免疫亲和净化－超高效液相色谱－串联质谱法测定食品中玉米赤霉烯酮类真菌毒素

免疫亲和净化－超高效液相色谱－串联质谱法测定食品中玉米赤霉烯酮类真菌毒素
作者：宁阳阳
来源：《中国食品》2021年第21期
当前在玉米赤霉烯酮类的真菌毒素检测中，使用液相色谱和液相色谱-质谱的方法较多，本文则构建了一种针对食品中6种玉米赤霉烯酮类真菌毒素的免疫亲和净化-超高效液相色谱-串联质谱检测法，包括玉米赤霉酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮。

本检测方法的前处理工序非常简便，利用免疫亲和柱进行净化及液标法进行定量，能够同时测定6种玉米赤霉烯酮类真菌毒素。

除了谷物以外，本检测方法还能应用于肉、蛋、乳等食品的检测。

一、材料和仪器
1.材料和试剂。

（1）样品：在市场购买大米、麦片、牛肉、猪肉脯、鸡蛋、牛奶等当作样品，大米和麦片研磨成粉，牛肉和猪肉脯捣碎，鸡蛋和牛奶混匀。

（2）试剂：乙腈，色谱纯;乙酸钠，分析纯;玉米赤霉酮标准品、α-玉米赤霉烯醇标准品、β-玉米赤霉醇标准品、α-玉米赤霉醇标准品、β-玉米赤霉烯醇标准品、玉米赤霉烯酮标准品;玉米赤霉烯酮类免疫亲和柱;β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯。

（3）标准储备溶液：称取10mg玉米赤霉烯酮类的各种标准品，置于10mL棕色容量瓶中，利用乙腈进行溶解后定容，制成1mg/mL的标准储备溶液，在-18℃的条件下避光保存。

（4）混合标准溶液：取100μL上述制成的各类标准储备溶液，利用乙腈定容至10mL，制作成10μg/mL的混合标准溶液，在-18℃的条件下避光保存。

2.仪器。

GM200型刀式研磨仪;ACQUITYTM超高效液相色谱-TQS质谱仪;组织捣碎机;T18均质器。

二、实验和方法
1.样品处理方法。

（1）谷物。

取粉碎样品25g，添加氯化钠5g，再添加体积分数为80%的乙腈溶液100mL，搅拌提取2min，然后放于离心管（50mL）中，4000r/min离心5min。

取10mL上层提取液，加水40mL并混匀，10000r/min离心5min。

取20mL上清液，以每秒1-2滴的速度通过免疫亲和柱，然后用水10mL淋洗亲和柱2次，待空气至亲和柱中，并抽干小柱。

利用乙腈
2.0mL进行洗脱，将洗脱液收集在玻璃试管中，再用氮气（40℃以下）吹至近
干。

对残留物则使用体积分数为50%的乙腈溶液0.5mL进行再次复溶并混匀，经0.22μm滤膜过滤后待测。

（2）肉及肉制品、蛋、乳。

取5g搗碎样品放置在具塞离心管（50mL）中，添加5mL浓度为0.2mol/L 的乙酸钠缓冲液与0.025mL的β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶并混匀，在37℃水浴中振荡12h。

水解后添加2g氯化钠和20mL乙腈，高速均质1min，超声提取20min，10000r/min冷冻离心5min。

取10mL上层提取液，加水40mL并混匀，10000 r/min离心
5min。

取20mL上清液，以每秒1-2滴的速度通过免疫亲和柱，然后用水10mL淋洗亲和柱2次，待空气至亲和柱中，并抽干小柱。

利用乙腈2.0mL进行洗脱，将洗脱液收集在玻璃试管中，再用氮气（40℃以下）吹至近干。

对残留物则使用体积分数为50%的乙腈溶液0.5mL进行再次复溶并混匀，经0.22μm滤膜过滤后待测。

2.测定方法。

（1）色谱条件。

色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3，规格为
100mm×2.1mm×1.8µm;柱温：40℃;流速：0.3mL/min;进样体积：10μL;样品室温：15℃;流动相：乙腈、水，梯度洗脱。

（2）质谱条件。

电离源：电喷雾质谱负离子模式;毛细管电压：2.5kV;源温度：150℃;锥孔电压：20V;脱溶剂气温度和速度：500℃、800L/h;碰撞气流速：0.22mL/min;锥孔气流速：150L/h。

三、结果和分析
1.检出限、定量限、线性范围。

配制质量浓度为0.1μg/L、0.2μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0 μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L的6种真菌毒素标准混合溶液，开展超高效液相色谱-串联质谱分析，以加标样品检测的色谱峰信噪比高于3和高于10分别确定检出限和定量限。

结果表明，6种化合物在0.1-100μg/L线性范围内表现出良好的线性关系，
R2>0.99;6种真菌毒素运用本方法的检出限和定量限分别为0.05μg/kg、0.2μg/kg。

2.样品加标回收率。

将包含6种真菌毒素的标准混合溶液分别添加至25g谷物和5g肉及肉制品、蛋、乳的样品中，最终的添加量分别是0.2μg/kg、1.0μg/kg、60.0μg/kg，使用上述方法开展提取和净化分离以及确证，每个添加水平进行6份样品的测定，进而得出6种化合物的回收率、相对标准偏差，结果进一步表明，在不同添加水平下，化合物均有满意的回收率及方法重复性。

本文通过构建超高效液相色谱-串联质谱检测的方法，对食品中玉米赤霉烯酮类6种真菌毒素进行同时检测，经免疫亲和柱进行净化后，可以有效实现在谷物制品和肉、蛋、奶等样品中高效的回收率。

同时，本文提出的方法灵敏度非常高，整体操作非常简单，具有较高的重复性，能够对食品中的玉米赤霉烯酮类真菌毒素进行相应的检测。

作者简介：宁阳阳（1986-），男，汉族，辽宁海城人，大学本科，中级工程师，研究方向为粮油储检。