to detect CgA，the expression of CD56 and Syn，all patients were followed up for 1year.Results this group of small cell lung cancer tissues，CgA positive rate was 33.3%，CD56 positive rate was 86.7%，the Syn positive rate was 64.4%，the CgA，CD56，Syn in small cell lung cancer was no significant difference between the positive expression，P >0.05；In addition，there was no significant difference in the positive expression of CgA，CD56，and Syn in different clinicopathological parameters，P BBB 0 0.05；The survival analysis of single factor of small cell lung cancer showed that the NE phenotype was closely related to the non-progress of SCLC，P<0.05.Conclusion neuroendocrine phenotype is one of the prognostic factors of small cell lung cancer.[Key words] small cell lung cancer；CgA.CD56；The Syn.The prognosis肺癌已成为目前常见恶性肿瘤之一，随着环境污染的不断加剧，肺癌的患病率逐年增加，有统计显示[1]，目前部分发达国家及我们一些大城市男性肺癌的发病率要高于其他恶性肿瘤。

子宫内膜癌患者血管内皮生长因子和脂联素及表皮生长因子受体表达的临床意义

子宫内膜癌患者血管内皮生长因子和脂联素及表皮生长因子受体表达的临床意义耳丽雪;刘凤巧【摘要】目的研究子宫内膜癌患者血管内皮生长因子(VEGF)、脂联素及表皮生长因子受体(EGFR)表达的临床意义.方法选取49例子宫内膜癌患者作为研究组,子宫内膜正常者44例作为对照组,分析两组VEGF和脂联素及EGFR表达.结果研究组VEGF和脂联素的光密度值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),研究组EGFR 表达与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 VEGF和脂联素及EGFR可能参与了子宫内膜癌的发生发展.%Objective To study the clinical significance of VEGF, adiponectin, and EGFR expressions in endometrial cancer. Method Forty-nine patients with endometrial carcinoma were enrolled as the study group, whilst 44 healthy volunteers were taken as the control group, for the analysis of VEGF,adiponectin, and EGFR expression variations between the two groups. Results The optical densities ( OD ) of VEGF and adiponectin in the study group were significantly different from those of the control group ( P ＜ 0.05 ). The expression of EGFR in the study group also varied significantly from that in the control group ( P ＜ 0.01 ). Conclusion VEGF, adiponectin, and EGFR may be involved in the occurrence and progression of endometrial carcinoma.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2011(017)009【总页数】2页(P1417-1418)【关键词】子宫内膜肿瘤;血管内皮生长因子;脂联素;表皮生长因子【作者】耳丽雪;刘凤巧【作者单位】河北省赵县妇幼保健院,赵县,051530;河北省赵县妇幼保健院,赵县,051530【正文语种】中文【中图分类】R737.33子宫内膜癌为妇科常见恶性肿瘤，占女性生殖道恶性肿瘤的20%～30%，严重威胁女性身心健康，近年其发病率呈上升趋势，且患病年龄逐渐年轻［1］。