一种快捷有效的构建cDNA文库的方法

一种快捷有效的构建cDNA文库的方法
徐远峰;黄文峰;高艳梅;翟金玲;黄惜
【期刊名称】《贵州科学》
【年(卷),期】2009(027)003
【摘要】构建cDNA文库是研究基因组功能基因一种有效的手段,传统的建库方法通常需要在双链cDNA两端分别加上带限制性酶切住点的接头序列,通过酶切使之产生与质粒匹配的粘性未端,然后与质粒连接构成文库.本文介绍一种简单而且不需要核酸内切酶的构建cDNA文库的方法.该方法的主要步骤包括:(1)通过反转录合成cDNA第一条链,通过置换底物的方式ceDNA 3'末端合成接头序列.(2)利用cDNA两端的接头引物,通过Taq DNA合成酶PCR扩增合成cDNA第二条链.(3)将PCR产生的双链cDNA直接与T-载体连接.(4)将连接物转化大肠杆菌,得到cDNA文库.利用本方法,我们成功构建红树植物红海榄的cDNA文库.PCR结果显示插入的片段分布在0.5～3.0 kb之间,大部分cDNA的长度在500～1000bp之间,表明cDNA具有较好的完整性.本方法具有操作简单、高效率、低成本、RNA 模板需要量少的特点,而且适用于任何高等生物RNA样品.
【总页数】5页(P71-75)
【作者】徐远峰;黄文峰;高艳梅;翟金玲;黄惜
【作者单位】海南大学农学院生物科学技术研究所,海南海口,570228;中国热带农业科学院橡胶栽培研究所,海南儋州,571737;海南大学农学院生物科学技术研究所,海南海口,570228;海南大学农学院生物科学技术研究所,海南海口,570228;海南大学农学院生物科学技术研究所,海南海口,570228
【正文语种】中文
【中图分类】O641.3
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