胶原蛋白酶——Worthington四种类型的粗胶原酶
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胶原蛋白酶——Worthington四种类型的粗胶原酶
胶原蛋白酶,又称骨胶原酶,简称胶原酶。
由溶组织梭菌(Clostridum histolytirum)制取而得。
Worthington 已经建立了几种类型的粗胶原酶:类型 1、2、3 和 4。
· 1 型粗胶原酶具有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
· 2 型含有较高相对水平的蛋白酶活性,尤其是梭菌蛋白酶。
· 3 型含有最低水平的二级蛋白酶。
· 4 型被设计成胰蛋白酶活性特别低,以限制对膜蛋白和受体的损害。
Worthington无动物型 AFA、AFB 和 AFC、STZ1 和 STZ2胶原蛋白酶源自在完全不含动物成分的培养基中生长的培养物,设计用于必须防止引入潜在动物源性病原体的生物加工应用。
二级蛋白酶的水平与 1 型和 2 型胶原酶相似。
胶原蛋白酶测定是Mandl的改进,其中将胶原酶与天然胶原一起温育5小时,并使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法测定胶原分解的程度。
释放的氨基酸以每毫克胶原酶微摩尔亮氨酸表示。
Worthington胶原蛋白酶用途:
粗胶原酶广泛用于酶促原代细胞分离和组织解离程序。
大多数研究人员要么使用粗制胶原酶制剂,例如 1、2、3 和 4 型,要么使用色谱纯化的胶原酶(代码:CLSPA);后者通常与二级酶如弹性蛋白酶、透明质酸酶等结合。
为了获得最佳结果,必须针对要解离的组织调整蛋白水解活性的较精确混合。
不同组织的类型和有效性之间的相关性很好,但并不完美,并且可能部分取决于使用参数和目标以及批次间的差异。
Worthington胶原蛋白酶相关研究:
胶原蛋白 (CL)
脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF) 弹性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)
透明质酸酶 (HSE/HSEP)
中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)
木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)蛋白酶 K (PROK) 胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)
胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)
细胞分离优化系统 (CIT)
肝细胞分离系统 (HIS)
新生儿心肌细胞分离系统 (NCIS)
木瓜蛋白酶解离系统 (PDS/PDS2)。