制作石蜡切片的常见问题及处理1(精)

制作石蜡切片的常见问题及处理
石蜡切片是组织学和病理学的主要实验方法,也是临床中观察病理变化的重要手段,为教学、科研和临床诊断做出了卓越贡献。

实践发现,切片制作过程中常常由于多方面的原因遇到困难,甚至导致制片失败。

本文将对制作石蜡切片过程中的常见问题和处理方法作重点介绍。

1切片不成带[1]
常见原因:①切片刀不够锋利。

②切片刀与蜡
块的角度不当。

③蜡块四周留蜡边太少。

④石蜡硬
度过大,黏度不够。

解决方法:①重新磨刀。

②调整切片刀的角度。

③可重新包埋或将蜡块四周熔化,再放入包埋框中
补蜡,修理蜡块时组织块周围保留的石蜡以2mm
左右为宜。

④蜡块过硬可适当加些蜂蜡,或更换熔
点较低的石蜡重新包埋。

⑤将蜡块放入冰箱内延长
冰冻时间,然后迅速切片。

2切片弯曲
常见原因:①组织成分及形状不规则。

②蜡块上下或左右两边不平行。

③蜡块与切片刀刀口不平行。

④切片刀各处的锋利程度不一致。

解决方法:
①修整组织块时,注意修切整齐,切成方形或矩形,尽量不要切成三角形[2]。

②将蜡块四边反复修平对称。

③调节蜡块夹持器,使其与切片刀平行。

④移动切片刀,更换刀口位置。

⑤使用负离子发生器直吹切片处可防切片卷曲[3]。

3切片上出现裂纹
常见原因:①切片刀上有小缺口,或刀口不平
整。

②刀口上粘附有细微纤维(如毛发、纸或布丝
等物。

③组织过硬变脆(如凝血块、胶冻样物质、
囊腺瘤、甲状腺、腺瘤等[4]。

④组织中可能含有较
硬之物质,如固定液之结晶石灰质。

⑤裱片的水温
太高。

⑥包埋时石蜡冻结太慢。

解决方法:①切片刀某处有缺口,可调换刀口部
位或重新磨刀。

刀口上缺口过多且不平整,可先将
刀锋垂直在磨刀石上轻轻磨数次,然后按常规磨刀。

②擦净刀口。

③适当减少脱水、透明、浸蜡时间。

④组织中硬性物质太多,则不宜用。

⑤裱片的水温以45℃左右为宜。

⑥包埋时待蜡块周围凝结一层,即放入冷水中。

4切片厚薄不均
常见原因:①脱水、透明、浸蜡过度、时间过长、
温度过高[4]。

②蜡块太大,过硬,转动时刀刃受震
动。

③切片微动部分失灵,齿轮跳格。

解决方法:①调整脱水、透明、浸蜡时间和温度。

②如蜡块过大,以后取材时注意取材的大小。

蜡块
组织过硬,可返回水中浸泡,再重新脱水和包埋。

③
修理切片机失灵的部分,调整螺旋,加机油润滑零
件,必要时需请专业技术人员调整切片机。

5切片皱褶
常见原因:①石蜡太软或室温过高。

②切片刀
上粘有残余的石蜡,刀口不干净。

③组织浸蜡时间
不够,或脱水、透明不够。

④切片刀不锋利。

⑤裱片的水温过高或过低。

解决方法:①可将蜡块放入冰箱中冰冻后切片,
并在切片时一边切片一边用冰块冰冻或换蜡。

如室温过高,可开空调降低室温。

②切片刀不干净,可用
棉花沾少许二甲苯将刀口拭干净。

③重复浸蜡过程或延长脱水、透明时间。

④将切片刀磨锐利再行切片。

⑤裱片的水温以45℃为宜。

⑥组织蜡带先放
入35%的漂片酒精中,再捞出放入温水中可预防皱
褶[6]。

6切片粘刀
常见原因:切片时有静电作用,产生静电吸引,
在冬季或气候干燥时常出现这种情况。

解决方法:①可用加湿器,以增加空气中的水
分,而减少静电作用。

②把卫生纸用凉水浸湿后围在
切片机操作台,可以在切片机台周围形成静电屏
蔽[7]。

③把展片时所用毛笔在湿纸上进行蜡屑清理。

7切片脱落
常见原因:①取材太厚或组织含血成分多、脂肪
多[8]。

②组织固定不佳,脱水、透明不彻底,致使石
蜡无法浸入组织内。

③组织脱水透明过度,浸蜡时
间过长或温度过高,引起组织收缩硬脆。

④载玻片
清洗得不洁净。

⑤用急水冲洗或震荡过于剧烈。

⑥
染液或试剂的酸碱度不适宜或停留时间较久[9]。

⑦烤片时间过短、温度过低或时间长、温度过高[10]。

⑧石蜡、二甲苯使用时间过久[11]。

解决方法:①取材不能太厚,载玻片下2/3处用
右手的大鱼际肌均匀涂擦蛋白甘油,厚薄适中。

②
按组织大小厚薄选择固定、脱水、透明时间。

或者在不影响诊断的原则下将组织重新脱水,透明浸蜡,包
埋蜡熔度要比浸蜡熔点高3~5℃。

③先用温水润
泽,再用冰硬化,然后再切片。

④彻底清洁载玻片,
使之成中性。

⑤切片不能直接放于水流下冲洗或者
改为浸泡[12]。

同时经过煮沸,再次净化和蒸馏处理
后的水可增加了蜡片与载玻片之间的吸引力,冷开
水作为漂片用水既方便又经济应首选[13]。

⑥染液
或试剂的酸碱度适宜、停留时间合理。

⑦一般在
60℃,2小时为宜。

⑧二次浸蜡、更换二甲苯。

8切片灰染
常见原因:①固定液浓度太低[14]或者组织固定
不及时、不彻底[15]。

②取材太厚。

③水洗不够。

④脱蜡不充分[16]。

解决方法:①固定及时彻底。

脱尽原染色,复染
时延长苏木精的染色时间来补救。

②取材不宜太厚。

③水洗充分。

④脱蜡彻底。

石蜡切片是组织学和病理学的主要实验方法,
也是临床中观察病理变化的重要手段,为教学、科研和临床诊断做出了卓越贡献。

实践发现,切片制作
过程中常常由于多方面的原因遇到困难,甚至导致
制片失败。

本文将对制作石蜡切片过程中的常见问题和处理方法作重点介绍。

1切片不成带[1]
常见原因:①切片刀不够锋利。

②切片刀与蜡
块的角度不当。

③蜡块四周留蜡边太少。

④石蜡硬度过大,黏度不够。

解决方法:①重新磨刀。

②调整切片刀的角度。

③可重新包埋或将蜡块四周熔化,再放入包埋框中
补蜡,修理蜡块时组织块周围保留的石蜡以2mm
左右为宜。

④蜡块过硬可适当加些蜂蜡,或更换熔
点较低的石蜡重新包埋。

⑤将蜡块放入冰箱内延长冰冻时间,然后迅速切片。

2切片弯曲
常见原因:①组织成分及形状不规则。

②蜡块
9染色浅、深、不均、色素沉着
常见原因:①固定液久存或者脱蜡不干净。

②
苏木精过染或伊红过染。

③切片不均匀。

④封固时
二甲苯已挥发完毕[3]。

⑤福尔马林色素[17]。

解决方法:①在备用的甲醛中放入适量大理石
或白色粉笔作为中和剂,或经常更换脱蜡剂[18]。

②苏木精过染使组织呈深紫色,可延长分化和返蓝时间;伊红过染可通过水洗减轻伊红颜色[19]。

③切片均匀。

④封固前当二甲苯挥发后应重新放入到二甲苯中透明。

⑤在脱蜡水洗后可用10%饱和苦味酸
无水乙醇溶液处理30min[20]。

10切片褪色[21-22]
常见原因:①染色前脱蜡不彻底。

②染色过程
中脱水不干净。

③苏木精染液PH值过小,或者伊红染液加促染剂冰醋酸过多。

④载玻片和盖玻片不呈中性。

⑤在潮湿多雨时封闭切片,导致湿气进入。

⑥二甲苯被氧化,生成苯甲酸和邻苯二甲酸而成酸性,可使碱性燃料褪色。

⑦切片在阳光下爆晒。

解决方法:①染色前彻底脱蜡。

②染色过程中
脱水时间要充足。

③彻底清洗载玻片和盖玻片,使之呈中性。

④最好在干燥季节制作切片。

⑤切片复染。

⑥封固剂和切片避免阳光直射,以免氧化变酸。

⑦避光保存。

11切片封固不良[23-24]
常见原因:①封固时二甲苯已挥发完毕。

②封
固剂过稀或太稠。

③切片厚薄不匀。

③切片未展开。

④封固方法不当。

⑤组织脱水不彻底。

解决方法:①封固前当二甲苯挥发后应重新放
入到二甲苯中透明。

②封固剂浓度要适当。

③切片完全展开,无皱褶、无气泡。

④封固时先将盖玻片一侧放置于滴有树胶的组织切片上,然后缓慢放下将空气完全排除避免产生气泡。

⑤彻底脱水。

总之,石蜡切片的过程并不复杂,但上述问题常会出现,如不及时找出原因进行处理,往往会影响整个制片过程。

这时就应根据具体情况找出原因,据此找到解决问题的方法。

制作高水平的切片需要长期的摸索和改进,掌握好这门基础的实验技术对从事科研和临床诊断等领域的工作具有重要的意义。