梅花花粉量及离体萌发特性研究
花粉生活力测定方法研究进展
花粉生活力测定方法研究进展摘要：总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词：花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体，在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象，也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中，研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难，为解决这一难题，保存花粉的活力成为重要手段，而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此，掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果，花粉生活力的检测方法可以分为四大类：①染色法；②萌发测定法；③田间授粉检测法；④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法1.1TTC染色法TTC即2,3,5-氯代三苯基四氮唑，它是一种氧化还原染料，水溶液无色。
基本原理是[1]：当TTC渗入细胞后，遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子，由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物，由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤：①配制PH为7.17的磷酸缓冲液。
称取0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于100ml的蒸馏水中，调整pH为7.17。
②TTC溶液配制。
依据不同植物称取0.02～1.0g的TTC溶于100ml的磷酸缓冲液中，于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上，加上一滴TTC溶液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，然后放置于35℃的恒温箱中染色15～20min。
④镜检。
于10×10倍镜下观察，凡具有活力的花粉被染成红色，部分丧失活力的呈现粉红色，无色的是的或不育的花粉粒。
凌春英,肖恩等的研究[2]得出常温、黑暗条件下用TTC染色12h可达到较好的观察效果，并认为TTC法是大花蕙兰和墨兰花粉活力测定便捷、有效的方法。
兰科植物花粉离体萌发与贮藏研究进展
测定法和授粉结实测定法等ꎮ 因花粉离体萌发测定法
交是兰科植物育种的重要手段ꎬ 但自交不育、 杂交不
易于识别、 数据可靠ꎬ 且可完全定量ꎬ 在植物花粉生
亲和及花期不遇等现象在兰科植物中普遍存在ꎮ 为了
活力的检测中应用十分普遍ꎮ 近年来ꎬ 对兰科植物花
提高人工授粉的亲和性ꎬ 解决不同种质间花期不遇等
粉生活力与贮藏的研究取得了一定的进展ꎬ 本文对兰
－１
除植物本身的遗传特性外ꎬ 花粉采集时机会影响
花粉的离体萌发效果ꎮ 研究表明ꎬ 长瓣兜兰
[２]
从盛开
前的花苞期时花粉就有一定的活性ꎬ 至盛花期时花粉
活力最强ꎻ 束花石斛 [１２] 盛花 １ ~ ３ｄ 花 粉 活 力 保 持 在
子渗透剂 ＰＥＧ [３] 等也能促进兰科植物花粉的离体萌
发ꎮ
１ ３ 培养条件
１ ４ ２０２３ꎬＶｏｌ ４３ꎬＮｏ １７
农业与技术 ※农业科学
兰科植物花粉离体萌发与贮藏研究进展
罗远华１ꎬ２ꎬ３ 钟淮钦１ꎬ２ꎬ３ 方能炎１ꎬ２ꎬ３ 黄敏玲１ꎬ２ꎬ３
问题ꎬ 通常需要提早采集和保存花粉ꎮ 因此ꎬ 研究花
科植物花粉离体萌发与贮藏方面的研究进行了综述与
粉的生活力和贮藏条件是必不可少的重要前提ꎮ 花粉
总结ꎬ 以期为今后开展类似研究提供参考ꎬ 见表 １、
生活力是指花粉具 有 存 活、 生 长、 萌 发 或 发 育 的 能
表 ２ꎮ
表 １ 兰科植物花粉离体萌发研究进展
６８ ７０
８３ ９９
４５ １３
２０２１ [２ ]
２０２０ [４ ]
２０１９ [５ ]
２０１９ [６ ]
２０１４ [７ ]
２０１４ [８ ]
梅花品种分类的花粉形态学研究
园 艺 学 报 1997,24(2):170~174A cta Horticulturae Sinica梅花品种分类的花粉形态学研究*康素红1** 包满珠1 陈龙清1 黄燕文1 刘晓祥2(1华中农业大学林学系,武汉430070;2中国梅花研究中心,武汉430070)提 要 对花梅3个系60个品种的花粉形态进行了光镜和电镜观察,对观测结果进行了主成分分析与聚类分析。
结果表明,梅花花粉可以分成6大类;各品种的花粉形态可以较客观地反映梅品种的亲缘演化关系。
孢粉学证据基本支持传统的二元三级品种分类系统,但也有异议。
垂枝梅类与直枝梅类在花粉形态上不存在显著差异;宫粉型内各品种可能来源不一,且进化程度不一,分化明显,在分类上可以考虑细分;绿萼型品种的形成中可能有李的基因渗入。
关键词 梅;品种;分类;花粉形态学梅花品种丰富,是早春园林中的重要花卉。
对于梅品种资源的研究目前仍停留在传统的宏观形态比较分类上 4、5,受环境影响较大,客观性受到一定限制。
花粉形态受环境影响较小,且分析方法较简便,故孢粉分析已广泛应用在李、杏 1、桃 3等的品种分类上。
在梅上虽然对野梅 2、果梅 6也有一些报道,但对花梅花粉形态的研究却仍未进行。
本研究从花粉形态的角度探讨花梅品种间的亲缘演化关系,为其遗传育种研究提供一定的理论依据。
1 材料与方法1.1 材料 1994年2~3月自武汉中国梅花研究中心品种圃采取花蕾,包括樱李梅系、杏梅系和真梅系共94个品种。
采样时在各品种树体4个方向分别选取含苞欲放的大蕾期花苞置羊皮纸袋中,于冰箱中保存。
1.2 光镜观察方法 用G.Erdtan(1947)醋酸酐分解法制样,在光镜下测量花粉的极轴长P、赤道轴长E、萌发沟长L、沟宽W及沟深D,并计算P/E及L/P值。
每种花粉测量20粒,取平均值,并以95%可信度计算其数值变化范围。
一个品种内含2或2种以上形态者分别统计,并计算百分比,含败育花粉者统计败育率。
植物种子萌发实验报告植物种子萌发实验原理
植物种子萌发实验报告植物种子萌发实验原理植物种子萌发实验报告一、实验目的1、观察植物种子萌发时，各部分结构的生长顺序及各结构特点；2、研究植物种子萌发的条件是否需要光照。
二、实验材料：生长状况良好的绿豆种子10颗、两个透明塑料杯（自制）、脱脂棉、水三、实验过程1、制作培养杯：将脱脂棉平铺在塑料杯中。
2、将10颗绿豆种子放在盛有水的杯中浸泡一夜后，各取5颗放在两个透明塑料杯中方法是用镊子将种子放在脱脂棉与瓶壁之间，然后小心向杯中加水至水面离杯底2cm高，将一个培养杯放在温度（约25摄氏度）有光处（如窗台），另一个放在温度相同的黑暗处。
3、每天定时（早上9点）观察种子发芽情况，并拍摄照片记录种子萌发情况，同时进行文字描述。
在描述时注意描述植物长出来结构的名称（胚根、子叶、真叶、胚轴）；描述叶片颜色、胚轴颜色；测量并记录幼苗高度的变化。
过程如下四、实验结论：1、我发现种子萌发时先长胚根再长子叶。
2、子叶的形状是圆扁形，真叶是披针形。
3、黑暗中发芽的绿豆胚芽是网状。
2、我认为植物种子的萌发不需要光照。
五、发现问题在实验过程中我还发现了以下问题：如果把长出胚根的种子放到没水的地方，它就会生长缓慢。
如果用手触碰幼胚，它就会停止生长。
种子萌发实验报告关于种子的实验报告种子萌发实验报告一、实验器材及用品:吸水纸(可用软纸代替),放大镜,直尺,标签纸,记录纸,绿豆种子(超市购买)二、实验过程: 1.重点观察绿豆种子的发芽过程试验步骤:（1）种子的选择及准备:选用绿豆的种子,进行发芽实验.原因：这些种子容易取得,发芽快,现象明显绿豆种子发芽与水分的多少,温度的高低,光照的强弱，氧含量的多少有没有关系呢？为了证明我的猜想正确与否,我设计以下实验来证明条件和种子萌发实验记录表1、要改变的条件：水不改变的条件：光照实验方法:给一组种子加适量的水，一组种子加很少的水观察到的种子的变化：2. 要改变的条件：温度不改变的条件：水，光照实验方法:给一组种子放在常温中，一组种子放在低温环境中观察到的种子的变化：3. 要改变的条件：光照不改变的条件：水，温度观察到的种子的变化：光照组和黑暗组的实验记录没有明显差别,说明光照不是种子发芽的必要条件。
离体花粉(小孢子)发育途径
离体花粉(小孢子)发育途径一、花粉的发育阶段花粉是花粉粒的总称，花粉粒是由小孢子发育而成的雄配子体。
为了了解培养条件下的小孢子发育，有必要首先了解小孢子的正常发育情况。
以被子植物为例，正常条件下雄蕊的花药中可分化出孢原组织，孢原组织进行平周分裂形成造孢细胞，再进一步分化为小孢子母细胞(通常称为花粉母细胞，染色体数为2n，花粉母细胞经减数分裂由一个细胞形成4个细胞(四分体时期)。
每个细胞就是一个单倍的小孢子(单核花粉)，四分体的4个单倍体细胞彼此分离，形成4个具有单细胞核的花粉粒，此时的细胞含有浓厚的细胞质，核位于细胞中央，即单核居中期；之后单核小孢子的核由于细胞质的液泡化，被大液泡挤压到萌发孔相对的一边，这就是所谓的单核靠边期；紧接着进行第一次有丝分裂，成为二核小孢子，其中稍大的一个为花粉管细胞核(营养核)，较小的一个为生殖核，第二次有丝分裂是生殖核的分裂。
这样就形成有三个核的成熟花粉粒(雄配子体)(图5-2)。
植物的种类不同，第二次有丝分裂的时间也不同，一些植物在开花、授粉之前只进行一次有丝分裂。
只有发育到二核花粉时期，它们的第二次有丝分裂是在授粉之后，花粉管萌发、生殖核进入花粉管后才进行分裂的。
图5-2花粉的发育阶段二、离体小孢子的发育途径正常条件下，花粉发育过程都要经过一次不均等的胞质分裂，形成一个较小的生殖细胞和一个较大的营养细胞，称为A型途径。
在离体条件下，由于外界环境的改变，小孢子的首次分裂除了出现不均等分裂外，偶尔也发生不对称分裂机制受到破坏的情况，即花粉第一次有丝分裂时，细胞核在比较靠近小孢子的中心开始有丝分裂，从而发生对称的胞质分裂，最终产生两个相等细胞的花粉粒。
这种对称胞质分裂的异常发育类型称为B型途径，在大麦、烟草等作物的花药培养中可以见到。
(一)花粉不均等分裂途径(A型途径)当小孢子的第一次有丝分裂为不均等分裂时，形成一个较小的生殖细胞和一个较大的营养细胞，在培养条件下，由于改变了花粉原来的生活环境，花粉的正常发育途径受到抑制，花粉第二次分裂不再像正常花粉发育那样由生殖核再分裂一次形成两个精子核，而是像胚细胞一样持续分裂增殖。
不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析
【器材与用具】显微镜、载玻片、镊子、滴瓶。 【试剂】1%醋酸洋红:将洋红粉末1g倒入100mL45%醋酸溶液 中,边煮边搅拌,煮沸(沸腾时间不超过30s),冷却后过滤,即可使用。 也可再加入1%～2%铁明矾水溶液5-10滴,至此液变为暗红色而
不发生沉淀为止。
【方法】 (1)取少许花粉于载玻片上,加1～2滴醋酸洋红溶液,盖
按要求撒好后用记号笔在标签上做标记（时 间、品种、组别）放在25℃培养箱内进行培养， 观察花粉管的萌发伸长。
（6）观察
培养1h，2h，3h，5h后 进行显微镜 观察,观察萌发的个数，每个培养皿观察3 个重复，算出平均数，然后计算不同园艺 植物不同贮藏条件下离体培养的花粉萌发 率。
萌发率（%）=（已萌发的花粉粒数目/花粉 粒总数）*100%
加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中， 10~15min后镜检，凡被染为红色的花 粉活力强，淡红次之， 无色者为没有活力或不育花粉。观察2~3张片子，每片取5个视 野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
3.醋酸洋红法
【原理】正常花粉呈圆球形,物质积累较多,对醋酸洋红的吸附作 用与亲和力强,通常易被染成深红色,发育不良的花粉常呈畸形, 不积累物质或积累很少,用醋酸洋红染色呈淡红色或无色。
花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降 低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命的长短， 因植物种类不同而异。在自然条件下，大多数植 物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或 几个星期。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异 以外，还与温度、湿度有密切的关系。通常 高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命 力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分， 也不利于保存。
上盖玻片; (2)将制片放在显微镜(16×10)下观察3～5片,每片选择
花粉培养综述
影响禾谷类花粉培养因素的综述【摘要】：禾谷类植物是我们日常生活中主要粮食，包括稻、麦、玉米、高粱、粟（谷子、小米）、黍、稷（糜子、黍子、粘糜子）、荞麦等。
通过花粉培养的技术可以扩大禾谷类作物的种植，培育出新的优良品种，筛选优质作物。
影响禾谷类花粉培养的因素较多，主要有花粉的游离、预处理、培养基的成分及培养条件等。
关键词：禾谷类花粉培养游离花粉预处理培养基成分自从Guha 和Maheshwari（1964）首次报道毛蔓陀(DaturametelL.）花药培养获得单倍体植株以来，花药培养已成为获得单倍体及纯合体的有效途径。
花粉培养是在花药培养基的基础上发展起来的技术，它无论对遗传基础理论的研究，还是对单细胞育种实践以及植物遗传工程都有重要意义。
花粉培养区别于花药培养之处是：前者属于单细胞培养范畴，而后者属于器官培养范畴。
植物花粉培养的主要目的，一是获得纯系育种材料和进行单倍体育种，以利用杂种优势，缩短育种年限和提高育种效率。
二是用所获得的纯合二倍体材料进行植物遗传变异规律研究，使植物育种有坚实的遗传理论为依据，减少育种的盲目性。
三是克服远缘杂种的不育性，获得具有双亲优良特性的可育远缘杂种。
四是利用在远缘杂交F1 代的花药培养中出现的混倍体和丰富的染色体变异材料进行植物细胞遗传学等基础性研究。
利用单倍体育种技术，进行作物改良，已在水稻、小麦等作物上取得了成功。
在我国，利用单倍体育种技术已育成了若干品种或品系。
近年来我国杂交小麦等禾本科植物的研究进入了一个新的阶段,已开始从试验研究走向实际生产应用（陈生斗，2002）。
影响花粉培养的因素主要有花粉的游离，花粉的发育时期，花粉的预处理，培养基的成分以及培养环境等。
1 单倍体的获得与鉴定：人工诱发单倍体的发生中多采用离体培养花药或花粉。
在花药离体培养过程中存在一系列的问题，如花药培养获得的新植株群体中倍性极其复杂，因为花药上的药壁、药隔等属于体细胞成分，二倍体的组织结构极易通过培养诱导出愈伤组织，由二倍体体细胞诱导出的愈伤组织与由有单倍体花粉组织诱导出的愈伤组织混杂在一起，因此在培养之前有必要获得游离的花粉细胞。
不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析
【方法】 采集植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，
含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用
I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】 显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧 杯；量筒；天平。 【试剂】 I2-KI溶液
【步骤】 采集成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸
馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI
力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，
也不利于保存。
亚达姆斯试验发现苹果花粉在干燥状态下， 可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条 件下，经过5个星期即失去生活力。维霍夫试 验中，丁香的花粉贮藏在干燥器中，15d以后 发芽率降到50％；至20d时，仅有个别花粉发 芽；到30d时，即全部死亡。
（1）采集花朵
选择正常的无病虫害的园艺植株上含苞待 放正常的花朵，采集后带回实验室剔除过大及 过小的以及一些叶子和杂质。
（2）收集花药及散粉
用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花蕾的 花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中，写上 标签，进行必要的加温处理（培养箱温度25℃ 使其散粉。
（3）花粉的储藏
实习三
不同园艺植物花粉 离体培养生活力的测定
一、实验目的
1.掌握园艺植物的花粉收集、并掌握利用不 同方法进行花粉生活力的测定。 2.观察花粉在离体条件下的萌发情况，认识花 粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程以及萌 发的长度,为理解园艺植物的生殖过程及杂交 育种奠定基础。
二、实验原理
正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜 的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直 接观察计算其萌发率，以确定其活力。
溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。 凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐 色的为发育不良的花粉粒。观察2～3张片子，每片取5个视野， 统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。】 具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或 NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成
岗梅花粉活力柱头可授性及种子发芽率研究
-中药农业-岗梅花粉活力柱头可授性及种子发芽率研究"兰金旭1>2，谈英2,刘晖晖"，邢建永2 ,吴正军2 ,李子璇91.河南中医药大学药学院，河南 郑州450046 ；2.华润三九医药股份有限公司研发中心，广东 深圳518110；3西藏大学医学院，西藏拉萨850000［摘要］目的：研究岗梅的花粉活力、柱头可授性和种子特性，为种子采收提供理论支持。
方法：通过TTC (氯化三苯基四氮瞠)染色法测定岗梅花粉活力、联苯胺一过氧化氢法测定岗梅柱头活性；田间调查岗梅花期、访问昆虫和传粉方法；沙盘发芽法检测岗梅种子发芽率。
结果：岗梅雌雄异株，开花期9~13d 。
雄花花药4~6枚，花粉数量为16 587 -21 717个；雌花子房具有4~6心皮,每心皮仅有1枚胚珠。
雄花花粉活力1 ~3 d ,雌蕊柱头可授性为3 ~5 d (风媒为主，偶见东方蜜蜂、麻蝇；不存在无融合生殖现象。
岗梅种子千粒质量和发芽率随种子采收期延迟而提高，岗梅种子发芽率与采收期和千粒质量相关性具有统计学意义%7 <0.01)。
结论：降雨可能影响岗梅授粉和种子质量。
［关键词］岗梅；花粉活力；柱头可授性；千粒质量；发芽率［中图分类号］R282.71 ［文献标识码］A ［文章编号］1673L890(2019)04-478-4doi ：10.13313/-. isn. 1673-890.20180908002Pollen Viability ， Stigma Receptivity and Seed Characteristics of Ilex asprellaLAN Jin-u 1，2， TAN Ying 2， LIU Hui-uU **， XING JUn-cg 2， WU Zheng-jun 2， LI Zi-uan 3"［基金项目］ 深圳市龙华区科技创新资金项目(20170912A0900032)；西藏自治区青年创新基金项目(QC2015-6、QC2015-27)*［通信作者］ 刘晖晖，高级工程师，研究方向：中药质量控制标准研究；E-mail : Uuhui@1. School o Pharmacy ， Henan University o Traditional Chinese Medicine ， Zhengzhoo, 450046， China ；2. Research and Development Centes ， San/iu Medical and Pharmaceutical Company Lidted ， Shenzhen 518110， China ；3. Medical College ， Tibei University ， Lass 850000， China［Abstract ］Objective : To study the poCen viability ， stigma receptivity and seed characteristics of O —2 assrello forseeds collection. Metiodt : The poCen viability was measured by triphenyltetrazolium c hloride ( TTC ) method ， the stigma re ceptivity was detected by benzidine-H 2O 2 method ， the fowers periods ， insect visitor and poCinating method were investigatedin fielUs ， and seed germination rate were measured in wet sand. Result): — 7sprello was dioecious ， 1(X11/ date was about9-13 day. The ma .e e.owe es ha ee anthe es 4-6 ， and thepo .en numbeeweeeabout16， 587-21 ， 717.Thepistiuatee.oweeshaee caepe.s4-6 caepe.swith oneoeu.eeach.Thepo .en eiabi .ity was about 1-3 dayand stigma eecepti eity was about 3-5 day.Thelowers were anemophilous Uower ， Apts cerana Fabricius and Sarcophaaa fuscicauda Bottcher present casuaL y during poCina-Fon ，the apomixis was not exist in plants. The thousand-min weight and germination rates were improved as harvesting Fme de.ayed.Theco e e.ation wassignieicantamonghaeeested time ， thousand-geain weightand geemination eate ( P <0.01 ) .Conceltton : Rainea .peobab.ya e e ctsthequa.ityoepo .ination and seeds.［Keywords ］Ilee asprella ； p —len viability ； stigma receptivity ； thousand-min weight ； germination rate岗梅为冬青科冬青属植物梅叶冬青Io assrello (Hook. el Arn. ) Champ. ea Benth.的干燥根、茎，是 我国清热解毒类中成药的原料药，主要用于感冒灵、众生丸等，在华南地区作为南方凉茶的主要成分广泛使用［1］(野生岗梅的自然生长速度较慢，近年来 岗梅药材应用量增加导致野生资源蕴藏量急剧下降，目前需要通过人工种植增加岗梅资源量来逐步满足市场需求。
7种油茶花粉数量及花粉萌发率的测定
因授 粉受 精不 良而造 成座 果率低 的 问题 ， 高果 实 品质＿． 目前我 国对 油茶 的研 究还 多 集 中在 引种 与常规 栽 提 ３但 ］ 培技 术上 ， 油茶 的 花粉特 性研 究还 未 见有详 细 报道 ， 们对 油茶 花 的生 物学 特性 、 对 人 花朵 和 花药 中花粉 量 的多
ｃｌ ｒ ｍｅ ｉｍ ｏ ａａ＋ ０ Ｏ ｂ ｒ ｃ ｕｔ ｅ ｄｕ ｆ ｇ ｒ ． １ ｕ １ ｏｉａｉ １ ％ ｓｃｏｅ ｅ ｇｒｓ ｅｔ ｅｙ５ ． ， ６ ３ ， ２ ７ ａ ｄ９ ． ； ｎ ａ ｔｅ ｃ ｄ＋ ０ ｕ ｒｓ，ｂｉ ｅｐｃｉ ｌ ９ ４ ｎ ｖ ５ ． ９ ． ％ ｎ ５ ３ ａ ｄｔ ｔ ｈ ｈ
做正交设计 ， 蔗糖设置 ３ 质量浓 度梯度 ， 个 分别 为５ Ｌ 。１ ０ｇ· ０ ｇ· １ 、 ０ Ｌ～、５ Ｌ 。硼 酸设 置 ３ １ ０ｇ· － ， 个质量 浓度梯 度， 分别 为０ ０ Ｉ一、 ． Ｌ 。 ． ５ ．５ ｇ· ０ １ ｇ· ＿ 、 １ Ｌ－ ， ０ ｇ· 。加入ｌ 的琼脂 配制成 不 同的培养基 ． 用玻璃 棒滴１ 培养基 滴 于玻 片 ， 冷却 后 培养 基表 面要 厚薄 均衡 ， 近 圆形 ． 干净 毛 刷沽 取少 许 花粉 均 匀撒 播 于培 养基 表面 ， 于 接 ］用 置
粉 离 体 培养 萌 发 率 ． 果 表 明 ： 种 油 茶 的 单 花 药 花粉 平 均数 量 分 别 为 ２４ ８ ３５ ３ ７ ９４ １３ ３３ １３ ８３ ７ ７ ３９ ５ ７ ３１ １ ３粒 ； 结 ７ ９ 、 ０ ． 、 ４ ． 、 ３． 、 ９ ． 、 ８ ． 、 ４ ． 通 红 博 ０ｇ· ． ０ 蔗糖 萌 中 普 油 茶 、 皮糙 果 茶 、 白大 果 和茶 梨 的花 粉 在 １ Ｌ一 琼 脂 ＋ Ｏ １ｇ·Ｌ 硼 酸 ＋ １０ｇ·Ｌ一· 的 培 养 基 上 萌 发 率 最 高 ， 发 ｍ ｎ
桃92个品种的花粉量及其萌发特性的差异
业 大学 园艺科 学与 工程学 院／ 物生物 学 国家重 点实验 室 作
２ １１） ７ ０ ８，张艳 敏 ，冯守千 … ／ 中国农业科 学 ． ２ １ ，４ ／ － ００ ３ （３． ２ ３ ～２ ４ １）－ ７ ５ ７３
５ ．３ ３ ６ ％、３ ． １ ８４ ％，每公顷枝（ 总量 为１ １ 条。结论 ：富 梢） ２万
士苹 果改 良高干 开心形 树冠 内小于 ３ ％｝ 对 光 照强度 占树 ０ Ｎ
冠总体积 的比例达到４ ．２ ７６ ％、生长季 枝（ 总量达 到 １ １ 梢） ２ 万 条／ ｍ ｈ 和树冠内膛枝（ 比例小于 １％是 乔砧富士苹果改 良 梢） ０ 高干开心形树冠郁 闭的３ 个判断指标 ，也是树体结构 开始改
酶（Ｅ Ｃ 、细胞质ＮＡＤ ＰＰ ） 依赖 的苹果酸脱氢酶（ｙ ｃ ＭＤｒ）［ ｔ￣ 负 ，１ 责苹果酸跨膜运输的Ｈ＋ 焦磷酸酶（ － ． ＶＨＰ在高 、低酸苹果 果 ）
实成 熟过程 中活性 没有 明显 差异 ，而负责 苹果酸 跨膜运输
的 Ｈ ＡＴ ａｅ ＶＨＡ） Ｌ Ｐ Ｓ酶（ 在高 酸果 实中有较 高的 活性 ，负责 苹果酸 降解 的细胞 质ＮＡＤＰ 依赖 的苹 果酸 酶（ｙ ）１ Ｐ ｃ ＭＥ ￣ ＡＴ １ 依赖的磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶（Ｅ －Ｃ ￣在 低酸果实 Ｐ Ｐ Ｋ）Ｉ Ｊ 中有较 高的活性 。还从苹果 酸 向可溶性糖转 化的 角度 探讨 了苹果 酸代谢关键 酶对可溶性 糖积累的影 响。［ ／ 刊］姚玉 新 （ 山东农业大学 园艺科学与工程学院 ，国家苹果 工程技术 研 究 中心 ，作物生物 学国家重点实验 室 ２ １１ ） ７ ０ ８ ，李明 ，由
加 到 １ ｔｏ・ 时 ，转 化 了Ｍｂ ａ ｌ 酵 母 细 胞 生 长 状 ５ ｏ ｌＬ Ｎｒｍｐ 的 况 与 野 生 型 相 差 无 几 。 在 ３ ｍｏ ・ Ｐ 时 ， Ｍｂ Ｏ ｌ Ｌ Ｂ ＤＳ Ｎ～
梅花的离体培养研究
设 梅花乡是 客家人 的心 声 和期 望 … 。梅 花 传统 的繁殖 方 法 以嫁接为 主 ， 插 和压 条 为辅 ， 作 量 大 、 扦 工 繁殖 系数低 ， 很难在 短期 内获得大量 成活苗 。因此 ， 梅花 的离体 快速 繁
殖受到 了众多研究 者 的重视 。梅花 属落 叶乔 木 ， 织培 养 组
Ａｂｓｒ ｃ ： ｆ ｃ ｆｃ ｌｕ ｅ ｃ ｎ ｉｉｎ ｎ ｔｓ ｕ ｕ ｔｒ ｆＰｒ ｍｕｓ Ｍｕｍｅ ｅ Ｚｈ ｈａ ｗｅ ｅ ｓｕ ｅ Ｔｈ ｅ ｕｔｉ ｄ ｃ ｔｄ ｈ ｔ ｔ ａ ｔ Ｅｆ ｔｏ ｕ ｔｒ ｏ ｄ ｔｏ ｏ ｉｓ ｅ ｃ ｌｕ ｅ ｏ ｕ ｅ ｖ． ｕ Ｓ ｒ ｔｄｉｄ． ｅ ｒｓ ｌ ｎ ｉ ａｅ ｔ ａ
简述 如下 。
１ 材 料与 方法
１ １ 实验材料 ． 供试材 料是早 春季节取 自本 地 的梅花 朱
２ 结果与讨 论
２ １ 不 同的激素 组合对 芽的诱 导的影 响 外 植体 分切 成 ． 小段 后接种 于培养基 １ ２中。接种 １ｄ后 ， 和 ５ 外植 体 的颜 色 逐渐 转 绿 ， 部 有 愈 伤组 织 形 成 ， 顶 芽 的 开始 伸 长 ， 基 有
８ 中， ） 比较 ３种 培养 基对根 的形成 的影响 ， 最后 ， 小苗 出 将
瓶 移栽 。
表 １ 培 养 基 及 附 加 成分
难 度较 大 ， 萼 辉 等 。 通 过 多 年 研 究 ， 现 了 “ 傅 实 粉皮 官 粉 ” “ 人梅” 品 种 的快 速 繁殖 。但 梅 花 品种 众 多 ， 、美 等 各 种 梅花 因遗 传特性 的差异 ， 其培养 方法有 所不 同 。本 实验 对本 地种植 的朱砂梅花 的离体 培养进行 了研究 ， 现将结 果
梅花花期生物学特性研究毕业答辩护理课件
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结论与展望
研究结论
梅花花期生物学特性研究结论
经过对梅花花期生物学特性的深入研究，我们发现梅花的花期受到多种因素的影响，包括温度、光照和湿度等。 此外，我们还发现梅花的花期与其遗传特性密切相关，不同品种的梅花花期存在差异。这些结论有助于我们更好 地理解梅花的生物学特性，为梅花栽培和品种改良提供科学依据。
实践贡献
基于本研究的结果，可以为梅花栽培提供更为科学的管理措施，如合理安排灌溉、施肥和 修剪等作业，以提高梅花的产量和品质。同时，对于梅花品种改良，可以根据本研究的结 论选择具有优良性状的亲本进行杂交育种，提高育种效率。
方法贡献
本研究采用了多种研究方法，包括实验观察、数据分析和模型模拟等。这些方法的综合运 用为今后类似研究提供了参考和借鉴，有助于推动相关领域的研究进展。
梅花花期生物学特性是花卉生物学研 究的重要内容之一，对于花卉栽培、 品种改良和花卉产业的发展具有重要 意义。
研究意义
本研究旨在深入了解梅花的生物学特性，为梅花栽培、品种改良和产业发展提供科 学依据。
通过研究梅花的生物学特性，可以更好地认识和掌握梅花的生长规律和开花机制， 为花卉产业的可持续发展提供技术支持。
列举了实验数据和图表，展示了梅花花期生物学特性的各项指标， 如花芽分化时间、开花时间、花色变化等。
结果分析
数据对比分析
将实验数据与前人研究结果进行 对比分析，探讨了梅花花期生物 学特性的差异及其原因。
结果可靠性分析
对实验结果的可靠性进行了分析 ，包括实验操作的规范性、数据 处理的准确性等方面。
结果解释与讨论
THANK YOU
加强梅花栽培和品种 改良的应用研究
基于本研究的结果，未来可以加强在 梅花栽培和品种改良方面的应用研究 。例如，进一步优化梅花栽培技术和 管理措施，提高梅花的抗逆性和产量 ；同时，利用现代生物技术手段进行 梅花品种改良，培育出具有优良性状 的梅花新品种。这些研究将有助于推 动梅花的产业化和可持续发展。
梅花花香组成成分差异分析及关键酶基因的功能研究
《梅花花香组成成分差异分析及关键酶基因的功能研究》2023-10-27contents •梅花花香组成成分差异分析•梅花花香关键酶基因的功能研究•梅花花香组成成分差异的分子机制研究•梅花花香关键酶基因的调控机制研究•总结与展望目录01梅花花香组成成分差异分析材料与方法实验材料选择不同品种、不同生长环境的梅花为研究对象，采集花朵和叶子样本。
实验方法采用色谱-质谱联用技术对梅花花香组成成分进行分析，并运用基因测序技术对关键酶基因进行克隆和表达分析。
不同品种、不同生长环境的梅花花香组成成分存在明显差异。
不同基因型梅花的香气物质种类和含量有显著差异。
关键酶基因的克隆和表达分析表明，这些基因与梅花花香形成密切相关。
实验结果结论与讨论本研究揭示了梅花花香组成成分的差异及其与关键酶基因的关系，为深入了解梅花花香形成的分子机制提供了重要依据。
研究发现，不同品种、不同生长环境的梅花在花香组成成分上存在明显差异，这可能与基因型、环境因素等有关。
通过实验结果，我们可以看到关键酶基因的克隆和表达分析对于了解梅花花香形成的分子机制具有重要意义，这为今后通过基因工程手段改良梅花品种提供了新的思路和方法。
02梅花花香关键酶基因的功能研究实验设计基因克隆与测序将目的基因进行克隆，并使用测序仪进行测序验证。
引物设计根据已知基因序列，设计特异性引物，用于PCR扩增。
提取基因组使用基因组提取试剂盒，提取梅花基因组DNA和RNA。
选择梅花品种挑选具有代表性的梅花品种，如白梅、红梅等。
采集样本分别在花期不同时间段（如初花、盛花、末花）采集梅花样本。
实验结果化合物含量变化对梅花花香中的主要化合物进行定量分析，发现不同品种、不同时间点的梅花中，这些化合物的含量也存在差异。
关联性分析通过统计学分析，发现关键酶基因的表达量与某些化合物的含量之间存在显著正相关或负相关。
基因表达差异通过qPCR技术，发现不同品种、不同时间点的梅花中，关键酶基因的表达量存在显著差异。
花粉的离体萌发和大小孢子发生发育观察
花粉的离体萌发和大 小孢子发生发育观察2015-3-20花粉的离体萌发• 植物花粉活力即花粉萌发力，是 指花粉在适宜条件下萌发的能力 • 物种、温度、相对湿度、储藏介 质、辐射、光照——影响花粉活力 的因子 • 染色法、花粉离体萌发测定法、 花粉授粉结实检测法花粉的离体萌发• 实验材料• 烟草（Nicotiana alata, Nicotiana tabacum）• 离体萌发培养基• 10%蔗糖(基本培养基) • 硼酸（10、30、100ppm）、Ca2+(10、30、 60mg/L)花粉的离体萌发• 实验步骤• 取始开期的花药置于玻片上，滴加 悬浮液挤出花粉，然后吸入PCR管 制成均匀的花粉悬浮液.分别吸取 20μl花粉悬浮液加入含有不同浓度 及物质的花粉培养基中，混合均 匀，置于25℃培养2h后分别拍照， 统计花粉萌发率和花粉管长度。
花粉的离体萌发烟草小孢子发生发育观察• 当花蕾发育到一定大小时，孢原细胞分 裂形成小孢子母细胞，小孢子母细胞经 两次连续的减数分裂形成4个单倍体小 孢子；小孢子进一步发育为成熟花粉粒。
• 在细胞分裂过程中，染色质变粗浓缩形 成染色体，细胞经卡宝品红染色后染色 体颜色变为深紫色，可在光学显微镜下 观察染色体的形态和行为以及小孢子发 育过程。
烟草小孢子发生发育观察• 实验材料• 固定于卡诺氏固定液中不同时期的花蕾 • 花期采集花瓣刚长出花萼前不同大小的花蕾烟草小孢子发生发育观察• 实验步骤——压片法观察 小孢子发生发育• 将于卡诺氏固定液中保存的材料转入 45%的冰乙酸中软化20min，挑选不同大 小的花蕾并分类，按花蕾大小排列，选 取不同大小的花蕾取出花药，分别置于 洁净的载玻片中央，滴加一滴卡宝品 红，用镊子挤出花粉粒，盖上盖玻片， 显微镜下观察花粉母细胞减数分裂与小 孢子发育过程。
烟草大孢子发生发育观察 切片观察• 思考题• 1. 硼酸和钙离子在花粉管萌发生长中的作用？ • 2. 哪些植物的成熟花粉是2细胞型花粉，有何特征？。
花粉离体培育原理
花粉离体培育原理花粉离体培育是一种重要的植物组织培养技术，是指将花粉取出花药，放置在人造营养液中进行培养的过程。
这种技术可用于花粉学、育种等方面研究。
下面将介绍花粉离体培育的原理和操作流程。
一、原理花粉离体培育的原理基于花粉发育的生理和生化过程。
花粉萌发需要一定的营养物质，包括糖类、氨基酸、维生素、激素等。
而在自然环境中，这些养分往往无法满足花粉产生的需求。
因此，将花粉置于适当的营养液中，能够提供充足的营养，从而促进花粉萌发和发育。
除此之外，花粉离体培育还可以通过控制环境条件，包括温度、光照、湿度等因素，来影响花粉的生长和分化。
这些因素都会直接或间接地影响花粉的基因表达和调节，从而影响其发育方向和结果。
因此，通过控制环境条件，花粉离体培育能够实现对花粉发育的定向控制，以获得特定的实验结果。
二、操作流程花粉离体培育的操作分为以下几步：1、花粉收集首先需要从花药中收集花粉。
一般来说，采用滤纸、毛刷等方式将花药中的花粉收集到试管或烧杯中。
为了避免花粉的杂质和受损，最好在花药刚裂开时收集花粉。
2、花粉分离将收集到的花粉放入干净的玻璃器皿中，加入一定量的营养液，在温度和湿度适当的条件下，轻轻摇晃、过筛或者用细长的工具进行划拉，将花粉分离。
3、营养液配制根据实验需要，选择适当的营养液进行配制。
植物组织培养中常用的营养液有MS、B5、N6等，其中MS营养液应用最广泛。
不同的营养液配方中所含的营养物质不同，应根据实验需求进行选择。
4、花粉培养将分离好的花粉放置于营养液中，放到适当的环境中，进行培养。
在进行实验前应预先进行试验，确定合适的温度、光照和湿度等条件。
5、结果观察和分析在花粉培养过程中，可以观察和记录花粉发育状态和结果。
根据实验需求，可以对花粉进行染色、显微镜观察、遗传分析等进一步分析。
总之，花粉离体培育是一种重要的植物组织培养技术，通常应用于花粉学、育种等方面研究。
实验操作简单易行，能够获得高质量的实验结果。
梅花花粉生活力的测定和比较
梅花花粉生活力的测定和比较
张亚利;曾宪宝;晏晓兰;熊彩凤;刘燕
【期刊名称】《湖北农业科学》
【年(卷),期】2005(000)006
【摘要】采用悬滴法在15%蔗糖+0.1%硼酸的培养液上对97个梅花品种花粉的萌发率进行了测定和比较,结果表明,不同梅花品种及同一品种不同年份的花粉生活力均存在差异:97个品种中,粉瓣果梅、大宫粉等17个品种的花粉萌发率高达50%以上,寒红、银红台阁、粉红朱砂、桃红朱砂、磨山垂碧5个品种的花粉完全败育.另外,花粉数量和花粉生活力存在一定的相关性,花药散粉量越大,花粉生活力越高.【总页数】3页(P84-86)
【作者】张亚利;曾宪宝;晏晓兰;熊彩凤;刘燕
【作者单位】北京林业大学园林学院,北京,100083;中国梅花研究中心,武
汉,430070;中国梅花研究中心,武汉,430070;中国梅花研究中心,武汉,430070;北京林业大学园林学院,北京,100083
【正文语种】中文
【中图分类】S685.17;Q944.42
【相关文献】
1.梅花粉生活力和授粉亲合力的测定 [J], 张彦书
2.不同现代月季品种的花粉生活力测定及贮藏方法比较 [J], 王红梅;张邱艳;张操
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4.四川牡丹花粉生活力测定方法的比较 [J], 王士泉
5.杏和杏梅花粉生活力测定研究 [J], 王传印;郭承斌;康玉柱;徐红花;苏丽娟;刘遵春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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梅 花 花粉 量 及 离体 萌发 特性 研 究
任 广兵 ， 房伟 民 ， 贾思振 ， 陈发棣
（ 京 农 业 大 学 园 艺 学 院 ， 京 ２０ ９ ） 南 南 １ ０ ５
摘 要 ： ４ 个 梅 花 品 种 的 花 粉 量 和 ４ 个 品种 的 花 粉 离 体 萌 发 率 进 行 了 测 定 ， 比较 了 不 同 萌 发 培 养 液 、 对 ４ １ 并 不 同 采粉 时 期 等 因 素 对 花 粉 萌 发 率 的 影 响 。 结 果 表 明 ： １ 梅 花 品 种 问 单 花 药 花 粉 量 有 很 大 差 异 ， 化 （） 变
值 ０ １ ８ 。２ 不 同 离 体 萌 发 培 养 液 对 花 粉 萌 发 有 较 大 影 响 ， 数 品 种 的适 宜 培 养 液 为 １ ％ 蔗 糖 ＋０ ０ ％硼 ～ １０ ３ （） 多 ０ ．１ 酸 。 （） 种 间 花 粉 萌 发 率 存 在 很 大 差 异 ， 高 ８ ．４ ， 低 为 ０ １ ％ 。 （ ） ５ ℃ ， 粉 于 液 体 培 养 基 ３ ｉ ３品 最 ５ １％ 最 ．１ ４２ 花 ０ｒｎ ａ 后 开 始萌 发 ， 花 粉 管 达 最 长 。 （） 花 期 和 盛 花 期 的 花 粉 萌 发 率 差 异 不 显 著 ， 粉 萌 发 率 与 花 粉 饱 满 度 和 ６ｈ后 ５初 花
糖 ＋０ ０ ％硼酸 ＋１ ％Ｐ Ｇ ０ ．１ ５ Ｅ ４０ ０＋０ ０ ％ Ｃａ ＮＯ３ ２・ Ｈ２ ＋０ ０ ％ Ｍｇ Ｏ ，ｐ ． 。用 胶 头滴 管 ．７ （ ） ４ ｏ ．２ Ｓ Ｈ ６０
吸取 培养液 ， 在载 玻片 上 ， 花粉 均 匀撒播 在培 养液 里 。把 载 玻 片放 入 培养 皿 ， 滴 将 培养 皿 里 同 时放 入 湿 的 棉球 以保 持湿度 （ 对湿 度＞ ８ ％） 在 ２ 相 ５ ， ５℃ 恒温 箱培 养 （ 每处理 重 复 ３次） 。每 隔 ３ ｎ在 显微 镜 下 观 ０ ｍｉ 察， 统计 萌发 率 。 萌发 率 ＝已萌 发花 粉数 ／ 粉 总数 ×１ ０ （ 个重 复取 ５个 视野 ， 别数 取每 个视 野 内的萌 发 花粉 数 花 ０％ 每 分
１ 材 料 与 方 法
１１ 材 ． 料
试验 材料 采 自南 京 农业 大学 梅 花 品种 资 源 圃 。花 粉量 测 定 选 择 “ 中宫 粉 ” ４ 等 ４个 品 种 （ １ ， 中 表 ）其 “ 江南 无 所” ５个 品种 分 别 于初花 期 （ ５ 等 １ ％开 放 ） 和盛 花 期 （ ５ ～７ ％ 开放 ） １％ ５ 采集 花朵 ， 他 品种 均于 盛 其 花期 采集 花朵 带 回实验 室 ， 取花 药 。花粉 萌 发率 的测 定选 择 了 “ 剥 多萼 宫 粉” ４ 等 １品种 ， “ 除 早南 京 红 ” 等 ４个 品种分 别 在初花 期 和盛花 期采 集花 药外 ， 他 均 于盛 花 期 采集 花 药 ， 胶 干燥 后 用 硫 酸 纸包 装 ， 入 其 硅 放 盛 有硅 胶 的 自封 袋 ， ０℃保 存备 用 。 一２ １ ２ 花粉 量 的测定 ． 每 个 品种数 取未 开裂 花药 ２ ０枚 ， 入干 净 的玻璃 瓶 中 ，０℃烘 箱 干燥 ， ０ 放 ５ 等花 药完 全 开列 ， 粉散 出 ， 花 加入 １ Ｎａ Ｏ ） 液 ， ％（ Ｐ 溶 定容 至 ５ｍＬ， 匀成 悬浮 液 ， Ｏ ＹＭＰ 摇 在 Ｌ ＵＳＢＸ４ 相 差显 微 镜下 用 血球 计 数板 １ 观察计 数 。数取 计 数板上 的花粉粒 数 。 单个 花药 花粉 粒数 ＝每个 计 数板 花粉粒 数 ｘ５ ０ ／０ 。重 复 ６次 ， 平均 值 ， ００ ０２ ０ 取 以单个 花 药 的 花粉 粒 数作 为该 品种 的 花粉量 。 １ ３ 花粉离 体萌 发培 养液 的筛 选及 萌发 率的 测定 ． 取 “ 红” ９个 品种 花粉 在 ３种 培 养 液下 离 体 萌发 培 养 。１ 培 养 液 ：０ 寒 等 号 １ ％蔗 糖 ＋０ ０ ％硼 酸 ， Ｈ ．１ ｐ ６ ０ ２号培 养液 ： ３ 改 良 Ｍｏ ｎｅ 培 养基 ） ％ 蔗 糖 ＋２ ％Ｐ ０ ，ｐ ６ ０ ３号 培 养 液 ：０ ．； ＭＥ （ ｎ ｉｒ ＋５ ０ ＥＧ ４０ ０ Ｈ ． ； １ ％蔗
花 粉 量具 有 一 定 正 相 关 性 。 关键 词 ： 花 ； 粉 量 ； 粉萌 发 ； 性 梅 花 花 特
中图 分 类 号 ： ６ ５ １ ￥ ８ ．７
文献标识码 ： Ａ
梅 花 （ ｒ ｎ ｓ ｌ ｉｂ ｅ ｃ ．是 我 国的传 统名 花 ， 培历 史 已有 ３０ ０余年 ， 受群 众喜 爱 ］ Ｐ ｕ ｕ ｍｅ Ｓｅ ．ｔ ｍｔ Ｚｕ ｃ ） 栽 ０ 深 。 杂交 育 种是新 品种选育 的一 种行 之 有效 的方 法 ， 究表 明 ， 梅 花 中开展 杂交育 种 也是 可行 的＿ 。在杂 研 在 ２ ］ 交 育种 中， 本 的选择 除 了要考 虑其 观赏 性状 外 ， 父 花粉 量 和花 粉 活力 也是 很 重 要 的 因素 ， 选择 花 粉 量 多和 花 粉 活力 高 者 是 杂 交 成 功 的重 要 条 件 ； 外 ， 粉量 和 花粉 活 力 是 传 粉生 物 学 中重 要 的研 究 内容Ｌ 。 另 花 ７ ］ 对 于 梅花 花粉 的研究 涉及 到发 育 、 形态 、 理 、 化 等 领 域 ， 试 验 就 不 同 梅 花 品种 的花 粉 量 和 花 粉离 体 生 生 本 萌发 特性进 行 了研究 ， 旨在为 梅花 杂交育 种 和相关 领 域 的深入研 究提 供 参考 。
维普资讯
上海农业学报
２ ０ ，３ ４ ： ２ ６ ０ ７ ２ （ ） ４ —４
Ａｃ ａ Ａｇ ｉｕｌ ｕ ａ ｈａ ｈ ｔ ｒ ｃ ｔ ｒ ｅ Ｓ ｎｇ ａｉ
文 章 编 号 ：０ ０ ３ ２ （ ０ ７ ０ ． ２０ １ ０ ．９ ４ ２ ０ ） ４４ ． ５