CRISPR简介汇总
基因编辑技术CRISPR
基因编辑技术CRISPR基因编辑技术CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种革命性的基因工程技术,它可以精准地修改生物体的基因组,为科学研究、医学治疗和农业发展带来了巨大的希望和机遇。
CRISPR技术的出现改变了基因编辑领域的格局,被誉为“基因剪刀”,具有高效、精准、便捷等特点,受到广泛关注和应用。
一、CRISPR技术原理CRISPR技术是受到细菌天然免疫系统的启发而发展起来的一种基因编辑技术。
细菌通过CRISPR/Cas系统来抵御病毒入侵,其中CRISPR是一段DNA序列,记录了细菌曾经感染过的病毒基因信息,Cas蛋白则能识别并切割这些病毒基因。
科学家们发现,通过改造CRISPR/Cas系统,可以实现对生物体基因组的精准编辑。
CRISPR技术的基本原理是利用一种叫做“引导RNA”的分子,它能够将CRISPR/Cas系统导向到特定的基因组位置,然后Cas蛋白就会在这个位置上进行切割或编辑操作。
通过设计合适的引导RNA序列,科学家可以实现对基因组的精准编辑,包括基因敲除、基因插入、基因修饰等操作。
二、CRISPR技术在科学研究中的应用CRISPR技术在科学研究领域发挥着重要作用,它为科学家们提供了一种高效、精准的基因编辑工具,帮助他们研究基因功能、疾病机制等重要科学问题。
通过CRISPR技术,科学家们可以快速生成基因敲除或基因突变的细胞系或动物模型,从而揭示基因在生物体内的功能和作用机制。
此外,CRISPR技术还被广泛应用于基因组筛选、基因组编辑、疾病模型构建等方面。
科学家们利用CRISPR技术可以精准地编辑细胞的基因组,研究基因与疾病之间的关系,为疾病的治疗和预防提供新的思路和方法。
三、CRISPR技术在医学治疗中的应用CRISPR技术在医学治疗领域具有巨大的潜力,可以用于治疗各种遗传性疾病、癌症、传染病等疾病。
crispr的技术原理和应用范围是什么
CRISPR的技术原理和应用范围是什么技术原理CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种基因组编辑技术,它基于细菌和古细菌天然的免疫系统。
CRISPR-Cas9系统是目前最常用的CRISPR技术。
CRISPR-Cas9系统的组成CRISPR-Cas9系统由两个主要组成部分构成:CRISPR RNA (crRNA)和trans-activating crRNA(tracrRNA),以及Cas9蛋白。
基因组编辑过程1.目标序列识别:crRNA与tracrRNA结合形成一种双链RNA结构,这个结构与目标DNA序列互补。
Cas9蛋白结合到RNA结构上形成复合体。
2.DNA切割:Cas9蛋白在目标DNA区域形成双链断裂。
这个切割可以在目标序列内产生插入或删除,或者通过DNA修复机制引发更改。
3.DNA修复:细胞会借助内源性DNA修复机制,如非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)修复Cas9引起的DNA的双链断裂。
4.基因组编辑:通过选择特定的修复机制,人们可以实现目标DNA序列的插入、删除或更改。
应用范围CRISPR的技术原理提供了一种简便且高效的基因组编辑方法,因此在许多领域都有广泛的应用。
生物医学研究CRISPR技术已经成为生物医学研究中最重要的工具之一。
它可以被用来研究基因功能、识别致病基因以及探索疾病的治疗方法。
通过编辑基因组,科学家可以模拟疾病状态,并研究特定基因与疾病之间的相关性。
农业领域CRISPR技术也被广泛应用于农业领域,特别是在作物改良方面。
利用CRISPR 技术,科学家可以改变农作物的基因组,使其具有耐草害、耐虫害以及提高产量的能力。
此外,CRISPR还可以用于改良食品的口感、保鲜性以及提高其营养价值。
治疗遗传性疾病CRISPR技术在治疗遗传性疾病方面表现出巨大的潜力。
通过编辑患者的基因组,科学家可以矫正有害突变基因,恢复正常基因功能。
基因编辑技术CRISPR
基因编辑技术CRISPR自2012年首次被引入以来,CRISPR基因编辑技术在生物学和医学研究领域引起了广泛的关注。
这种准确、高效、灵活的遗传工具已广泛应用于基因组编辑、基因治疗、疾病预防和农业开发等领域。
本文将简要介绍CRISPR技术的基本原理、应用前景和伦理问题。
一、基本原理CRISPR(簇状间质重复序列)是一种独特的遗传系统,广泛存在于细菌和古菌中。
它由一系列短重复序列和间隔序列组成,可识别外来的DNA分子并将其剪切成小片段,从而保护宿主细胞免受病毒和其他侵入性DNA的感染。
随着科学家对CRISPR机理的深入研究,他们发现CRISPR/Cas蛋白质复合体可以被用于基因组编辑,加快了人类基因技术的发展。
CRISPR基因编辑技术利用“RNA导向的核酸酶”(RNA-guided endonucleases)Cas9或Cas12a的切割能力来实现基因组的精确编辑。
以下是CRISPR技术的主要步骤:1.选择合适的靶标DNA序列,并与CRISPR/Cas蛋白质复合体配对,形成靶向复合体。
2.靶向复合物通过RNA-DNA互补配对,将Cas9 或Cas12a 引导至所选核酸序列的特定位置。
3.一旦Cas9 或Cas12a 在靶向序列上找到了配对的目标,核酸酶就会被激活,开始切割DNA。
4.细胞内的修复系统会尽可能快地尝试修复切割的DNA,以保持其完整性。
此过程中,可以插入、修复或删改DNA 序列。
二、应用前景CRISPR技术的广泛应用前景已经引起了全球生物科技领域的兴趣。
以下是一些这种技术的应用:1. 医学研究:基因组编辑可用于疾病诊断、疾病治疗和药物试验。
例如,科学家们已利用CRISPR技术,成功在猪和人类胚胎上实现了一种名为“囊胚体外培养”的技术,创造了更好的移植器官来源。
2. 农业领域:CRISPR技术可以用于提高农作物的产量、改善品质和抵抗性,以实现可持续农业。
3. 环境保护:利用CRISPR技术可以塑造生物多样性、保护濒危物种。
简述crisper的技术原理与应用
简述crisper的技术原理与应用什么是crisper?CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种新型的基因编辑技术,被广泛应用于生物学和医学研究领域。
CRISPR技术利用CRISPR-Cas系统中的Cas蛋白和CRISPR RNA来定向修改生物体的基因组序列,具有高效、精准和简单操作的特点。
CRISPR的技术原理CRISPR技术的核心原理包括CRISPR RNA的导向和Cas蛋白的剪切。
1. CRISPR RNA的导向CRISPR RNA是由一小段常规RNA(tracrRNA)和一小段可变RNA(crRNA)通过互补配对而组成的。
crRNA中含有与目标基因组序列互补的序列,可以精准地识别和定位到目标基因组的特定位置。
2. Cas蛋白的剪切Cas蛋白是CRISPR-Cas系统中的核心组分,具有核酸酶活性。
Cas蛋白能够与crRNA形成复合物,并识别与crRNA互补的目标基因组序列。
一旦Cas蛋白与目标基因组序列结合,其核酸酶活性将介导目标基因组序列的切割。
CRISPR的应用CRISPR技术在基因编辑、疾病治疗和农业改良等领域有着广泛的应用前景。
1. 基因编辑CRISPR技术可以精确地修改生物体的基因组序列。
通过设计特定的crRNA和引入Cas蛋白,可以实现对目标基因组的精准编辑,如基因敲除、基因插入、基因修饰等。
这种精准编辑的能力为基因功能研究和疾病治疗提供了有效的工具。
2. 疾病治疗CRISPR技术被广泛应用于治疗遗传性疾病。
通过CRISPR技术可以修复或替换患者体内的异常基因,恢复正常的基因功能。
这为一些无法通过传统治疗手段治愈的疾病提供了新的治疗思路,如遗传性疾病、癌症等。
3. 农业改良CRISPR技术也被用于农业领域的基因改良。
通过定向编辑植物的基因组,可以增加植物的耐逆性、抗病虫害能力和产量。
基因编辑技术CRISPR
基因编辑技术CRISPR基因编辑技术CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是近年来生物科学领域的一项重大突破,它为遗传病治疗、农业改良以及生物研究开辟了新的可能性。
本文将简要介绍CRISPR技术的基本原理、应用领域及其引发的伦理讨论。
CRISPR技术的基本原理CRISPR技术源自于细菌的一种天然免疫机制。
在自然界中,某些细菌能够通过CRISPR系统抵御病毒的侵袭。
科学家发现,CRISPR系统可以编程来识别并切割任何DNA 序列,从而允许精确地修改生物体的基因组。
CRISPR-Cas9是目前应用最广泛的CRISPR系统版本,其中Cas9是一种酶,可以在CRISPR系统的指引下定位到特定的DNA序列,并进行切割。
切割后,细胞会尝试修复这一损伤,科学家可以利用这一过程插入、删除或替换特定基因。
CRISPR技术的应用领域医学研究与治疗CRISPR技术在医学领域的应用前景广阔,包括但不限于遗传病的治疗、癌症研究、传染病防治等。
通过修正致病基因,CRISPR有潜力治愈一些目前无法根治的遗传性疾病。
同时,它也为新药的开发和疾病模型的构建提供了强有力的工具。
农业改良在农业方面,CRISPR技术可以用来培育抗病虫害、耐逆境、高产优质的作物品种。
与传统的转基因技术相比,CRISPR编辑的作物可能不会引入外来DNA,因此在一些国家和地区可能面临较少的监管限制。
基础科学研究CRISPR技术极大地促进了基础生物学研究,使科学家能够更容易地研究基因的功能,揭示生命现象的分子机制。
此外,CRISPR还被用于创建动物模型,帮助研究人员更好地理解人类疾病。
CRISPR技术引发的伦理讨论尽管CRISPR技术带来了巨大的科学进步和潜在益处,但它也引发了一系列伦理问题。
例如,基因编辑可能会被用于非治疗性的增强目的,如提高智力或体能,这可能导致社会不平等。
CRISPR技术:一种改变世界的基因编辑方法
CRISPR技术:一种改变世界的基因编辑方法CRISPR技术是一种能够在细胞内寻找并修改特定DNA片段的方法。
它可以用于研究基因的功能,改造生物的性状,以及治疗遗传性疾病。
CRISPR技术的核心是一种叫做Cas9的酶,它可以根据一段RNA的指引,识别并切割DNA上的目标序列。
通过改变RNA的序列,就可以让Cas9切割不同的DNA。
CRISPR技术在过去十年里取得了很多进展,也出现了很多新的变化和应用。
例如,有些研究人员发现了一种方法,可以让Cas9只切割DNA的一条链,而不是两条。
这样可以减少DNA修复时产生的错误,提高编辑的精确性。
他们还发现了一种方法,可以让两种不同的单链切割酶协同工作,实现双链切割,但是更加特异和安全。
有些研究人员对Cas9进行了改造,让它不再切割DNA,而是与其他的酶结合,对DNA上的化学修饰进行编辑。
这些化学修饰叫做表观基因组,它们可以影响基因的表达,也就是基因是否被激活或者关闭。
通过编辑表观基因组,可以调节细胞的功能和命运。
例如,可以通过增加或者减少DNA上的甲基化或者乙酰化来激活或者抑制基因的转录。
也可以通过将Cas9与能够激活或者抑制转录的蛋白质结合,来调节基因的表达。
有些研究人员开发了一些高保真的Cas9变体,它们可以降低切割DNA时的脱靶率,也就是切割错误的DNA序列的可能性。
这些变体可以提高基因编辑的安全性和效率,也有利于临床应用。
例如,CRISPR Therapeutics和Vertex,以及Intellia公司开发的指导RNA在临床开发过程中均未导致可检测到的脱靶编辑。
有些研究人员发现了除了Cas9以外的其他类型的Cas酶,它们有着不同的特点和优势。
例如,有些Cas酶可以识别不同的目标序列,有些Cas酶可以切割或者编辑RNA,有些Cas酶比Cas9更小更容易递送。
例如,Cas13是一种可以切割或者编辑RNA的酶,它可以用于追踪、修饰和敲低细胞中的RNA。
CRISPR基因编辑技术
CRISPR基因编辑技术CRISPR基因编辑技术(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)是一种在生物学领域中近年来出现的技术,可以用来创造、修改和删除基因序列。
CRISPR技术利用CRISPR-Cas9系统,通过指导剪切酶Cas9与RNA融合,以高精度和低成本地编辑基因。
CRISPR基因编辑技术的快速发展和广泛应用在生物领域中引起了极大的关注。
CRISPR-Cas9系统的原理CRISPR-Cas9系统主要由两部分组成:CRISPR序列和Cas9酶。
CRISPR序列是一段由DNA组成的重复序列,其中间夹杂有一些拷贝的片段,这些片段通常来自细菌或病毒的基因组。
Cas9酶是一种特殊的酶,可以通过与CRISPR序列相互作用,识别到位于目标基因组的特定DNA序列。
CRISPR-Cas9系统的工作原理是先通过CRISPR序列生成一种短RNA片段,称为指导RNA(gRNA)。
这个gRNA同Cas9酶结合形成复合物,该复合物可以识别和结合到目标基因组中的与gRNA序列互补的DNA序列。
一旦Cas9酶与目标DNA序列结合,酶就会剪切这个DNA序列,进而引发细胞自身的修复系统,可以在修复时实现对基因组的修改。
CRISPR基因编辑技术的应用CRISPR基因编辑技术可以在各种生物体中实现对基因组的编辑,因此在生物学研究和治疗上有着广泛的应用。
基因研究CRISPR技术的出现对基因研究有了革命性的影响。
通过CRISPR技术,研究者可以很容易地修改细胞中的特定基因,观察其对生物体的影响。
这种精确定位的基因编辑方法加速了基因功能的研究,有助于理解不同基因在生物体内的作用。
疾病治疗CRISPR基因编辑技术也在疾病治疗中展现出巨大的潜力。
通过精准编辑基因组,可以纠正某些疾病的基因缺陷,甚至是治愈一些遗传性疾病。
CRISPR技术可以用于免疫细胞疗法,通过修改患者自身的T细胞,使其具有更强的抗肿瘤能力。
CRISPR简述
CRISPR简述1、CRISPR 研究历史1987 年,日本课题组Ishino Y等在K12 大肠杆菌的碱性磷酸酶基因附近发现串联间隔重复序列,随后的研究发现这种间隔重复序列广泛存在于细菌和古细菌的基因组中,2002 年,Jansen等将其将其正式命名为clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR).2007 年,Barrangou 等首次发现并证明细菌可能利用CRSPR 系统对抵抗噬菌体入侵.2008 年,Marraffini 等又发现细菌CRISPR 系统能阻止外源质粒的转移。
2013 年初,CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术出现。
2、CRISPR的分布与分类已测序的接近90%的古细菌和40%的细菌的基因组或是质粒中至少存在一个CRISPR 基因座。
根据Cas 基因核心元件序列的不同, CRISPR/Cas 免疫系统被分为3 种类型:Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。
Ⅰ型和Ⅲ型CRISPR/Cas 免疫系统需要多个Cas 蛋白形成复合体切割DNA 双链, 而Ⅱ型CRISPR/Cas 免疫系统只需要一个Cas9 蛋白来切割DNA 双链,目前Ⅱ型系统是被改造的最为成功的人工核酸酶。
3、CRISPR 位点结构CRISPR系统通常包括: 由不连续的重复序列(repeats,R) 与长度相似的间区序列( spacers,S) 间隔排列而成的CRISPR 簇,前导序列( Leader,L) 以及一系列CRISPR 相关蛋白基因(cas) 。
前导区一般是处于CRISPR位点上游由300bp~500bp 碱基组成的一个AT 富集的区域。
这个区域一般来说在种内是比较保守的但在种间却有显著的差异。
重复序列一般由23bp-50bp的碱基组成, 其平均长度在31bp左右。
间区由17bp-84bp 碱基组成平均长度在36bp左右。
4、CRISPR/Cas 作用机制对于CRISPR/Cas 的作用机理可以分为三个阶段来理解,第一是CRISPR 的高度可变的间隔区的获得,第二是CRIPSR 基因座的表达(包括转录和转录后的成熟加工),第三是CRISPR/Cas 系统活性的发挥或者是对外源遗传物质的干扰。
基因编辑技术CRISPR
基因编辑技术CRISPR在21世纪的科学舞台上,一个名为CRISPR的基因编辑技术如同一颗耀眼的新星迅速升起,它不仅为生物学研究带来了革命性的突破,更在医学、农业等领域展现出广泛的应用潜力。
本文旨在深入探讨CRISPR技术的原理、发展及其对未来的影响。
CRISPR技术的基本原理CRISPR,全称为“Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats”,即规律成簇的短回文重复序列,是一种源自细菌的自然防御系统。
科学家们发现,通过改造这一系统,可以精确地定位并编辑生物体内的特定基因序列。
CRISPR系统的核心是指导RNA(gRNA)和Cas蛋白。
gRNA能够识别目标DNA序列并与之结合,而Cas蛋白则负责切割DNA。
一旦目标DNA被切割,细胞会试图修复这一损伤,但在修复过程中可能会引入错误,从而实现对基因的编辑。
CRISPR技术的发展与应用自2012年首次应用于哺乳动物细胞以来,CRISPR技术经历了飞速的发展。
它不仅简化了基因编辑的流程,降低了成本,还提高了编辑的准确性和效率。
在医学领域,CRISPR技术被用于研究遗传疾病的治疗,如通过编辑致病基因来治疗某些类型的遗传性失明和血液疾病。
此外,它还在癌症治疗、免疫疗法等方面展现出巨大潜力。
在农业方面,通过CRISPR技术改良作物,可以提高作物的抗病性和产量,同时减少农药的使用,对环境保护也大有裨益。
CRISPR技术的挑战与未来尽管CRISPR技术充满希望,但它也面临着伦理和安全上的挑战。
如何确保技术的安全性、避免滥用以及如何处理由此引发的社会伦理问题,都是亟待解决的难题。
未来,随着研究的深入和技术的完善,CRISPR有望在更多领域发挥其独特的优势。
同时,全球科学家和政策制定者需要共同努力,建立相应的规范和监管机制,确保这项技术的健康和可持续发展。
结语CRISPR技术作为一种革命性的基因编辑工具,正引领着生命科学进入一个全新的时代。
CRISPR技术概述
CRISPR技术概述近年来,基因编辑技术成为科学研究和医学应用的热门话题。
其中,一项被誉为“基因剪刀”的CRISPR技术引起了广泛关注。
CRISPR作为一项新兴技术,究竟是什么,有哪些应用?本文将简要介绍CRISPR技术的基本原理、应用和前景。
一、CRISPR的概念CRISPR是簇间重复序列和间隔序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)的缩写。
CRISPR/ Cas9技术是一种高效、简单、快速地剪切或修改DNA序列的工具,被视为目前基因编辑领域中最有潜力的技术之一。
CRISPR系统最初是从细菌中发现的。
细菌通过这种系统辨别、切除和保护其自身免受病毒等外源性DNA攻击。
CRISPR系统主要由两部分组成:CRISPR和Cas (CRISPR Associated protein)。
其中,CRISPR是一种短小的DNA序列,类似于细菌的免疫记忆系统,记录之前感染过的病毒序列。
Cas则是CRISPR蛋白酶复合物,能够识别和切割这些外来DNA序列。
二、CRISPR技术的原理CRISPR技术是一种基于RNA导引的基因编辑技术,其原理基于Cas9蛋白的切割功能。
Cas9蛋白在浓缩的RNA靶向分子的作用下,可精确切割DNA,从而进行基因编辑。
利用CRISPR/Cas9技术,DNA可以被准确地分为三个部分。
第一部分是PAM序列,即Cas9靶向的酶切位置。
第二部分是RNA导向序列,即能够与目标DNA序列配对的RNA分子。
最后一个部分是天然的DNA骨架。
当靶向分子与目标DNA序列配对时,Cas9蛋白质可以精确地切割DNA链。
三、CRISPR技术的应用CRISPR技术已经成为基因编辑领域前沿的重要工具之一,可用于治疗各种不同类型的疾病,如癌症、遗传性疾病、心血管疾病等。
下面将介绍CRISPR技术的几个应用实例。
1.基因疗法利用CRISPR技术,科学家可以更准确地定位需要编辑的DNA,并删除或添加特定基因。
crispr的原理及应用
CRISPR的原理及应用1. 什么是CRISPR?CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种新兴的基因编辑技术,被广泛应用于生物学研究、医学治疗和农作物改良等领域。
它是一种天然存在于细菌和古菌中的免疫系统。
2. CRISPR的原理CRISPR的原理是通过使用Cas9酶与一段特定的RNA序列(称为guide RNA)结合,将Cas9酶引导到需要编辑的DNA序列上,并切割DNA,进而实现基因的添加、删除或修复。
3. CRISPR的应用CRISPR技术的应用非常广泛,包括但不限于以下几个方面:3.1 基因编辑CRISPR技术可以用来编辑人类、动物和植物等生物的基因,以实现基因的添加、删除或修复。
这一技术在疾病治疗和农作物改良方面具有巨大的潜力。
•基因添加:CRISPR可以将具有特定功能的基因导入细胞中,以纠正或增强某些遗传缺陷。
•基因删除:CRISPR可以选择性地切除特定的基因序列,以观察其对生物体的功能影响,或治疗某些遗传疾病。
•基因修复:CRISPR可以修复存在突变的基因序列,从而恢复其正常功能。
3.2 疾病治疗CRISPR技术在疾病治疗方面也具有巨大的潜力。
通过编辑人类基因,可以纠正某些遗传性疾病的基因缺陷,并为患者带来治愈的机会。
一些研究甚至尝试使用CRISPR技术来治疗癌症和艾滋病等疾病。
3.3 农作物改良CRISPR技术在农作物改良方面也被广泛应用。
借助CRISPR技术,科学家们可以针对农作物中的特定基因序列进行编辑,以改善农作物的耐荒性、抗病性、产量和品质等重要性状。
这一技术可以帮助解决粮食安全和农业可持续发展等全球性问题。
3.4 生物学研究CRISPR技术在生物学研究中也扮演了重要角色。
科学家们利用CRISPR技术,可以精确地研究基因功能、基因调控和细胞组织发育等生物学过程。
此外,CRISPR还被用于开展疾病模型的研究,以及探索人类基因组的功能和变异等。
基因编辑技术CRISPR介绍
基因编辑技术CRISPR介绍基因编辑技术是一种革命性的生物技术,可以精准地修改生物体的基因组,对于基因疾病的治疗、农业育种、生物学研究等领域具有重要意义。
其中,CRISPR-Cas9系统作为一种高效、简便且精准的基因编辑工具,受到了广泛关注和应用。
本文将介绍基因编辑技术CRISPR的原理、应用和未来发展方向。
一、CRISPR的原理CRISPR是Clustered Regularly Interspaced ShortPalindromic Repeats的缩写,即“簇状规律间隔短回文重复序列”。
CRISPR-Cas9系统是一种天然存在于细菌和古细菌中的免疫系统,用于抵御病毒侵袭。
通过对CRISPR-Cas9系统的改造和利用,科学家们成功将其应用于基因编辑领域。
CRISPR-Cas9系统主要由两部分组成:CRISPR RNA(crRNA)和Cas9蛋白。
crRNA是一种短RNA序列,可以与目标基因的特定序列互补配对,指导Cas9蛋白精准地切割DNA链。
Cas9蛋白则具有内切酶活性,能够在目标基因的特定位置引发双链断裂。
在细胞修复过程中,可以通过非同源末端连接或同源重组等机制实现基因组的修复和编辑。
二、CRISPR的应用1. 基因治疗:CRISPR技术可以用于治疗遗传疾病,例如囊性纤维化、遗传性失明等。
科学家们可以通过CRISPR-Cas9系统修复患者基因组中的突变位点,恢复正常基因功能,从而治愈疾病。
2. 农业育种:CRISPR技术可以用于改良作物品种,提高作物的产量、抗病性和适应性。
通过精准编辑作物基因组中的关键基因,可以培育出更具优势的农作物品种,为粮食生产提供新的途径。
3. 生物学研究:CRISPR技术在生物学研究中有着广泛的应用。
科学家们可以利用CRISPR-Cas9系统对细胞中的特定基因进行靶向编辑,研究基因在生物体内的功能和调控机制,探索生命的奥秘。
三、CRISPR的未来发展方向随着基因编辑技术的不断发展,CRISPR在未来有着广阔的应用前景。
生物学中的基因编辑技术CRISPR
生物学中的基因编辑技术CRISPR 世界各地都在对基因编辑技术CRISPR的研究进行探索。
CRISPR是Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats 的缩写,中文称为随机间隔短回文重复序列聚类,是一种可以编辑生物体基因的技术。
该技术的发明已经带来了生物学与医学方面的巨大进展,甚至还有可能改变我们未来的生活。
CRISPR技术的基本原理是通过分子切割酶Cas9来改变生物体的基因组。
在这个过程中,CRISPR作为一种导航系统,可以告诉Cas9到哪个基因位置进行切割。
这项技术最初是由Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier 合作发明的。
他们的研究表明,利用CRISPR-Cas9可以进行非常准确的DNA切割,所以可以对人类基因进行编辑。
与传统的基因编辑技术相比,CRISPR技术的优点在于速度更快、价格更低、精度更高。
它可以被运用在几乎所有生物体上,例如微生物、植物、动物和人类等。
CRISPR技术具备许多应用范围,例如能治疗遗传性疾病,如囊性纤维性病和狐臭等。
据一些报告,CRISPR还可以被用于改变农产品的产量和生命周期,以及推动环境保护事业。
当然,这项技术还远远没有到达可以轻易地改变全球环境生态系统的程度。
但是,CRISPR技术也面临着许多问题。
首先,它仅能治疗单基因疾病,所以并没有对于那些存在多个基因和外在环境因素影响的疾病提供有效的治疗方法。
另外,CRISPR技术可能会错误地编辑基因。
若出现编辑错误,可能会导致不良影响,从而影响到生物体的生长和健康。
因此,CRISPR必须经过充分测试才可以应用于临床实践中。
此外,还需要研究CRISPR技术在伦理和权利方面的问题,例如将改变世代的基因编辑应用于人类,社会公众是否可以接受这种操控行为。
尽管CRISPR技术还面临许多未知的风险和难题,但它的潜力和应用前景是不可否认的。
基因编辑技术CRISPR
基因编辑技术CRISPR1. 简介基因编辑技术CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种革命性的基因工程技术,可以精确地修改生物体的基因组。
CRISPR技术的出现引起了科学界的广泛关注和研究,被认为是改变人类生活和医学领域的重要突破。
2. CRISPR的原理CRISPR技术利用了细菌天然免疫系统中的一种防御机制。
细菌通过记录并保存入侵病毒的DNA片段,形成CRISPR序列,并与Cas蛋白复合体一起工作,识别并剪切外来DNA。
科学家们发现,通过改变Cas 蛋白复合体中的一种酶(Cas9),可以使其具有特异性地识别和剪切任意DNA序列的能力。
3. CRISPR在基因治疗中的应用3.1 基因修复CRISPR技术可以用于修复患者体内存在的基因突变。
通过将CRISPR系统导入患者体内,科学家们可以将正常的基因序列引入到患者细胞中,从而修复基因突变导致的疾病。
3.2 基因靶向治疗CRISPR技术还可以用于基因靶向治疗。
科学家们可以利用CRISPR系统将特定的基因序列靶向剪切,从而抑制或激活该基因的表达。
这种方法可以用于治疗一些遗传性疾病,如癌症、血液病等。
3.3 肿瘤免疫治疗CRISPR技术在肿瘤免疫治疗中也有广泛应用。
科学家们可以利用CRISPR系统改造患者的免疫细胞,使其具有更强的抗肿瘤能力。
这种方法被认为是一种有望改善肿瘤治疗效果的新策略。
4. CRISPR的挑战和争议虽然CRISPR技术具有巨大的潜力,但也面临着一些挑战和争议。
首先,CRISPR技术在精确性和安全性方面仍存在一定的问题。
由于CRISPR系统对DNA序列的识别是依赖于引导RNA的碱基配对,因此存在着误识别和剪切非目标DNA的风险。
此外,CRISPR技术在剪切DNA后的修复过程中也可能引发不可预测的基因组变异。
其次,CRISPR技术的应用涉及到伦理和道德问题。
基因编辑技术CRISPR全解析
基因编辑技术CRISPR全解析CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种原始的免疫系统,在原核生物中起到防御病毒和产生抗体的作用。
CRISPR基因编辑技术是一种最新的基因编辑技术,通过重新设计CRISPR-Cas系统,就可以将其应用到真核生物的基因编辑中。
本文将全面解析CRISPR基因编辑技术的相关概念、原理、应用和前景。
一、CRISPR基因编辑技术的原理CRISPR基因编辑技术的原理是通过CRISPR-Cas系统来定位和切断DNA的特定位置,并在切断后改写DNA序列。
这种技术可以帮助人类修复有缺陷的基因、治疗基因突变引起的疾病,也可以开发新的药物、农作物和环境解决方案。
CRISPR-Cas系统是由一个具有DNA切割功能的核酸酶Cas和一个指导RNA组成的,其中指导RNA上有一个20个核苷酸的相应序列,与目标DNA配对。
这种软件-硬件结合对基因编辑带来了全新的思路。
二、CRISPR基因编辑技术的应用基因治疗是CRISPR技术的重要应用方向。
这种治疗方案可以使人们在前往医院之前就可以通过DNA编辑解决其遗传基因上出现的问题。
例如,人类基因组计划(Human Genome Project)已经开创了一种基因测序的新时代,那么CRISPR就可以使科学家们更深入的理解基因功能的奥秘,解决人类遗传疾病,现在,一系列针对基因缺陷的修补或替换技术已经在研究和临床应用中取得了很好的结果。
此外,CRISPR还可以广泛应用于农业生产和环境保护。
CRISPR可用于提高农作物的产量、抗病性和耐盐性,同时,同时,CRISPR还可以开发出更高效、更节约能源的生物燃料和解除化学物质污染的生物法。
三、CRISPR基因编辑技术的前景基因编辑技术的应用前景非常广泛。
未来,CRISPR基因编辑技术有望创造出许多新的生物材料,包括完全可生物降解的塑料、超级纤维和基于基因编辑的负氢离子发射器们等等。
crispr原理
crispr原理
CRISPR是一种基因编辑技术,其原理是利用一种细菌天然存在的免疫系统,通过编辑DNA序列来修改目标基因。
CRISPR系统包括CRISPR RNA (crRNA)和Cas蛋白。
CRISPR RNA是一段与目标DNA序列互补的RNA,它可以导向Cas 蛋白在目标DNA上切割。
Cas蛋白具有核酸酶活性,可以通过与crRNA的匹配来识别并切割目标DNA。
当目标DNA被切割后,细胞的自我修复机制会介入,并使用一个外源的DNA模板进行修复。
通过提供一个特定的DNA模板,可以在修复过程中插入、删除或更改特定区域的DNA序列,从而实现基因编辑。
使用CRISPR进行基因编辑的关键步骤包括:
1. 设计和合成目标基因的crRNA,使其能够与目标DNA序列互补。
2. 将crRNA与Cas蛋白结合,形成CRISPR复合物。
3. 将CRISPR复合物导入到目标细胞中。
4. CRISPR复合物与目标DNA序列结合,并对其进行切割。
5. 细胞使用外源的DNA模板进行修复,从而实现基因编辑。
CRISPR技术的原理简单而高效,使其成为一种被广泛应用于基因研究和基因治疗的工具。
它可以用于研究基因功能、疾病模型的构建、农业改良等领域。
然而,基因编辑技术也面临着伦理和法律等一系列的问题和挑战,需要谨慎应用和监管。
CRISPR基因编辑技术的潜力及应用展望
CRISPR基因编辑技术的潜力及应用展望随着基因编辑技术的不断发展,人类有望真正实现“按需设计”生物体的梦想。
其中最被看好的技术之一,便是CRISPR基因编辑技术。
近年来,这一技术在科技界引起了广泛的关注和讨论。
本文将就CRISPR基因编辑技术展开潜力及应用的展望。
一. CRISPR基因编辑技术的简介CRISPR,全称为“Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats”(簇状规律间隔短回文重复序列),是一种原本存在于细菌中的免疫机制。
通过这种机制,细菌将一些外来的DNA碎片记录下来,并将其归类储存。
如果再次遭遇这些DNA碎片,细菌通过相应的酶来剪切它们以抵御外来病毒的入侵。
基于CRISPR机制的基因编辑技术,则是通过改变特定基因序列的金属结构,以实现精准编辑。
“CRISPR-Cas9”是应用最广泛的工具。
Cas9酶会在被引入待编辑细胞后,依靠特定的RNA序列,将目标DNA序列切断开来。
然后,通过非同源末端联合酶(NHEJ)或同源重组机制(HDR),修复或替换需要修改的基因序列。
当前,CRISPR基因编辑技术已经广泛应用在分子生物学、生物工程、医学等众多领域中。
其中,医学领域的应用前景最为广阔。
二. CRISPR基因编辑技术在医学领域的应用基因治疗是医学领域中一个备受瞩目的课题,它将会彻底改变人类疾病的治疗方式。
目前,CRISPR基因编辑技术被广泛看好,被认为是实现基因治疗的最有前途的技术之一。
1. 治疗遗传性疾病基因编辑技术可用于治疗长期困扰人类的遗传性疾病。
例如,红细胞生成障碍性贫血症(β-珠蛋白病)就是一种常见遗传性疾病。
目前,科学家已经利用CRISPR技术,成功修复了β-珠蛋白病患者的基因表达。
同时,夫妻双方均携带致病的基因,并在细胞外修改了后代基因中的不受欢迎变异,为基因治疗带来了更多的可能性。
2. 癌症治疗在癌症治疗方面,CRISPR技术也具有潜力。
CRISPR操作系统(原理)
CRISPR操作系统(原理)CRISPR操作系统(原理)1、简介CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)操作系统是一种基于CRISPR-Cas9技术的基因编辑系统。
该系统利用CRISPR的特殊序列和Cas9蛋白质,能够实现精准的基因编辑和调控。
2、基本原理2.1 CRISPR序列CRISPR序列是一类特殊的DNA序列,由一系列短重复序列和间隔序列组成。
这些短重复序列与细菌或古细菌基因组中的保守序列相对应,被认为是细菌或古细菌对外源DNA进行免疫的一种遗传记忆。
2.2 Cas9蛋白质Cas9蛋白质是CRISPR系统中的一个关键组分,它具有DNA内切酶活性。
Cas9蛋白质能够与CRISPR序列中的RNA分子结合,形成活性的RNA-蛋白复合体(RNP复合体)。
该复合体能够识别和结合到与CRISPR序列相对应的DNA序列,并在特定的位置引发DNA双链断裂。
3、CRISPR操作系统的操作步骤3.1 设计CRISPR RNA首先,根据目标基因的序列设计合适的CRISPR RNA。
CRISPR RNA需要具有足够的亲和力与目标DNA序列结合,以实现精准的基因编辑。
3.2 制备Cas9蛋白质Cas9蛋白质可以通过表达Cas9基因并经过适当的表达与纯化步骤来制备。
已经有多种方法可以高效地制备Cas9蛋白质。
3.3 形成RNP复合体将制备好的Cas9蛋白质与设计好的CRISPR RNA结合,形成活性的RNP复合体。
这个复合体将用于识别和结合目标DNA序列。
3.4 促使DNA双链断裂将形成的RNP复合体引入目标细胞,并通过合适的转染或转化方法将复合体导入细胞内。
一旦RNP复合体与目标DNA序列结合,Cas9蛋白质将引发DNA双链断裂,触发细胞的DNA修复机制。
3.5 基因编辑和调控细胞的DNA修复机制可以通过两种方式实现目标基因的编辑和调控:非同源末端连接(Non-Homologous End Joining,NHEJ)和同源重组(Homology-Directed Repr,HDR)。
CRISPR技术在微生物基因组编辑中的应用
CRISPR技术在微生物基因组编辑中的应用随着现代技术的发展,基因组编辑研究已成为一项备受关注的研究领域。
CRISPR技术作为一种新兴的基因组编辑技术,在该领域获得了广泛的应用。
其中,CRISPR技术在微生物基因组编辑中的应用也备受研究人员的关注。
本文将结合相关实践案例,详细介绍CRISPR技术在微生物基因组编辑中的应用及其研究现状。
第一部分:CRISPR技术简介目前基因组编辑的主要方法有多种,如 Zinc Finger Nuclease (ZFN) 技术、Transcription Activator-Like Effector Nuclease (TALEN) 技术、Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/CRISPR-associated protein systems (Cas) 技术等。
其中,CRISPR技术是最为常用和具有发展前景的技术之一。
CRISPR 是 Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats 的缩写,它是一种基于细菌天然的抗病毒防御机制的技术。
CRISPR/Cas是一种RNA-蛋白质复合物,可识别基因组中的特定 DNA 序列,并在此处切割 DNA 分子。
基于这种机制,可以将一段带有特定编码的 RNA 导入目标基因组中,通过攻击基因组中的特定序列实现基因编辑。
第二部分:微生物基因组编辑技术的兴起,使得微生物工程获得了空前的发展和应用。
下面就详细介绍CRISPR在微生物基因组编辑中的应用案例。
案例一:利用CRISPR技术提高细胞素产量在微生物工程中,聚糖和葡聚糖等二糖类化合物具有极高的应用价值。
其中,纤维素酶可以降解纤维素为可用于发酵的乳糖,普遍应用于二糖类化合物制备。
因此提高纤维素酶的产量成为了一项重要的研究任务。
crispr原理
crispr原理CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一种基因编辑技术,它可以在DNA序列中精确地定位并修改特定基因。
CRISPR技术的原理是基于细菌的天然免疫系统,通过利用CRISPR-Cas9蛋白复合物,可以实现对基因组的精准编辑,包括基因的修饰、插入和删除。
这项技术的出现,为基因治疗、农业改良和生物学研究等领域带来了革命性的变革。
CRISPR技术的原理可以简单概括为三个主要步骤,识别、切割和修复。
首先,CRISPR-Cas9系统通过RNA引导,能够精准识别并结合到目标DNA序列上。
一旦与目标DNA结合,Cas9蛋白就会切割DNA,导致双链断裂。
随后,细胞会启动自身的修复机制,通过非同源末端连接或同源重组等方式修复DNA,从而实现对目标基因的修改。
CRISPR技术的高效性和精准性使其成为当今最为流行的基因编辑工具之一。
相比传统的基因编辑技术,CRISPR技术具有操作简便、成本低廉和高效率的优势。
基于CRISPR技术的基因编辑可以广泛应用于不同生物体系,包括细菌、植物和动物细胞,为科学家们提供了更多的可能性和灵活性。
除了在基础科学研究中的应用,CRISPR技术还在医学领域展现出巨大的潜力。
例如,科学家们可以利用CRISPR技术对人类基因进行精准修复,从而治疗一些遗传性疾病。
此外,CRISPR技术还可以用于癌症治疗、器官移植和免疫疗法等领域,为医学研究和临床治疗带来了新的希望。
在农业领域,CRISPR技术也被广泛应用于作物改良和畜禽养殖。
通过对农作物和家畜基因的精准编辑,科学家们可以培育出更加耐旱、抗病或者产量更高的新品种,从而提高农业生产效率,减少对化学农药和抗生素的依赖,为粮食安全和可持续发展做出贡献。
总的来说,CRISPR技术的原理是基于细菌的天然免疫系统,利用CRISPR-Cas9蛋白复合物实现对基因组的精准编辑。
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自私基因元件(Selfish genetic element)对于原核生物(prokaryote)可不一定是一无是处的。
我们都知道病毒可以通过重编程宿主细胞(reprogramming host cell)的方式进行大量复制,也可以像“偷渡客”一样整合到宿主细胞的基因组里潜伏起来伺机作乱;可接合质粒(conjugative plasmid,又称作转移性染色质外DNA)可以赋予宿主细胞新的优势特性,比如获得某种抗毒素因子,这样细胞就会像吸毒上瘾一样不愿意丢失这些质粒,还有很多这类外来DNA赖在细菌等细胞中不走的事例这里就不一一介绍了。
不过细菌(bacteria)和古细菌(archaea)都有一套防御机制抵御这种外来的侵入性因子,这种防御机制就是在成簇的、有规律间隔的多次重复短片段(clustered regularly interspaced short palindromic repeat, CRISPR)的基础上建立起来的适应性免疫系统(adaptive immune system)。
Jinek等人最新的研究成果发现,细菌细胞里的CRISPR效应酶蛋白Cas9因子不是通过一个RNA,而是一对小RNA分子来清除入侵的外源DNA片段。
CRISPR系统能够将各种外源的病毒或质粒DNA短片段“集中”到细胞基因组里某个特定的重复片段区域上,将这些外源DNA当作细胞曾经经受过外源DNA入侵的一种记忆给储存起来。
然后这段DNA会转录生成CRISPR前体RNA(precursor CRISPR RNA),前体RNA生成之后会被切割成一段一段的重复RNA片段,这些小RNA分子就是成熟的CRISPR RNA(crRNA)。
然后crRNA会招募CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins, Cas)与各种被细胞记住的外源的入侵DNA或mRNA片段结合,将它们彻底摧毁。
科学家们是在大约5年前才开始了解到CRISPR的,当时他们发现如果将某种病毒的DNA片段掺入细菌之中,细菌就会对随后再次感染的同种病毒产生极高的免疫力。
细菌就是从之前入侵的病毒DNA片段那里认识了这种病毒,从而获得了免疫力,当病毒再次入侵的时候细菌编码的Cas9因子就可以发挥作用,消灭来犯的病毒。
但是当时还不清楚这种Cas9因子的具体作用机制。
科学家们首先需要解决的问题就是搞清楚Cas9因子是如何获得成熟的crRNA 的。
在大部分CRISPR-Cas系统里都少不了这样一位主角,那就是将CRISPR 前体RNA切割成一小段一小段小RNA分子的专一性核酶(nuclease)。
除了成熟的crRNA之外,这些Cas9因子还需要另外一种CRISPR特异性的小RNA(CRISPR-specific small RNA)的帮助,我们把这种小RNA称作反式激活的crRNA(tracrRNA),因为这种小RNA刚好与crRNA的小片段互补,同时它们还是RNA特异性的宿主核糖核酸酶RNase III的底物。
经过RNase III的切割之后,这一对互补的RNA(其中包括一条42bp的crRNA和一条75bp的tracrRNA)就可以充当Cas9因子的向导,帮助它“打鬼子”了。
Jinek等人就在此基础之上继续进行了更深入的研究,他们发现化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)编码的Cas9蛋白也能够与细菌熟悉的入侵DNA结合,并将其降解。
虽然我们知道切割位点只能由crRNA决定,但是科学家们却惊奇地发现,Cas9蛋白与目标DNA结合以及切割的过程还必须有tracrRNA 分子的参与。
也就是说,tracrRNA分子能够帮助Cas9-crRNA复合体在细胞复杂的DNA环境中精准地定位到入侵的DNA序列上,如附图所示。
这也进一步说明小RNA分子的确是细胞里不可或缺的一份子。
瑞士军刀样的多功能蛋白。
(A)Cas9蛋白需要crRNA和tracrRNA的共同帮助才能识别入侵的外来DNA分子,与之结合并将其降解。
因为crRNA中的向导链部分可以与外源DNA的一条链互补并结合形成R环结构。
在被识别区域两端的DNA基序也起到了非常重要的作用,它们可以帮助DNA链结旋打开双链,有利于crRNA链侵入。
然后靶标DNA会在Cas9蛋白两个核酶结构域的作用下被切断。
(B)级联反应复合体里含有一个crRNA,可是却最多携带了5种不同的Cas蛋白。
所以它能够持续不断地招募核酶和解旋酶Cas3蛋白,不停歇地将入侵的外源DNA打开并切断。
Cas9蛋白能够凭借分子内的两个核酸酶结构域切割靶标DNA分子,形成平末端产物,其中每一个结构域负责切割靶标DNA分子R环状(R-loop)结构中的一条DNA链,具体来说,就是一个HNH核酶结构域负责切割与crRNA 互补配对的那一条DNA链,RuvC核酶结构域负责切割另外一条DNA链。
Jinek等人发现这种切割的效率非常高,而且不论靶标DNA分子是松弛型的,还是紧密的超螺旋型的都可以被毫不费力地被切割开,说明Cas9蛋白在细胞里是循环使用的,这样能保证在第一时间将所有来犯的入侵者全都消灭掉。
这种防卫机制虽然很有效率,但它也存在致命的阿喀琉斯之踵。
比如病毒就可以通过突变的方式轻易地突破这道防线。
Jinek等人在对这种突变DNA分子进行研究的时候发现Cas9蛋白对突变DNA的结合能力和切割能力都会大打折扣,这说明病毒完全能够应付细菌这套免疫机制,也说明细菌需要重新修正记忆内容才能够面对新一轮攻击。
魔高一尺道高一丈,千百年来细菌与其寄生者之间就在不断地重复这套攻守流程,最后大家共同进化。
Jinek等人还敏锐地意识到这种高度特异性的由RNA介导的DNA核酶刚好可以被我们用来对基因组进行特异性的改造。
从理论上来说,只需要一段20bp 的crRNA做向导,核酶就可以在真核生物基因组的任意位置进行特异性切割。
为了验证这个想法Jinek等人使用一个携带了绿色荧光蛋白GFP编码基因的质粒进行了实验。
他们根据某个位点设计了一套crRNA和tracrRNA,结果Cas9蛋白就在预定位点准确地完成了切割任务。
DNA断裂之后还激活了细胞内的DNA断裂修复机制,科学家们利用这种反应就可以对细胞内的某个基因进行破坏、插入或者修复等操作了。
使用Cas9蛋白和crRNA在DNA上引入特异性断裂这样一套技术对我们现有的锌指核酶技术(zinc finger nucleases)和转录激活效应因子样核酶技术(transcription activator–like effector nucleases)等基因靶向操作技术(gene-targeting technologies)是一个很好的补充和完善,因为这些现有技术都需要针对每一个靶点重新设计核酶。
有了这种基因改造和修复技术我们就可以对患者的病变细胞进行修复,然后再将修复好的细胞重新回输到患者体内,这样就可以对多种遗传缺陷疾病进行很好的治疗了。
和CRISPR系统里的其它效应分子相比,Cas9蛋白明显要重要得多,它是一个单一的、具有多种酶活性的蛋白,分子量通常介于350kD至450kD之间,最多的时候可以由11个亚基组成,编码Cas9蛋白的基因也有4至7个之多。
可是这么庞大的一个蛋白却只有在结合了靶标DNA之后才会再招募其它亚基,使Cas9蛋白具有核酶活性。
也就是说,Cas9蛋白就好像一把瑞士军刀一样,有很多的组成部件,所以也有众多的功能,CRISPR系统正因为有了这个多面手才能不惧任何外来的威胁。
原文检索:Stan J. J. Brouns. (2012) A Swiss Army Knife of Immunity. Science, 337:808-809. YORK/编译名词解释:CRISPR/Cas (CRISPR associated systems):CRISPR/Cas系统(CRISPR相关系统),CRISPR(clustered regulatory interspaced short palindromic repeat)即成簇的、规律间隔的短回文重复序列,是基因组中一个含有多个短重复序列的位点,这种位点在细菌和古细菌(archaea)胞内起到了一种获得性免疫(acquired immunity)的作用。
CRISPR系统主要依赖crRNA和tracrRNA来对外源DNA进行序列特异性降解。
目前已经发现了3种CRISPR/Cas系统,其中在2型系统(type II systems)中依赖的是Cas9蛋白。
在RNA的介导下,Cas9蛋白能够对crRNA–tracrRNA识别的靶序列进行切割。
crRNA:CRISPR RNA能够与tracrRNA配对,形成双链RNA结构,这种双链RNA分子能够介导Cas9核酸内切酶对与双链RNA分子互补结合的DNA序列进行切割。
DSB:ZFN、TALEN以及CRISPR/Cas9系统对DNA双链进行切割之后就会形成DNA双链断裂缺口(double-strand breaks),即DSB。
tracrRNA:反式激活嵌合RNA(trans-activating chimeric RNA),这是一种非编码RNA,能够促进crRNA的形成,也是Cas9蛋白发挥RNA介导的DNA切割作用必不可少的辅助因子。
噬菌体或是质粒上与间隔序列对应的序列被称为protospacer。
通常protospacer的5‘或是3’端延伸几个碱基序列很保守,被称为PAM (protospacer adjacent motifs),它的长度一般为2-5碱基,一般与protospacer相隔1- 4碱基。
Cas家族Cas(CRISPR associated):存在于CRISPR位点附近,是一种双链DNA核酸酶,能在guide RNA引导下对靶位点进行切割。
它与folk酶功能类似,但是它并不需要形成二聚体才能发挥作用。
Cas9蛋白包含两个功能结构域,一个在N端,有类似于Ruc核酸酶的活性,一个在中部有类似HNH核酸酶的活性仅仅由向导RNA分子和Cas9蛋白组成的CRISPR系统就可以对基因组中特定的DNA序列进行外科手术式的精细改造,在特定的位置敲除、或者插入基因。
最近还有人发现,对Cas9蛋白进行修饰之后还可以对特定的基因进行抑制(如左下图所示)或者激活(如右下图所示)操作。
基因组编辑采用人工核酸结合源性修复机制来改变细胞内的DNA。
CRISPR/Cas 系统充分利用了短gRNA的优势来靶向细菌Cas9核酸内切酶、定位遗传位点。
由于gRNA能够提供特异性,更改靶标时,仅需要更改gRNA序列编码的设计。
基因编辑中所用的CRISPR/Cas系统包含三种组分:Cas核酸Cas9(双链DNA 核酸内切酶)、一种靶向补充物crRNA以及一种辅助反式激活因子tracrRNA(图1)。