柱色谱法标准操作规程

柱色谱法标准操作规程
柱色谱法是将固定相装在柱内，使样品随流动相沿一个方向移动而达到分离的方法。

（《中国药典》2010年版二部附录V C）附录收载的柱色谱法包括吸附柱色谱法和分配柱色谱法。

1 吸附柱色谱
吸附柱色谱法是利用色谱柱内吸附剂对于样品中各组分的吸附能力的差异以达到分离目的的方法。

1.1 吸附剂常用的有：氧化铝、硅胶、聚酰胺、大孔吸附树脂等。

吸附剂的颗粒应尽可能大小均匀，除另有规定外，通常多采用直径为0.07～0.15mm的颗粒。

1.2 色谱柱色谱柱为内径均匀、下端缩口或具活塞的硬质玻璃管，下端通常用棉花或玻璃纤维塞住，以防止吸附剂流失。

1.3 吸附剂的填装
1.3.1 干法将吸附剂均匀地一次加入至色谱柱中，振动管壁使其均匀下沉，打开色谱柱下端活塞，沿管壁缓缓加入洗脱剂；待柱内吸附剂全部湿润，且不再下沉为止，也可在色谱柱内加入适量的洗脱剂，旋开活塞，使洗脱剂缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。

装柱完毕，关闭下端活塞，操作过程中应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂。

1.3.2 湿法将吸附剂与洗脱剂混合均匀，采用搅拌除去其中气泡，打开下端活塞，缓缓倾入色谱柱中，然必要时，振动管壁使气泡排出，用洗脱剂将管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。

待平衡后，关闭下端活塞，操作过程中应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂。

1.4 供试品的加入
1.4.1 干法加入法如供试品不易溶解于初始洗脱溶剂，可预先将供试品溶于易溶溶剂中，用少量吸附剂搅拌，采用加温或挥干方式除去溶剂，待干燥后，再将带有供试品的吸附剂加入至已装好的吸附剂上面，加入洗脱剂。

1.4.2 湿法加入法先将色谱柱中洗脱剂放至与吸附剂面相齐，关闭活塞；用少量初始洗脱溶剂使供试品溶解，沿色谱管壁缓缓加入供试品溶液，应注意勿使吸附剂翻起（亦可
在吸附剂表面放入面积相当的滤纸），待供试品溶液完全转移至色谱管中后，打开下端活塞，使液面与柱面相齐，加入洗脱剂。

1.5 洗脱除另有规定外，通常按洗脱剂洗脱能力大小，递增方式变换洗脱剂的品种和比例，分别分步收集流出液。

收集流出液通常有两种方式，一是等份收集（亦可用自动收集器），二是按变换洗脱剂收集。

1.6 注意事项
1.6.1 色谱柱的大小，吸附剂的品种和用量，以及洗脱时的流速，均按各品种项下的规定。

1.6.2 在装柱及洗脱的操作过程中，应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂，防止断层和旁流。

1.6.3 通常应收集至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变洗脱剂的品种或比例。

2 分配柱色谱
分配柱色谱法是根据加到色谱柱上的待测物质在两种不相混溶（或部分混溶）的溶剂（固定相、流动相）之间的分配系数不同来分离各组分的方法。

2.1 载体（支持剂或担体）载体只起负载固定的作用，本身惰性，不能有媳妇作
用。

常用的有：吸水硅胶、硅藻土、纤维素。

2.2 色谱柱同吸附柱色谱。

2.3 装柱装柱前需将载体与固定液充分混匀，装柱，必要时用带有平面的玻棒
压紧。

2.4 供试品的加入与洗脱
2.4.1 供试品如易溶于流动相中，用流动相溶解后移入色谱柱中载体上端，然后
加流动相洗脱。

2.4.2 供试品如易溶于固定液中，用固定液溶解后加入少量载体混合，待溶剂挥
散后，加到色谱柱上端，然后加流动相洗脱。

2.4.3 供试品如在上述两项中均不溶解，则取其他易溶剂溶解，待溶剂挥散后，
同2.4.2操作。

2.4.4 注意事项
2.4.4.1 流动相需先加固定液混合使之饱和，以避免洗脱过程中两相分配的改变。

2.4.4.2 操作过程中，应保持吸附层上方有一定量的流动相，防止断层和旁流。