石蜡包埋步骤（推荐五篇）

石蜡包埋步骤（推荐五篇）
第一篇：石蜡包埋步骤
石蜡包埋步骤
1组织脱水、渗透与包埋脱水：○50% 乙醇（90min）→70% 乙醇（90min）→85%乙醇(90min)→95%乙醇(90min)→100%乙醇(60min)→100%乙醇(60min)。

注：○1若组织数量过多时，应分开脱水（20个组织左右）
○2脱水的体积至少为组织提及的4倍
○3乙醇纯度越高时，脱水的时间减少，否则引起组织过硬
○4 最好能搅拌，使脱水充分透明：○1/2乙醇＋1/2二甲苯→ 二甲苯→ 二甲苯，每步60min。

注：在二甲苯的时间不宜过短或过长。

时间过短引起透明不充分，影响后面渗透包埋；时间过长则引起组织变脆。

渗透：○ 1/2二甲苯＋1/2石蜡(90min)→石蜡I(120min)→石蜡II(120min),62℃。

注：若出现从脱水到渗透时间太长，可在1/2二甲苯＋1/2石蜡或石蜡I的步骤停下,即将进入1/2二甲苯＋1/2石或石蜡I后，立即冷却，将组织封进里面，到第二天复融；第二天融解时温度不能超过65℃，并且需到完全溶解时开始进入步骤算时间。

包埋：○将组织放入盛有石蜡的模具中，摆好位置，于石蜡包埋机的冷台上冷却。

注：包埋时，切忌用手按石蜡盒中间，因为冷凝后，中间仍较软。

切片和贴片
将包埋好的组织块于切片机中约5µm，放于漂片机中展开，再将切片捞于多聚赖氨酸附膜载玻片上，编号，70℃干烤1h，贴片后60℃烤5h。

第二篇：石蜡包埋人体组织STR检验的探讨
【摘要l目的探讨普通甲醛对人体组织dna的影响及提高str检出率的手段。

方法取少量石蜡包埋组织，65℃水浴脱蜡，chelex一100法提取dna，pcr扩增，循环次数分别为28次和28+6次，扩增产物
经310型测序检测。

结果普通甲醛固定5 d以内的组织基本上可检出amel及15个str基因座。

固定时间延长，检
出率下降；pcr循环次数增加，灵敏度增加，但有错误分型的情况。

结论普通甲醛固定时问长短直接影响pcr—str的检验。

减少模板量有利于pcr反应成功，pcr次数为28+6时，灵敏度增加，但应谨慎判读结果，以免错误分型。

【关键词】石蜡包埋组织；dna提取；str
【中图分类号】d919．
2【文献标识码】b
【文章编号】1007—9297(2006)01—0050—0
3在某些民事案件中。

成功对石蜡包埋组织进行
pcr—str分型来判断其归属问题。

对案件的解决起到
重要作用。

目前国内医院及科研机构大多使用普通
10％甲醛固定人体组织。

普通10％甲醛固定石蜡包埋的组织中dna降解相对严重，提取高质量的dna并
进行pcr—str分型较为困难。

实践中人体组织固定
时间长短不一，但以1周左右多见。

本文的目的是探
索普通10％甲醛固定时间对pcr—str分型的影响以
及提高检出率的适当方法。

材料与方法
一、材料
石蜡包埋人体组织均取自本所病理室。

5个无关
个体的心、肾组织用1o％普通甲醛固定5 d、8 d、12 d
和15 d以上时．剪取组织边缘甲醛完全浸润处。

石蜡
包埋，常规切片he染色，显微镜下观察确保组织结构
清晰，无自溶、坏死和大片出血后，作为本研究材料使
用。

二、方法
1．预处理。

切取8 ixm厚的石蜡包埋组织，尽量剔
除石蜡部分，放入0．5 ml离心管中；或挖取小米粒大的石蜡包
埋组织，放入0．5 ml离心管中。

加入500
ddw，65c【=保温10min脱蜡，弃除液体。

【】
2．dna的提取。

向每个离心管中加入150 ixl的5％chelex一100和8 l pk(20mg／m1)，56 c【=保温过夜，次日再加4 lpk(20mg／m1)，再消化4h，振荡后，100cc
8rain，13000 rpm／min离心3rain，4 oc备用。

3．pcr扩增。

采用identifiler荧光复合扩增。

采用l反应体系，热循环条件：95 c【=预变性l1 rain；9
4oc 1rain，59 oc lmin，72℃ lmin，循环次数分别为28
次，28+6次(循环28次后，每反应管加0．3 ixl ampli
taq gold dna聚合酶，再循环6次)；[2】最后60℃延伸
45raino
4．上样检测。

取1．5 l dna pcr产物与l2 l甲
酰胺(formamide)、0．4 ixl内标(liz)混合后，经过abi
310 dna自动测序仪电泳荧光检测，使用genescan(3．
1．2)和genotyper软件分析得出基因分型结果。

结果
1．经普通甲醛固定5 d、石蜡包埋的心和肾组织基
本上能检出完整的str等位基因型。

而随着固定时间的延长，能检出的str基因座数目逐渐减少．出现了
大片段等位基因缺失、等位基因扩增不平衡的现象
(见图1。

2)。

本次试验中观测到最短固定时间为8 d的组织，因大片段等位基因缺失而造成假纯合子的错
误分型(见图3)。

而固定时间超过15 d时。

则最多只
能检出性别及个别小片段str基因型，常伴有分型错
误。

2．当pcr循环数从28次增加到28+6次(先循环
28次再加酶循环6次)时，可以检出以前信号弱、无法
判读的峰，提高了检出率(见图4)。

循环次数的增加，dna检测灵敏度有所提高。

但随着固定时间的延长，dna降解严重，增加扩增循
环次数．易引起部分str
基因座的分型错误．如图5中d3s1358基因座出现的pull—up 峰。

讨论
【作者简介】~gg(1971-)，女，硕士研究生，江西九江人，主要从事法医dna工作。

tel：+86—10—68621174；e—mail：yuanliwcy@yahoo．com．cn
· 52 ·
6att~ltt4．．jd·xh fl蚰暑b-．． 14-ed-xi~
$,ia~plel4,．~"-xln fs,a暑
第三篇：石蜡切片
石蜡切片
组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。

石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。

教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。

活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织***，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。

石蜡切片制作基本技术石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。

一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。

1.取材应根据要求选取材料来源及部位。

例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。

材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。

2.固定用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。

固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。

固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。

例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。

固定液可分为单一固定液及混合固定液。

前者有甲醛（蚁醛、福尔马林）、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸（四氧化锇）、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa 液（配方见有关技术书籍）。

因此，应根据所要显示的内容来选择适宜的固定液。

10％福尔马林（4％甲醛）或10％磷酸缓冲福尔马林是病理切片常规使用的固定液，不仅适用于常规HE（苏木精-伊红）染色，还可以用于组织学有关的其他技术的切片染色。

固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。

3.洗涤与脱水固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。

多数用流水冲洗；使用含有苦味酸的固定液固定的则需用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水。

固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不脱尽，苯类不能浸入。

酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30％或50％酒精开始，经70％、85％、95％直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1～数小时，如不能及时进行各级脱水，材料可以放在70％酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化，不宜处理过久。

正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陆环等也可做脱
水剂。

4.透明纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。

材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。

常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各种透明剂均是石蜡的溶剂。

通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍。

透明剂的浸渍时间则要根据组织材料块大小及属于囊腔抑或实质器官而定。

如果透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，就不易切出完整切片，最长为数小时。

5.浸蜡与包埋用石蜡取代透明剂，使石蜡浸入组织而起支持作用。

通常先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1～2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍3小时左右，浸蜡应在高于石蜡熔点3℃ 左右的温箱中进行，以利石蜡浸入组织内。

浸蜡后的组织材料块放在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的位置），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中冷却，即做成含有组织块的蜡块。

容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。

如果包埋的组织块数量多，应进行编号，以免差错。

石蜡熔化后应在蜡箱内过滤后使用，以免因含杂质而影响切片质量，且可能损伤切片刀。

通常石蜡采用熔点为56～58℃或60～62℃两种，可根据季节及操作环境温度来选用。

6.切片包埋好的蜡块用刀片修成规整的方形或长方形，以少许热蜡液将其底部迅速贴附于小木块上，夹在轮转式切片机的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。

切片刀的锐利与否、蜡块硬度适当都直接影响切片质量，可用热水或冷水等方法适当改变蜡块硬度。

通常切片厚度为4～7微米，切出一片接一片的蜡带，用毛笔轻托轻放在纸上。

7.贴片与烤片用粘附剂将展平的蜡片牢附于载玻片上，以免在以后的脱蜡、水化及染色等步骤中二者滑脱开。

粘附剂是蛋白甘油。

首先在洁净的载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，再将一定长度蜡带（连续切片）或用刀片断开成单个蜡片于温水（45℃左右）中展平后，捞至玻
片上铺正，或直接滴两滴蒸馏水于载玻片上，再把蜡片放于水滴上，略加温使蜡片铺展，最后用滤纸吸除多余水分，将载玻片放入45℃温箱中干燥，也可在37℃温箱中干燥，但需适当延长时间。

8.切片脱蜡及水化干燥后的切片需脱蜡及水化才能在水溶性染液中进行染色。

用二甲苯脱蜡，再逐级经纯酒精及梯度酒精直至蒸馏水。

如果染料配制于酒精中，则将切片移至与酒精近似浓度时，即可染色。

9.染色染色的目的是使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色以便于观察。

未经染色的细胞组织其折光率相似，不易辨认。

经染色可显示细胞内不同的细胞器及内含物以及不同类型的细胞组织。

染色剂种类繁多，应根据观察要求及研究内容采用不同的染色剂及染色方法，还要注意选用适宜的固定剂才能取得满意的结果。

经典的苏木精（Hematoxylin）和伊红（曙红，Eosin）染色法是组织学标本及病理切片标本的常规染色，简称HE染色。

经HE染色后，细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。

由于苏木精是带阳离子的染料，染液呈碱性，核内染色质及胞质内核糖体等物质对这种染料有亲和性，称嗜碱性；而带阴离子的染料伊红配制的染液呈酸性，对这种染料的亲和性，称嗜酸性。

有时不同的组织结构还需要用特殊的染料及染色方法加以显示，称特殊染色。

有些细胞组织经硝酸银浸润后，可使溶液中银离子还原成金属银或银粒附着在细胞组织上，呈棕黑色，这种性质称亲银性，而有些细胞组织本身不能使硝酸银的银离子还原成金属银，还需加还原剂才能将银离子还原，称嗜银性。

10.切片脱水、透明和封片染色后的切片尚不能在显微镜下观察，需经梯度酒精脱水，在95％及纯酒精中的时间可适当加长以保证脱水彻底；如染液为酒精配制，则应缩短在酒精中的时间，以免脱色。

二甲苯透明后，迅速擦去材料周围多余液体，滴加适量（1～2滴）中性树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，以免出现气泡，封片后即制成永久性玻片标本，在光镜下可长期反复观察。

注意有些染料需特定厂家生产的产品。

根据各种染色方法、组织类别及切片厚度，掌握适宜的染色时间，才能达到较好的染色效果。

石蜡制片程序及环节繁多，需数日才能完成1个周期，但切片可长期保存，供教学、科研及病理诊断及复察，并可利用蜡块作其他项目的回顾性研究。

病理常规制片过程中已简化了一些细的环节或缩短了部分处理时间以适应临床需要（可缩短至2天）。

虽然冰冻切片大大快于石蜡切片，但所显示的形态结构却不如前者，因此病理医生最后还需要根据石蜡切片作出准确诊断。

近些年来，在病理常规制片过程中采用了微波技术，从而大大缩短了制片过程，而且对形态结构并没有影响。

微波是一种波长很短、频率却很高的高频电磁波［波长为1米～1毫米，频率为300兆赫（MHz）～300千兆赫（GHz）］。

组织经微波辐射后加速组织内部分子的高速运动，以使液体的运输加快，增加弥散、渗透和交换效率，从而加速组织的固定、脱水、透明、包埋和染色各个环节。

例如常规福尔马林固定需数小时～1天，而且能引起组织收缩及某些抗原成分不同程度的受到破坏，微波固定仅需1～2分钟，且可减少抗原的丢失和损害。

选择适当的档次（功率）、辐射时间和温度是极为重要的。

目前微波技术的应用在国内尚处于起步阶段，许多技术应用环节尚需进一步摸索。

第四篇：石蜡切片方法
石蜡切片方法实验用品 1.1 器材
切片机，刀片，恒温箱，镊子，单面刀片，小台木，酒精灯，包埋纸盒，染色缸，蜡杯。

1.2 试剂
中性甲醛固定液，Harri’s苏木精，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇分化液，各级酒精（50%、70%、85%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。

Ⅰ 中性甲醛固定液：
40％甲醛120 ml，蒸馏水880 ml，磷酸二氢钠4 g，磷酸氢二钠13 g Ⅱ Harri’s苏木精：
苏木精1 g，无水乙醇，10 ml，硫酸铝钾，20 g，蒸馏水，200 ml，氧化汞，0.5 g，冰醋酸，8 ml 分别用无水乙醇溶解苏木精，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即用冰水冷却，恢复至室温后过滤备用。

至少存放2星期才能使用。

Ⅲ 1%伊红酒精溶液：
伊红1g溶于100 ml95%酒精溶液。

Ⅳ 1%盐酸乙醇分化液：盐酸 1份，70%酒精 100份Ⅴ 甘油蛋白贴片剂：
蛋白 50 ml，甘油 50 ml，水杨酸钠或麝香草酚（防腐剂）1g 配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。

此时在其中再加等量的甘油，稍稍振摇使两者混合。

最后加入防腐剂（水杨酸钠或麝香草酚）作防腐用。

4℃可保存几个月。

实验步骤 2.1 取材
Ⅰ 在满足试验前提下，所取组织块大小应不大于1.5×1.5 cm，厚度不超过0.5 cm。

力求小而薄。

Ⅱ 力求组织材料新鲜，避免组织细胞自溶。

2.2 固定 24小时
固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20-30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。

2.3 流水洗涤过夜 2.4 脱水50％酒精1 h，70％酒精50 min，85％酒精40 min，95％酒精30 min，无水酒精30 min，无水酒精20 min。

2.5 透明
无水酒精、二甲苯等量混合液30 min，二甲苯20 min，二甲苯20 min。

2.6 透蜡
放入二甲苯和石蜡各半的混合液30 min，再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各40－50 min。

透蜡时间根据组织可延长。

透蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在65 ℃左右（比石蜡熔点高3 ℃左右，做免疫组化试验应尽量使用低熔点石蜡），注意温度不要过高，以免组织发脆。

2.7 包埋
从温箱中取出盛放纯石蜡（石蜡一般要事先熬几个小时，如有杂质要过滤）的蜡杯，倒入包埋用的纸盒中，轻轻将纸盒两侧的把手提起，将纸盒底部浸入水中，使底部稍微凝固。

取出存放材料的蜡杯，迅速轻轻地用镊子（酒精灯烤热）夹取材料于纸盒底部，并摆放整齐。

将纸盒慢慢地平放在水盆中，待上层形成一层薄膜时，立即使它沉入水中，使盒中包埋块迅速凝固。

待石蜡完全凝固（约30 min）后即可
取出备用。

2.8 切片（20 ℃最为适宜）
Ⅰ 石蜡块的固着：先将蜡块用刀片切成方形或长方形，组织四周留下2—3 mm宽的石蜡。

点燃酒精灯，然后用烤热的蜡铲放在台木和蜡块之间，利用蜡铲的温度熔化两者的蜡，把蜡块粘附在台木上。

Ⅱ 整修：用单面刀片将蜡块四周修整平行Ⅲ 切片的方法：
⑴将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。

⑵摇动快速进退手轮，使石蜡块与刀口贴近，但不超过刀口。

⑶调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15-30度。

⑷调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般4-6微米。

⑸一切调整好后就可以切片。

此时右手摇动大手轮，左手持毛笔将蜡带提起。

⑹切成的蜡带到20-30厘米时，右手用另一支毛笔将蜡带挑起，平放在牛皮纸上（注意：靠刀面的一面较光滑朝下）。

2.9 贴片
Ⅰ 取一片清洁的载玻片，滴一滴粘片剂于玻片中央，加以涂抹。

Ⅱ 滴1－2滴的蒸馏水已涂粘片剂的载玻片上。

Ⅲ 用小镊子夹取预先用刀片割开的蜡带，放在水面上，注意蜡片粗糙面朝下。

Ⅳ 在酒精灯火焰上方适度加热至蜡片舒展。

2.10 脱蜡复水
石蜡切片经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5－10 min，然后放入100%、95%、85%、70%、50％等各级酒精溶液中各3－5 min，再放入蒸馏水中3 min。

2.11 染色
Ⅰ 切片放入苏木精中染色约20 min。

Ⅱ 分化，将切片放入1%盐酸乙醇分化液中约数秒至数十秒钟。

如果染色适中，可取消此步骤。

Ⅲ 95％酒精3－5 min，用0.5%伊红乙醇液复染3 min。

2.12 脱水，中性树胶封片
95％酒精3－5 min，100％酒精10－15 min，中间换一次酒精。

二甲苯3 min，中性树胶封片。

二甲苯应尽量保持无水，应经常更换。

切片如在二甲苯中出现白雾现象，说明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。

在桌上放一张洁净的吸水纸，将含材料的载玻片从二甲苯中取出放在纸上（切片一面向上），迅速地在切片的中央滴一滴树胶（千万不能待二甲苯干燥后再进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下，避免产生气泡。

第五篇：病理石蜡切片心得体会
病理石蜡切片心得体会
石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。

石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。

我从事病理技术工作刚刚一年多，细细回味自己在实际工作中的切片过程，有一点点心得体会，在这里向大家做一简单汇报。

一、组织脱水：
要想切出一张好的石蜡切片，组织处理非常重要。

经典的脱水方法，酒精脱水，二甲苯透明，石蜡浸蜡是最简单、方便、容易掌握，也是最便宜效果最好的方法。

但脱水过程中尤其要注意的是梯度酒精脱水。

在实际工作中，有时为了省事，往往采取倒掉第一缸酒精，后面往前移，这样会导致第一缸酒精浓度偏高，高浓度酒精，能使蛋白质凝固，使组织表面发硬，酒精无法渗透到组织深处，造成组织脱水效果不佳，从而不能切出优质石蜡切片。

我的做法是，在更换液体时，尽管是后边液体往前边倒，但一定要测量其浓度，不合适就要调整到合适为止。

这样像子宫平滑肌瘤这样的硬组织也能切除很好的切片。

二、组织包埋：
组织包埋好坏同样会影响石蜡切片质量。

有些小组织，特别是内窥镜活检组织，如果组织没切全，就有可能会影响诊断。

因此。

小组织切出优质切片的重要步骤是把好组织包埋这一关。

首先，最好选用5x5mm或更小的包埋底模，这样的底模即可将组织完全置于蜡块切面的中心，又可连续切片并将蜡片捞在载拨片相对集中的区域而利于阅片诊断。

另外，包埋时先把底模放入少许石蜡，将组织移放在底模里
移至冰上，待石蜡略冷却再用齿科镊子将组织集中到一块并按压到一个平面后，再注满石蜡，平移到冰台上。

三、组织切片：
切片工艺上稍加讲究，就可做到“多”、“快”、“好”、“省”。

1、先粗切所有蜡块。

用废弃刀片将每个蜡块粗切至组织全部暴露的最大切面，边切边排序，摆放在事先做好的冰盘中冷冻。

2、全部蜡块粗切完成后，再更换新刀片细切。

将冰冻好的蜡块迅速按放固定好，先切2-3张，削去浮蜡后即可连续切片，切片时要求用力均匀柔和，摇速不宜过快或者过慢，切片厚度一般为3-5um，如为淋巴结，切片厚度应为3um，这样镜下细胞无重叠，清晰，透亮利于诊断。

切出的蜡片先放在入40℃热水中，在这种温度下，蜡片迅速舒展得非常平整，再裱贴至载玻片上。

采用这种方法切片，既有速度又节省刀片，最主要的是能切出高质量的切片。

四、染色：
染色同样会影响切片的整体质量。

染色过程中最重要的是苏木素染色后经盐酸酒精分化，流水冲洗即反蓝过程，时间一定要充分，否则切片再好，镜下结构也不够清晰。

切片经过染色后，通过各级酒精脱水，由低浓度到高浓度，低浓度酒精对伊红有分化作用，时间要短，向高浓度时逐步延长脱水时间，染色经过脱水后必须经过二甲苯处理，这样的切片看切来才晶莹剔透，使阅片者赏心悦目。

以上是我在工作中得出的一点体会，不足之处请各位批评指正。