卡介菌多糖核酸对早期隐性梅毒患者外周血T细胞亚群的影响

第３８卷第ｌ期第７２页２００９年２月华中科技大学学报（医学版）ＡｃｔａＭｅｄＵｎｉｖＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌＨｕａｚｈｏｎｇＶ０１．３８Ｎｏ．１Ｐ．７２Ｆｅｂ．２００９卡介菌多糖核酸对早期隐性梅毒患者外周血Ｔ细胞亚群的影响陈岚１涂亚庭２李慎秋１陈兴平１周礼义１１华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤性病科，武汉４３００３０２华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤性病科，武汉４３００２２摘要目的探讨卡介菌多糖核酸（ＢＣＧ－ＰＳＮ）对早期隐性梅毒患者外周血Ｔ细胞亚群表达的影响。

方法将３０例早期隐性梅毒患者随机分为病例对照组与ＢＣＧ－ＰＳＮ组，病例对照组按常规青霉素驱梅方案治疗，ＢＣＧ－ＰＳＮ组除常规驱梅治疗外加用ＢＣＧ－ＰＳＮ；以健康志愿者１５例为正常对照组。

采用流式细胞术对早期隐性梅毒患者治疗前后外周血Ｔ细胞亚群表达进行检测。

结果早期隐性梅毒患者治疗前外周血中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ细胞百分率和ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值较正常对照组显著降低。

差异均有极显著性意义（均Ｐ＜０．０１）；ＣＤ８＋Ｔ细胞百分率高于正常对照组，差异有显著性意义（ｐ＜ｏ．０５）。

治疗后。

ＢＣＧ－ＰＳＮ组外周血ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ细胞百分率及ＣＤ４＋／ｃＤ８＋比值均较治疗前显著升高（均Ｐ＜０．０１）；而病例对照组治疗后外周血ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ细胞百分率及ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值与治疗前比较，差异均无显著性意义（均Ｐ＞Ｏ．０５）。

结论早期隐性梅毒患者细胞免疫抑制明显，ＢＣＧＰＳＮ可纠正早期隐性梅毒患者Ｔ细胞亚群失衡，改善其细胞免疫失调，提示ＢＣＣｒＰＳＮ是一种有效的免疫调节剂，可作为梅毒的辅助治疗药物。

关键词早期隐性梅毒；卡介菌多糖核酸；Ｔ细胞亚群中国法分类号Ｒ７５９．１ＤＯＩ：１０．３８７ＣＩ／ｊ．ｉｓｓｎ。

１６７２—０７４１．Ｚ００９．０１．０１８ＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＢＣＧ－ＰＳＮｏｎＰｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｏｏｄＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅＳｕｂｓｅｔｓｉｎＥａｒｌｙＬａｔｅｎｔＳｙｐｈｉｌｉｓＣｈｅｎＬａｎｌ，ＴｕＹａｔｉｎ９２，ＬｉＳｈｅｎｑｉｕｌｅｔａｌ１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｈｕａｚｈｏｎｇ［１ｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００３０２ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ。

ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００２２ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｅｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＢＣＧ－ＰＳＮＯｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｅａｒｌｙｌａｔｅｎｔｓｙｐｈｉｌｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｉｒｔｙｃａｓｅｓｏｆｅａｒｌｙｌａｔｅｎｔｓｙｐｈｉｌｉｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｒａｎｄｏｍｌｙｔＯｃａｓｅｃｏｎｔｒｏｌａｎｄＢＣ（｝ＰＳＮｇｒｏｕｐｓ．ＴｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｃａｓｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｂｙｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｏｆｒｏｕｔｉｎｅｐｒｏｊｅｃｔｔＯｅａｒｌｙｓｙｐｈｉｌｉｓ，ａｎｄｔｈｏｓｅｉｎＢＣＧ－ＰＳＮｇｒｏｕｐｂｙＢＣＧ－ＰＳＮｂｅｓｉｄｅｓｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ．Ｆｉｆｔｅｅｎｈｅａｌｔｈｙｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓｓｅｒｖｅｄａｓｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｗｅｒｅａｓｓｅｓｓｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）ｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＲｅｓｕｌｔｓＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏＩｇｒｏｕｐ，ｅａｒｌｙｌａｔｅｎｔｓｙｐｈｉｌｉｓｐａｔｉｅｎｔｓｓｈｏｗｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＣＤ３＋，ＣＤ４。

ＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｄｒａｔｉｏｏｆＣＤ４＋／ＣＤ８’（ａｌｌＰ＜Ｏ．０１）。

ａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＣＤ８＋Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ（Ｐ＜：Ｏ．０５）．Ａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＣＤ３＋，ＣＤ４＋Ｔｌｙｍ—ｐｈｏｃｙｔｅｓａｎｄｒａｔｉｏｏｆＣＤ４＋／ＣＤ８＋ｉｎＢＣＧ－ＰＳＮｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅｂｅｆｏｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ａｌｌＰ＜０．０１），ｂｕｔｔｈｏｓｅｉｎｃａｓｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｆｒｏｍｔｈｏｓｅｂｅｆｏｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ（ａｌｌＰ＞０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＥａｒｌｙｌａｔｅｎｔｓｙｐｈｉｌｉｓｐａｔｉｅｎｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＢＣＧ－ＰＳＮｃａｎｒｅｔｒｉｅｖｅｉｍｂａｌａｎｃｅｏｆｐｅ—ｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓｉｎｅａｒｌｙｌａｔｅｎｔｓｙｐｈｉｌｉｓｐａｔｉｅｎｔｓ，ａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｉｒｃｅｌｌｕｌａｒｉｍｍｕｎｅｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓｅａｒｌｙｌａｔｅｎｔｓｙｐｈｉｌｉｓ；ＢＣＧ－ＰＳＮｌｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓ卡介菌多糖核酸（ＢＣＧ－ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ，ＢＣＧ－ＰＳＮ）是我国自行研制生产的具有多种免疫调节功效的一种新型免疫调节剂。

现已广泛应用于病毒感染性疾病（感冒、带状疱疹、复发性单纯疱疹等）、肿瘤（肺癌、乳腺癌和肝癌等）以及自身免疫性疾病（系统性红斑狼疮）等的辅助治疗，临床观冻岚，女，１９７４年生，主治医师。

Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｌａｎ＠ｍｅｄｍａｉＬｃｏｍ．∞察表明ＢＣＧ－ＰＳＮ有较强的免疫调节作用［１｛］。

目前，临床上已将ＢＣＧ－ＰＳＮ用于治疗生殖器疱疹、尖锐湿疣等性传播疾病并已取得一定疗效，但其具体作用机制至今仍未完全明了。

本研究采用流式细胞术检测ＢＣＧＰＳＮ治疗前后早期隐性梅毒患者外周血Ｔ细胞亚群的变化，探讨ＢＣＧ－－ＰＳＮ治疗早期隐性梅毒的免疫调节机制。

陈岚等．卡介菌多糖核酸对早期隐性梅毒患者外周血Ｔ细胞亚群的影响・７３・１材料与方法１．１研究对象１．１．１病例选择病例组：３０例早期隐性梅毒患者（诊断标准见全国高等医药院校教材《皮肤性病学》第５版，感染期限在２年以内的隐性梅毒称为早期隐性梅毒），系来自２００５年６月～２００７年１月武汉市同济医院皮肤性病科门诊及住院部患者，其中男性１３例，女性１７例，年龄２２～５８岁，年龄中位数３３．７岁。

正常对照组：选择与病例组年龄、性别相仿的健康志愿者１５例，其中男８例，女７例；年龄２０～５０岁，年龄中位数３４．８岁。

１．１．２病例组分组按２。

１简单随机对照试验方法将３０例早期隐性梅毒患者随机分为ＢＣＧ—ＰＳＮ组与病例对照组。

ＢＣＧＰＳＮ组：２０例，其中男９例，女１１例；年龄２３～５４岁，年龄中位数３４．２岁。

病例对照组：１０例，其中男４例，女６例；年龄２２～５８岁，年龄中位数３３．５岁。

两组间年龄、性别及病程差异无显著性意义（均Ｐ＞０，０５），入组前均未接受驱梅治疗，显示两组间具有可比性。

１．１．３治疗方案为避免早期隐性梅毒ＢＣＧ－ＰＳＮ组及病例对照组患者出现Ｊａｒｉｓｃｈ—Ｈｅｒｘｈｅｉｍｅｒ反应，治疗前作３ｄ驱梅准备，即口服强的松，每次１０ｍｇ，每日２次，共３ｄ；然后均按早期梅毒常规驱梅方案治疗，即苄星青霉素２４０万Ｕ，肌肉注射。

每周１次，共３次。

ＢＣＧＰＳＮ组同时肌肉注射ＢＣＧ－ＰＳＮ针剂（商品名斯奇康，长沙九芝堂制药有限公司生产）１ｍｇ，隔日１次，连续１８次，３６ｄ为ｌ疗程。

而病例对照组未再使用任何药物治疗。

１．１．４标本采集采集正常对照组及早期隐性梅毒患者ＢＣＧ－ＰＳＮ组与病例对照组驱梅准备前及治疗后（即ＢＣｐＰＳＮ组治疗１疗程结束时）外周静脉血２ｍｌ，肝素抗凝送检。

１．２实验方法１．２．１主要仪器与设备ＢＤＦＡＣＳｃａｎ型流式细胞仪（美国ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司）；１２×７５ｍｍ流式专用管（美国ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司）；ＬＤ４－２Ａ水平式离心机（北京医用器械厂）；８５—２型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂）。

１．２．２主要试剂Ｔ淋巴细胞亚群单克隆抗体试剂盒（美国ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司）；红细胞裂解液（美国ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司）；２％多聚甲醛ＰＢＳ液（自行配制）；１×ＰＢＳ液（自行配制）。

１．２．３检测步骤ＢＣＧ－ＰＳＮ组与病例对照组治疗前、后及正常对照组外周血Ｔ淋巴细胞亚群检测：取上述观察对象肝素抗凝血５０弘ｌ，加入Ｔ淋巴细胞亚群单克隆抗体检测试剂５弘Ｉ，混匀，室温暗处孵育２０ｍｉｎ；加入１ｍｌ红细胞裂解液，室温暗处孵育１０ｒａｉｎ；用ＰＢＳ２ｍｌ洗涤２次，１０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｒａｉｎ，去除上清液；加２％多聚甲醛ＰＢＳ５００肛ｌ固定细胞，放置４℃～８℃冰箱待检测。

标本混匀上机，采用流式细胞仪进行检测。

从采集标本到上机均在２４ｈ内完成。

测定结果采用ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ功能软件进行参数获取和数据分析，打印出散点图，以荧光抗体染色阳性细胞的百分率记录结果。

１．３统计学处理采用ＳＡＳ８．１软件对各组外周血ＣＤ３＋Ｔ、ＣＤ４＋Ｔ、ＣＤ８＋Ｔ细胞亚群的表达水平进行方差齐性ｔ检验，ＢＣＧ－ＰＳＮ治疗组、病例对照组治疗前后的组内各指标比较采用成对ｔ检验，ＢＣＧ－ＰＳＮ治疗组与病例对照组治疗前后的组间各指标比较采用成组ｔ检验。

以Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义。

２结果３０例早期隐性梅毒患者治疗前外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＣＤ３＋Ｔ、ＣＤ４＋Ｔ细胞百分率和ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值均较正常对照组显著降低，差异有极显著性意义（ｔ值分别为６．０５，８．７８，７．９５；均Ｐ＜０．０１）；ＣＤ８＋Ｔ细胞百分率高于正常对照组，差异有显著性意义（ｆ值为２．５２，Ｐ＜０．０５）。

结果见表１。

早期隐性梅毒ＢＣＧＰＳＮ组及病例对照组治疗前ＣＤ３＋Ｔ、ＣＤ４＋Ｔ、ＣＤ８＋Ｔ细胞百分率及ＣⅨ＋／ＣＤ８’比值差异均无显著性意义（ｔ值分别为０．２３，０．１７，０．０９，０．１５；均Ｐ＞０．０５），说明两组具有可比性。

治疗后，ＢＣＧ－ＰＳＮ组患者外周血ＣＤ３＋Ｔ、ＣＤ４＋Ｔ细胞百分率及ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值均较治疗前显著升高（ｔ值分别为８．７６，８．３１，６．７６；均Ｐ＜０．０１）；ＣＤ８＋Ｔ细胞百分率与治疗前相比差异无统计学意义（ｆ—１．０１，Ｐ＞０．０５）。