裸鼠成瘤实验方法

裸⿏成瘤实验⽅法
肿瘤细胞有良性和恶性之分；癌细胞则是恶性，是会扩散的细胞。

肿瘤细胞包含癌细胞，它们共同特点是从基因⽔平上失控的、能⽆限增殖的细胞。

癌细胞有三个显著的基本特征即：不死性、迁移性和失去接触抑制。

常规较容易成瘤的细胞
Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(⼤细胞肺癌)， SK-OV-3（卵巢癌），MCF-
7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（⼈⿊⾊素瘤细胞），SGC7901 ⼈胃肿瘤细胞，
CNE（⿐咽癌），H1299（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29/HCT116（结肠癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌， CT26 （⼩⿏结肠癌细胞），U87 （⼈胶质瘤细胞）， MGC-803（⼈胃癌细胞），PC-3 （⼈前列腺癌细胞）。

裸⿏的选择
实验室常⽤的是BALB/c-nu裸⼩⿏ ,随着裸⼩⿏年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸⿏体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验⼀般采⽤4--6周龄的裸⿏。

裸⿏成瘤实验技巧
1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞⽣长状态⼀定要好，取处于对数⽣长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。

收集细胞前⼀天晚上更换新鲜培养基。

2、胰酶消化细胞后⽤预冷的PBS洗两遍，⽬的为去除细胞中残余的⾎清。

3、⽤PBS或者⽆⾎清培养基吹打细胞沉淀⾄合适的浓度，⼀般⽪下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/⽀，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的⽣成，基质胶与PBS或⽆⾎清的⽐列为1:1。

4、细胞消化后应尽快接种到裸⿏⽪下，⼀般尽量在半⼩时内完成（如果接种量⼤，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。

5、选择的裸⿏⼀般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择⾎供丰富区域，如腋窝中后部。

6、接种前⽤枪将细胞悬液充分的吹散，防⽌细胞成团⽽降低细胞成活率，并且导致⼩⿏接种细胞数量的差异过⼤。

7、接种时，针头在⽪下进针深⼀点，约1cm深，针头在⽪下左右滑动⼏次，以便细胞接种成团，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

8、如何保定裸⿏?左⼿拇指和⾷指捏紧裸⿏颈背部⽪肤，⼩拇指夹住裸⿏尾巴。

9、接种后1-2周左右可以见到⽪下开始出现肿块。

10、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，⼀般⽪下成瘤的周期为1-2个⽉。

肿瘤不宜⽣长过⼤，⼀般不要超过2000mm3。

11、肿瘤⼤⼩测量⼀般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。

V=1/2*a*b2 (a为长轴，b为短轴)。

12、⽪下瘤取下后⼀部分冻液氮⽤作以后提蛋⽩和RNA，⼀部分福尔马林固定⽤做免疫组化、免疫荧光等。

常见问题及解答
1、这个实验为什么⽤裸⿏⽽不⽤普通的⽼⿏或者⼩⽩⿏？
裸⿏成瘤实验⽤的裸⿏，最⼤的特点是没有胸腺等免疫器官，它的免疫⼒⼏乎为零，对肿瘤细胞没有免疫作⽤，易于成瘤。

2、瘤块长起来⼜消失？
肿瘤块先缩⼩，后变⼤很常见，很可能是炎症反应，肿瘤细胞被⼩⿏⾃⾝吸收，继续观察肿瘤
细胞吸收之后是否经过⼏周还能长出来，长不起来建议换⿏。

3、是否可以在⼀只⼩⿏进⾏多个点接种？
不可以，⼀只⽼⿏就只能接种⼀个点，因为⼀个⽼⿏⾝上有多个肿瘤块的情况下，可能会相互影响。

4、肿瘤长不出来是怎么回事？
第⼀：肿瘤⽣长周期很慢，⼀周开始⽣长肿块，⼤约需要1~2个⽉才能长成肿瘤；
第⼆：可能是细胞状态差，活⼒不好，或是肿瘤细胞不易成瘤，需加⼊基质胶辅助或增⼤接种量或更换细胞系；
第三：⼀⽅⾯可能是⼩⿏周龄太⼤，或⼩⿏免疫排斥，建议更换免疫缺陷程度更⼤的⼩⿏（Nod-scid⼩⿏）。

5、肿瘤体积相差很⼤，⼤⼩不⼀？
⾸先，并不是所有的肿瘤都能够长得均⼀形态。

其次，这可能跟⼩⿏周龄及接种细胞量不⼀致导致，建议重新接种。

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